Консорциум штаммов молочнокислых и бифидобактерий Lactobacillus acidophilus KM-2, Lactobacillus acidophilus KH-1, Bifidobacterium bifidum-1, используемый для приготовления биологически активных добавок и заквасок для производства кисломолочных продуктов

(51) 12 1/20 (2010.01) 12 1/23 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ЗАКВАСОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ(57) Консорциум штаммов молочнокислых и бифидобактерий-2,-1,-1, используемый для приготовления биологически активных добавок и заквасок для производства кисломолочных продуктов. Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству заквасок, пробиотиков,биологически активных добавок,продуктов питания. Задачей настоящего изобретения является разработка консорциума микроорганизмов пробиотического действия, используемого для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов и биологически активных добавок.(72) Дудикова Галина Николаевна Магажанов Жастлек Мусагалиевич Сагындыков Утемурат Зулхарнаевич Кенчеликова Карлыгаш Калыкбековна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт перерабатывающей и пищевой промышленности(56) Предварительный патент РК 17365, 12 1/20, 12 1/16 , 23 9/127, 2006 г.(54) КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ МОЛОЧНОКИСЛЫХ И БИФИДОБАКТЕРИЙ-1,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК И 25088 Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству заквасок, пробиотиков,биологически активных добавок,продуктов питания. В настоящее время проблема дисбактериозов и кишечных дисфункций является актуальной, что обусловлено комплексом причин различного характера ухудшение экологической ситуации, рост иммунодефицитных состояний, грубое нарушение микробиоценоза в результате антибактериальной,гормональной или лучевой терапии, а также различных отрицательных социальных факторов и т.д. По данным научных исследований более 90 населения страдает теми или иными формами дисбактериозов и кишечных дисфункций. Это в свою очередь влечет за собой целый спектр заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ, работой иммунной системы, синтезом витаминов и незаменимых аминокислот, их всасыванием, а также поступлением в организм микро- и макроэлементов и т.д. Функции нормальной микрофлоры в организме являются жизненно важными и очень обширными синтезирующая, регуляторная,дезинтаксикационная, ферментативная, защитная и иммуностимулирующая(Б.А.Шендеров Медицинская микробная экология и функциональное питание). Для нормализации микробиоценоза широкое распространение получили препараты живых бактериальных культур (пробиотики), а также продукты питания,содержащие живые бактериальные клетки(Б.А.Шендеров Медицинская микробная экология и функциональное питание). Известны зарубежные моно- и комплексные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты,включающие в свой состав бифидобактерии видов., ., ., . (патент 2336886, патент 2411008, Франция патент 637297,Швейцария патент 2134179, патент 2421066 ФРГ патент 05227946, патент 0430642, Япония патент 4645667, США). В России для приготовления бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов . 1,791,792,ВКПМ -1257, Ас-1578 . В 379 М, Я 4,. МС-42, . 79-119, . 79-43(авторское свидетельство 343588, патент РФ 2215028, патент РФ 1347221, патент РФ 849779,патент РФ 2108383, патент РФ 2152993, патент РФ 2216589, патент РФ 863639, патент РФ 2078814,патент РФ 2111248). Кроме того,известен ряд препаратовпробиотиков,в состав которых входят молочноксилые и бифидобактерий (Патент РФ 2180915 Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов,заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов,биологически активных добавок, предназначенных 2 для коррекции микрофлоры детей в возрасте до 3-х лет Заявка 2001111553 от 28.04.2001 г. Опубл. 27.03.2002 г. Патент РФ 2180348 Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и нефермен-тированных пищевых продуктов,биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте от 3-х до 12-ти лет. Заявка 2001111552 от 28.04.2001 г. Опубл. 10.03.2002 г. Патент РФ 2180914 Консорциум бифидобактерий и лактобацилл,используемый для приготовления бактериальных препаратов,заквасок для кисломолочных продуктов,ферментированных и неферментированных пищевых продуктов,биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры людей в возрасте от 12 ти лет и старше. Заявка 2001111551 от 28.04.2001. Опубл. 27.03.2002 г.) Качество лечебных продуктов и препаратов во многом обусловлено свойствами штаммапродуцента - его специфической активностью и технологичностью. Использование многоштаммовых композиций позволит суммировать полезные свойства,присущие отдельным штаммам бактерий, заселять организм человека теми из них, которые наиболее физиологичны для каждого индивидуума. Это делает возможным разработку комплексных продуктов лечебного питания и бактерийных препаратов, способных обеспечить высокую колонизационную резистентность организма человека,восстанавливать его нарушенную микрофлору и способствовать снижению заболеваемости. За прототип предлагаемого изобретения выбран консорциум молочнокислых бактерийМ-3,ББ-15,ГМ-8,-8 и дрожжей 23 используемый для получения кумыса и шубата (Предварительный патент РК 17365 , опубл. 15.05.2006, бюл 5). Достоинством данной закваски является устойчивость своих компонентов в течение длительного времени. Вместе с тем предложенный консорциум адаптирован к единственной среде культивирования - молоку и используется как закваска, содержащая дрожжи, для производства национальных кисломолочных напитков, что сужает спектр его применения. Кроме того,микроорганизмы, входящие в состав консорциума,отличаются по своим пробиотическим характеристикам. Также к недостаткам стоит отнести непродолжительный срок хранения продукта, полученного с использованием данного консорциума и сложность в создании самого консорциума,состоящего из 5 культур микроорганизмов. Задачей настоящего изобретения является разработка консорциума микроорганизмов пробиотического действия, используемой для приготовления бактериальных препаратов, заквасок 25088 для кисломолочных продуктов и биологически активных добавок. Консорциум должен содержать безопасные,совместимые микроорганизмы, при совместном культивировании имеющие высокий суммарный титр, обеспечивающие ее устойчивость при длительном хранении и многократном пассировании. При использовании заявленного консорциума как закваски в молочной промышленности и при производстве БАД, полученный продукт должен иметь хорошие вкусовые и органолептические свойства,содержать живые пробиотические микроорганизмы в высоком титре продолжительное время, а также обладать питательными свойствами и иметь продолжительный срок хранения. Поставленная задача решается описываемым консорциумом микроорганизмов пробиотического действия, содержащейКМ 2 (КНИИППП В-180),1 (КНИИППП В-181) и 1(КНИИППП В-182),используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов и биологически активных добавок. Микроорганизмы были выделены из традиционных молочных продуктов и депонированы в коллекцию микроорганизмов Казахского НИИ перерабатывающей и пищевой промышленности(КНИИППП). Имеется заключение ТОО Нутритест Казахского института питания о безопасности и безвредности этих культур. Штаммы молочнокислых и бифидо бактерий,входящие в состав консорциума, не являются антогонистистами в отношении друг друга, что позволяет их совместно культивировать. Консорциум содержит молочнокислые и бифидобактерии .КМ-2, .К-1,. Изобретение позволяет получить консорциум с устойчивым соотношением культур, высокими титром клеток и титруемой кислотностью,улучшенными органолептическими и реологическими свойствами получаемых продуктов. Предлагаемый консорциум обладает высокой активностью в отношении патогенов и устойчивостью к антибиотикам, что позволяют его использовать для приготовления пробиотиков и биологически активных добавок. Нами было установлено, что при совместном культивировании описанных выше микроорганизмов проявляется синергический эффект. Штаммы .-2, .-1,1, входящие в состав консорциума,обладают высокой кислотообразующей активностью, биохимической и антогонической активностью, т.е. способностью подавлять возбудителей кишечных заболеваний, что гарантирует подавление в кишечнике патогенных микроорганизмов и нормализацию его микрофлоры,устойчивостью к антибиотикам, что характеризует способность их выживать и развиваться в кишечнике человека на фоне антибиотикатерапии. Эти штаммы отбирались путем скрининга культур молочнокислых и бифидобактерии по параметром культивирования заквасок на молочной среде таких как температура,продолжительность культивирования, энергия кислотообразования,образование сгустка,внесение различных стабилизаторов. В процессе длительной селекционной работы нами был получен консорциум микроорганизмов,обладающая следующими микробиологическими и биохимическими показателями 1. При росте в среде на молочной основе имеет высокий суммарный титр (не менее 108 КОЕ/г). 2. При пассировании в среде на молочной основе консорциум способен сохранять свои свойства не менее 100 пассажей. 3. Консорциум, выращенный в среде на молочной основе, устойчив при длительном хранении без снижения активности(при температуре 42 не менее 30 суток при температуре минус 305 не менее 12 месяцев). 4. Биологически активная добавка, полученная на основе заявленного консорциума, содержит живые микроорганизмы в высоком титре (1010-1012) продолжительное время (не менее 12 месяцев). 5. Культуры, входящие в состав консорциума продуцируют полисахариды, которые способствуют получению стабильного сгустка и низкомолекулярные пептиды мМ 50, 10 и 5 кДа,которые обусловливают высокую антагонистическую активность в отношении патогенов. Культурально-морфологические и физиологобиохимические признаки микроорганизмов,входящих в состав консорциума Штамм .-2 выделен из коровьего молоко. Культурально-морфологические особенности штамма. Палочки размером 3-5 мкм,расположены попарно, короткими цепочками,неподвижные, спор не образует. На поверхности агара с гидролизованным молоком культура образует гладкие беловатые колонии -формы диаметром 2-3 мм. При глубинном выращвании образует лодочкообразные колонии. Продукт,синтезируемый штаммом молочная кислота. Растет при 37, -48 ч. Дополнительная информация,комментарии Не обладает гемолитической и лецитиназной активностью, является активным кислотообразователем,антагонист условнопатогенной микрофлоры. Штамм .-1 выделен из кисломолочного продукта. Культуральноморфологические особенности штамма Палочки размером 3-5 мкм, расположены попарно,короткими цепочками, неподвижные, спор не образует. На поверхности агара с гидролизованным молоком культура образует гладке беловатые колонии-формы диаметром 2-3 мм. При глубнном вырашваний образует лодочкообразные колонии. Продукт, синтезируемый штаммом молочная кислота. Растет при 37,-48. Дополнительная информация,комментарии Не обладает 3 Антагонистические свойства композиции Зона подавления роста Пептидная фракция 5 кДа 141 171 Штамм 1 получен из модифицированной среде Блаурокка через 24 часа сухого бифидум бактерина. Культурально- культивирования при 37 титр не менее 1108 морфологические особенности штамма КОЕ/мл, антагонистическая активность полученной неподвижные грамположительные или вариабельно культуральной жидкости 14,50,76 мм. Энергия окрашивающиеся полиморфные или отдельных кислотообразования через 72 часа роста 150-160 Т. особей. Штамм бифидобактерий анаэроб, на На гидролизатно-молочной среде через 24 часа поверхности плотных питательных сред в аэробных культивирования при 37 титр не менее 1108 условиях не растет. При росте на КОЕ/мл, антагонистическая активность полученной модифицированной печеночной среде Блаурока на культуральной жидкости 15,41,3 мм. 1 сутки возникает неравномерное помутнение среды Дополнительная информация, комментарии не с зоной аэробиоза, иногда образуется осадок в виде обладает гемолитической и лецтиназной рыхлой массы, отдельные колонии белого цвета активностью,является активным имеют форму мелких гвоздиков и зерен. Продукт, кислотообразователем,антагонист условносинтезируемый штаммом биомасса патогенной микрофлоры. антогонистически активных бифидобактерий. Культуры консорциума сохраняются в Активность (продуктивность) штамма (с указанием лиофилизированном виде в ампулах при минус условий культивирования),другие 302. производственные показатели-на Таблица 2 Технологическая характеристика композиции Показатель Консистенция и внешний вид Характеристика закваски Густоватая жидкость с небольшим образованием осадка, после легкого взбалтывания жидкость однородная Время свертывания молока при внесении в молоко 2,5-5 посевной дозы композиции культуры,час Активная кислота,Пример использования консорциума для приготовления БАД Получение БАД осуществляется в два этапа 1. Приготовление жидкой биомассы консорциума. 4 4,6-6,0 50 мл заявленной консорциума вносится в 500 мл стерильного верблюжьего молока при температуре 372. Далее термостатируется при заданной температуре в течение 4-6 часов и хранится при температуре 42. 2. Получение БАД. БАД получают путем смешивания жидкой биомассы консорциума с верблюжьим молоком в соотношении 110, смесь замораживается и высушивается лиофильным способом высушивания до остаточной влажности 3-5. БАД, герметично упакованный, сохраняет свои пробиотические свойства, а микроорганизмы, входящие в состав препарата, - биологическую активность не менее 12 месяцев. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум штаммов молочнокислых и бифидобактерийКМ-2(ТОО КазНИИ ППП под В-180),КН-1 (ТОО КазНИИ ППП под В-181), -1 (ТОО КазНИИ ППП под-182),используемый для приготовления биологически активных добавок и заквасок для производства кисломолочных продуктов.