Штамм Lactobacillus fermentum AK-2R, используемый для получения пробиотиков

(51) 12 1/20 (2010.01) 61 35/74 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Кистаубаева Аида Сериковна Савицкая Ирина Станиславовна Жубанова Ажар Ахметовна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский национальный университет им. аль-Фараби Министерства образования и науки Республики Казахстан-2, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКОВ(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма пробиотических бактерий-2 и может быть использован для получения пробиотиков. Данный штамм отвечает предъявленным требованиям. Штамм проявляет высокую скорость роста, отличается высокой устойчивостью к воздействию экстремальных факторов, таких как низкая кислотность и содержание желчи. Штамм-2 проявляет высокую резистентность к желчи и хорошо выживает в условиях кислой среды. Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма пробиотических бактерий-2 и может быть использован для получения пробиотиков. Известен наиболее близкий по техническому результату к заявленному штаммуМЕ-314241, выбранный в качестве прототипа. Он используется для приготовления лекарственного продукта для профилактики и лечения кишечных инфекций и уроинфекций, а также применяется для приготовления функциональных пищевых продуктов (Патент РФ 2003137810 А, МПК С 12 1/20, А 61 К 35/74, опубл. 10.03.2005). Однако штамм недостаточно устойчив к повреждающим факторам агрессивных сред гастроинтестинального тракта(кислот,протеолитических ферментов) при прохождении штамма лактобацилл в желудочно-кишечном тракте,что указывает на недостаточную его колонизирующую активность и жизнеспособность при прохождении пищеварительного тракта. Задачей заявляемого изобретения является получение штамма-2 с более высокой скоростью роста, высокой устойчивостью к воздействию экстремальных факторов,таких как низкая кислотность,содержание желчи. Техническим результатом заявленного изобретения расширение арсенала штамма микроорганизмов для получения пробиотиков. Технический результат достигается штаммом-2 используемый для получения пробиотиков. Предлагаемый штамм получен путем многолетней селекции исходной культуры. ., выделенной из кишечника человека на питательной средес возрастающими концентрациями антибиотиков и воздействия УФЛ(лампа БУВ-15, доза облучения 3900 эрг/мм 2). Отобран по высокой скорости роста, высокой устойчивости к воздействию экстремальных факторов,таких как низкая кислотность,содержание желчи. Морфология Грамположительные длинные палочки с закругленными концами, расположены цепочками. Величина клеток 1,2-1,56,4-10,0 мкм,неподвижные. Метаболизм Микроаэрофильный микроорганизм с хемогетеротрофным метаболизмом. Культуральные признаки на поверхности агаризованной среды( , Индия) колонии мелкие, ровные, выпуклые, непрозрачные диаметром 2-3 мм, молочного цвета,-типа. На питательной среде - бульон образует равномерное помутнение среды и диффузионный рост. Для размножения штамма-2 используется среда КДС (казеинодрожжевая среда) при температуре инкубации 37,48 часов. Состав среды КДС г/л натрий хлористый 5,0 г/л,2 лактоза 10,0 г/л, -цистеин солянокислый 0,1 г/л,агар микробиологический 0,75 г/л,дрожжевой автолизат 650 мл/л,панкреотический гидролизат казеина с конечной концентрацией аминного азота 350 мл/л,режим стерилизации - 30 минут, при 112 С. Хранение в лиофильно-высушенном состоянии при температуре не выше 0 на защитной среде ЖСМС. Состав защитной среды ЖСМС (желатиносахарозо-молочная среда)желатин 15-20,сахароза 5-10,молоко 50-70,стерилизация 30 минут, при 112. Физиологические и биохимические свойства Продукт синтезируемый штаммом микроцин.-2 обладает антагонистической активностью в отношении тесткультур зона угнетения роста тест-штаммов 60 -123,177-193,59-60 - 235,. -13 - 192. Штамм апатогенен, не обладает гемолитической,лецитиназной, протеолитической, фосфатазной,ДНК-азной и РНК-азной активностью, а также не проявляет мутагенного действия в тесте Эймса. Штамм-2 депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов (г. Астана) под номером 0242 от 06.03.2009. Сущность изобретения подтверждается следующими конкретными примерами использования штамма 2. Пример 1 . Результаты выращивания жидкой культуры штамма-2 в условиях микробиологической лаборатории. Для получения посевного материала в ампулу с лиофилизированной культурой, содержащей 1 г сухого вещества, добавляют 1 мл стерильного раствора натрия хлорида 0,9. Посевной материал получают выращиванием микробной культуры штамма-2 на поверхности агаризованной среды( ,Индия) методом истощающего штриха в термостате при 37 в течение 18-20 часов. Индивидуальные клоны штамма-2,выросшие на поверхности агара, помещаются в бактериологические пробирки, содержащие 9 мл среды молока и выращивают в термостате при 37 С в течение 15-18 часов. Выросшие в жидкой среде лактобациллы обуславливают сквашиванием молока. Из полученной культуры, готовят мазки,окрашенные по Граму. В мазках должны обнаруживаться Грамположительные палочки с закругленными концами, расположенные в цепочку. Величина клеток 1,2-1,56,4-10,0 мкм,неподвижные. В препаратах не должно быть посторонней микрофлоры (фиг.1). Полученный посевной материал используют для получения стартовой биомассы. Посевной материал вносят во флаконы, содержащие 400-500 мл стерильного молока, в количестве 5 и выращивают при 37 в течение 15-18 часов. Начальная биомасса штамма-2 может быть использована для выращивания больших объемов биомассы изготовления для получения пробиотиков. Пример 2. Определение чувствительности лактобацилл к желчи. Для культивирования штаммов лактобацилл применяли питательную среду МРС-1. В нее добавляли желчь в концентрации 40. Суточную бульонную культуру исследуемого штамма добавляли по 0,5 мл и культивировали при температуре 37. Через 24 часа измеряли оптическую плотность при длине волны 540 нм по отношению и исходному бульону. Таким образом, штамм-2 проявляет высокую резистентность к желчи Пример 3. Определение чувствительности лактобацилл к желудочному соку. Для культивирования штаммов лактобацилл применяли питательную среду МРС-1. в которую вносили соляную кислоту и устанавливали 3,0 - 6,0. В пробирки вносили суточную бульонную культуру исследуемого штамма по 0,5 мл в каждую и культивировали при температуре 37. Через 6 часов измеряли оптическую плотность при длине волны 540 нм по отношению к бульону. Использовали также желудочный сок (20-30),который добавляли в среду, содержащую 109 КОЕ/мл бактериальных клеток. Клетки лактобацилл экспонировали с желудочным соком в течение 60 мин, после чего производили высев на твердую среду МРС-1 для определения количества жизнеспособных клеток. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 2. Из результатов видно, что штамм-2 хорошо выживает в условиях кислой среды. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм-2,депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов под номером - 0242,используемый для получения пробиотиков.