Штамм бактерий Lactobacillus fermentum 129 – активный антагонист B.subtilis – возбудителя картофельной болезни хлеба

(51) 12 1/20 (2010.01) 61 35/74 (2010.01) 12 1/01 (2010.01) 12 1/225 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Задачей изобретения является выделение из пшеничной муки,характеристика штамма молочнокислых бактерий 129, обладающего высокой кислотообразующей и антагонистической активностью,способного синтезировать низкомолекулярные бактериоцины. используемого для приготовления пшеничной закваски для хлеба. Штамм обладает высокой кислотообразующей активностью - после 24 часов культивирования на мучной среде -19,6, после 48 часов - 30,8 град Неймана, активный антагонист . возбудителя картофельной болезни хлеба - имеет зону задержки роста в течении 48 ч диаметром от 15 до 31, 75 мм. Отличительной особенностью штамма является синтез низкомолекулярных пептидов, по молекулярной массе относящихся к различным классам бактериоцинов.(72) Дудикова Галина Николаевна Магажанов Жастлек Мусагалиевич Чумакова Анна Владимировна Супрун Светлана Сергеевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт перерабатывающей и пищевой промышленности 129 АКТИВНЫЙ АНТАГОНИСТ . - ВОЗБУДИТЕЛЯ КАРТОФЕЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ХЛЕБА(57) Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новый штамм - антагонист,синтезирующий бактериоцины, используемый в составе пшеничных заквасок для предотвращения картофельной болезни хлеба. Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новый штамм 129 антагонист,синтезирующий бактериоцины, используемый в составе пшеничных заквасок для предотвращения картофельной болезни хлеба. Проблема микробиологического загрязнения зерна и продуктов его переработки является одним из главенствующих факторов, определяющих здоровье населения. Наряду с присутствием в зерне плесневых грибов наличие в зерне и выработанной из него крупе,муке, толокне, а также хлебе и хлебобулочных изделиях мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, в том числе бактерий- возбудителей картофельной болезни хлеба, не только ухудшает технологические свойства, но вредно для здоровья. Картофельная болезнь хлеба вызывается развитием в мякише хлеба споровых бактерий(картофельной палочки),отнесенных по современной классификации к виду Для борьбы с возбудителем картофельной болезни хлеба преимущественно используют биологические способы, основанные на антагонизме молочнокислых и пропионовокислых бактерий. Ведущую роль в этом процессе играют бактериоцины - антибиотики, полипептидной природы, которые синтезируют молочнокислые бактерии. Из числа антибиотиков, не имеющих применения в медицине и в то же время представляющих интерес для пищевой промышленности, наибольшее значение имеют бактериоцины,которые задерживают рост стафилококков, стрептококков,клостридий и других патогенных микроорганизмов. Бактериоцины не подавляют дрожжевую микрофлору, что особо важно в хлебопекарной промышленности,их антибиотическая активность действительна лишь по отношению к споровым бактериям. Бактериоцины синтезируются молочнокислыми бактериями и представляют не индивидуальное вещество, а семейство близких по структуре и физико-химическим свойствам полипептидов Есть несколько аргументов в пользу бактериоцинов. Во-первых, бактериоцины человек потребляет с момента своего рождения - с материнским молоком и кисломолочными продуктами. Во-вторых, есть бактериоцины,которые продуцируют наш организм, к примеру, в кишечнике. В третьих, более полувека пищевая промышленность использует низин,консервант естественного происхождения,маркируемый как Е-234. Это самый настоящий бактериоцин, продуцируемый лактобактериями,производят его фирмы тоннами в год, и ни одного случая, чтобы низин кому- то навредил, описано не было. И более того, ФАО считает абсолютно безопасным потреблять его ежедневно каждому человеку 70 мг. И самое главное. Любые бактериоцины, в отличие от антибиотиков,полностью 2 расщепляются в организме и вероятность возникновения осложнений от бактериоцинов, повидимому,минимальна. Применение же антибиотиков, как уже это все хорошо знают,нередко чревато для человека отрицательными последствиями. Известен штамм бактерий-60 для силосования кормов, который обладает антагонистическими свойствами по отношению.(2168909, по МПК А 23 КЗ/02,публикация 20.06.2001 г.). К недостаткам штамма относится эффективность только для силосования трав и менее низкие антагонистические свойства по отношению к. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому штамму,является штамм 3-06, используемый для изготовления бактериальных препаратов и производства жидкой молочнокислой закваски в качестве продукта питания лечебнопрофилактического назначения. Штамм 3-06, который обладает антагонистическими свойствами по отношению.так же синтезирует бактериоцины (2391395, по МПК 12 1/20,публикация 10.06.2010 г.). К недостаткам штамма-прототипа относится низкие антагонистические свойства по отношению к, и более низкая скорость роста штамма. Задачей и техническим результатом настоящего изобретения является выделение из пшеничной муки, характеристика штамма молочнокислых бактерий 129, обладающего высокой кислотообразующей и антагонистической активностью по отношению к,способного синтезировать низкомолекулярные бактериоцины, используемого для приготовления пшеничной закваски для хлеба. Штамм выделен из пшеничной муки,идентифицирован и хранится в Коллекции культур микроорганизмов лаборатории биотехнологии и микробиологии КазНИИППП. Регистрационный номер, присвоенный в коллекции депонированному штамму - В-302. Идентификацию штамма 129 проводили по основным признакам согласно определителю Берги и токсономической схеме Квасникова (Квасников Е. И. Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. М. Наука, 1975). Культуральные и морфологические признаки штамма. Клетки в виде коротких цепочек (2-30,51,0 мкм), расположенных одиночно или цепочками. Не образует спор и капсул, не подвижны. При посеве на агар с гидролизованным молоком образуют на поверхности мелкие круглые колонии,поверхность колоний гладкая. Глубинные колонии лодочкообразной формы. По отношению к кислородуфакультативный анаэроб. Температурный оптимум роста - 38-40 С, оптимум рН- 3,9-6,6. Не растет на средах с содержанием 0,4 типуля. Растет на среде с содержаниемдо 4, а также в среде с содержанием желчи не более 30. Растет на солодовом сусле, среде МРС,гидролизованном молоке. Биохимические свойства. Оксидазная проба отрицательная. Каталаза отрицательная. Способен активно развиваться на жидких средах,предназначенных для культивирования лактобацилл, и накапливать к 18-20 часам культивирования производственную биомассу. Газ из глюкозы образует. Чувствителен к линкомицину, рифамицину,гентамицину и олеандомицин, слабо чувствителен к фуразолидону.Устойчив к канамицину,ампициллину и эритромицину. Отношение к углеводам сбраживает маннит,салицин, сахарозу, фруктозу, мальтозу, трегалозу,декстрозу, целлибиозу, галактозу. Не усваивает арабинозу, рафинозу, мелибиозу, рамнозу, ксилозу. Образует-молочную кислоту. Титруемая кислотность на мучной среде - после 24 часов-19,6, после 48 часов - 30,8 град Неймана. Штамм относится к роду, видуи подгруппе. Отличительной особенностью штамма является синтез низкомолекулярных пептидов,по молекулярной массе относящихся к различным классам бактериоцинов. Класснизкомолекулярные(5 ) пептиды лантибиотики. Классбактериоцины содержат низкомолекулярные (10) пептиды, устойчивые к высокой температуре. Классявляются большими ( 30 Ша) неустойчивые к высокой температуре белки,которые менее всего изучены. Антагонистические свойства изучали по отношению к тест-культуре.. Штамм 129 имеет зону задержки роста в течении 48 ч диаметром от 15 до 31, 75 мм. При добавлении суспензии.в количествах 0,1 и 1 мл на 10 мл культуры 129 (культивированной 24 ч на МРС),через 6 часов термостатирования антогонистические свойства штамма усилились и оставались активными в течении 24 часов, что свидетельствует об усилении синтеза бактериоцинов под действием культуральной жидкости. . Таблица Антагонистические свойства прототипа и заявляемого штамма Антагонистическая активность Зона подавления роста, мм Пример использования штамма 129 в заквасках для муки. Питательная среда готовится из пшеничной муки и воды (соотношение 12), в которую вносится чистая культура 129,предварительно выращенная на питательной среде МРС. Температура культивирования 35-37 С,продолжительность 24 часа до титруемой кислотности 202 град Неймана. Готовая закваска применяется при выпечке пшеничного хлеба из муки любого сорта по различным технологическим схемам. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий 129(депонирован в ТОО КазНИИППП, под регистрационным номером В-302) - активный антагонист ., возбудителя картофельной болезни хлеба