Штамм Bacillus thuringiensis (Drury) 4Сr-06, используемый для получения биологического препарата против листовертки

(51) 12 1/20 (2011.01) 01 63/00 (2011.01) 12 15/20 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ЛИСТОВЕРТКИ(57) Штамм бактерий.(31 серотип) 4-06 для получения биопрепарата против листовертки. Предложенный штамм выделен из листовертки., в Юго-восточном Казахстане. Обладает высокой биологической активностью в отношении гусениц чешуекрылых насекомыхвредителей. При титре спор 1108 штамм 4-06 на гусеницах розанной листовертки и яблонной моли показал 100-ую смертность. Высокая смертность насекомых происходила также при титре спор 1107(72) Сагитов Абай ОразулыДуйсембеков Бахытжан АлишеровичГлупов Виктор ВячеславовичХодырев Виктор Петрович Слямова Назира ДусупкановнаАдилханкызы АйнураУспанов Алибек Маратович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научно-исследовательский институт защиты и карантина растений Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты растений от насекомых представляющий собой новый штамм бактерий для получения вышеуказанного средства. Известен штамм бактерий-52 для получения биопрепарата против вредных насекомых (Каменек Л.К. Способ получения бактериального энтомопатогенного препарата. - Пат. России 2062577, 1996). Этот штамм имеет невысокое содержание эндотоксина(10-20) и мало приспособлен к условиям сухого континентального климата Казахстана. Известен типовой штамм. , входящий в состав препарата лепидоцида производства Бердского химзавода(Волкотруб Э.Н. и др. Новая препаративная форма лепидоцида // Экол. безопас. и беспестицид, технол. получ. растениевод, продукции. Матер. Всерос. Науч.-произв. Совещ. Краснодар, 24-26 авг. 1994. ч.2. Пушкино. С.204-205). Лепидоцид известен также под названиями Битиплекс (Дельта),Битобациллин, Гомелин, Бактоспеин, Новодор ,др. Однако активность его недостаточно высока. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в отношении насекомых, в частности,листовертки. Листовертка, семейство, вредители плодовых культур. Имеет в Казахстане повсеместное распространение и наносит существенный вред. Географическое распространение Обитает в Европе, Сев. Африке, Малой Азии, Ближнем Востоке, Иране, Ираке, Сев. Америке. В б. СССР распространена по всей европейской части, в Закавказье, Ср. Азии (предгорья), Казахстане, на Урале, юге Сибири (локально), на Дальнем Востоке. Завезена на Дальний Восток и в Америку. Морфология и биология. Передние крылья имаго от охряно-желтой до серо- и темно-коричневой окраски (размах крыльев 15-22 мм). Передний край со слабым изгибом у вершины. Вершинный угол острый. Самцы имеют четкий рисунок темно-бурого цвета прикорневое пятно ромбической формы,косая срединная перевязь, предвершинное и внешнекрайнее пятна слиты. У самок рисунок сильно размыт и едва заметен. Задние крылья коричнево-серые, у самок с ярким оранжевожелтым опылением у вершины крыла. Яйца удлиненно-овальные, серо-зеленые. Гусеница 18-20 мм, от светло-зеленой до темно-оливково-зеленой окраски, полупрозрачная. Куколка (10-12 мм) веретеновидная, желтовато-коричневая с более темной спинкой. Она располагается в комках из листьев или в сигарах, свернутых вдоль главной жилки листа. Средняя плодовитость 250 яиц,потенциальная до 430. Самка откладывает яйца в один слой группами (щитками) по 40-100 штук в 2 кладке, в среднем около 60, на гладкой коре нижней части штаммов на высоте 7-27 см или в развилках скелетных сучьев. Поверхность кладок покрыта прозрачным воскоподобным веществом в смеси с чешуйками бабочек. Зимуют яйца. Отродившиеся гусеницы вначале питаются вместе, скелетируя один из листьев, затем расползаются на верхушки побегов. Гусеницы 1-2 возрастов выгрызают почки и бутоны, затем, переходя на цветки, уничтожают тычинки, пестики и лепестки, а также скелетируют молодые листья. Гусеницы старших возрастов повреждают завязи и плоды, выгрызая в мякоти ямки неправильной формы, достигающие иногда семенной камеры или косточки. Продолжительность развития гусениц 25-60 дней. Окукливание происходит в местах питания. В зависимости от температуры стадия куколки длится 8-14 дней..(31) 4-06 Казахского научно-исследовательского института защиты и карантина растений, Казахстан и Института систематики и экологии животных СО РАН, Россия. Выращивается на мясопептонном агаре (МПА),рыбном агаре при температуре 28 С, Селекция - по инсектицидной активности. Выделение - по А.Г. Кольчевскому и др. Выделение и отбор высокоактивных культур. Метод. Пособие. Л. 1987, 21 с. Определение вида - по де Баржак и Фрахон (.., , 1990, . 35, . 233). ЛК 50 - (инсектицидная активность, т.е. концентрация, вызывающая гибель на 3-и сутки 50 гусениц) Выделен из листовертки, в Юго-восточном Казахстане. Время полного спорообразования - 5 суток. Возбудитель бактериоза листовертки имеет следующие характеристики Культурально-морфологические свойства кристаллообразующих изолятов. При росте на питательном агаре бактерии представляли -форму,колонии округлой, реже неправильной формы с волнистым краем, серовато-бежевые, матовые,прозрачные. Размер колонии 15-20 мм. Консистенция пастообразная. Микроскопический анализ. Штамм образует эллиптические споры и кристаллы овальной и ромбовидной формы. Биохимические свойства. Образует ацетилметилкарбинол,лецитоветеллиновая реакция положительна. Не образует уреазу. Гидролизует крахмал. Образует кислоту с салицином. Гидролизирует эскулин. Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность). Принадлежит к 4-му классу опасности для теплокровных животных. Исследования о влиянии штамма бактерий на динамику численности гусениц листовертки проведены как в лабораторных, так и полевых условиях. При исследовании погибших от бактериоза гусениц листовертки были выделены. . Для определения численности бактерий в трупном материале проводят групповое взвешивание воздушно сухих гусениц. Выделение и отбор высоковирулентных культур.из насекомых осуществляли в чашках Петри с МПА( 7,2-7,5) и ЛАГ (глюкоза 0,7, пептон 0,7,дрожжевой экстракт 0,5,0,5, агара 1,5). Инкубируют культуры бактерий при 28 в течение 5 суток. Тест-объектом служили гусеницы розанной листовертки , и яблонной моли(.), соответственно возрастов. Гусениц скармливали листьями излюбленных деревьев,повторность четырехкратная, в каждой по 10 особей гусениц. Листья скармливаемых растений предварительно обрабатывали спорокристалической суспензией бактерий. В качестве контроля берется вариант с типовым штаммом -52 . ., имеющийся в коллекции культур Института. Опыт проводится в четырех повторностях при 20-25. ЛК 50 для штамма 4 Сг-06 определяли также на розанной листовертки второго возраста. В качестве контроля использовали также штамм -52. Кормовым растением служили листья яблони. Суспензии биопрепаратов наносили на листья пульверизатором до появления стекающих капель, в контроле - водопроводной водой. Корм после подсушивания помещали в чашки Петри с гусеницами, который через сутки заменяли на свежий (необработанный). Длительность опыта пять суток при температуре 27. Испытание штамма 4-06 проведены в естественных условиях в яблоневом саду КазНИИЗиКР. Эталоном служил типовой шт. -52. Использовали одну концентрацию бактерий в четырех повторностях. Ветки деревьев с гнездами гусениц опрыскивали из пульверизатора с расходом суспензии по 15 мл на 10 см ветки. В контроле опрыскивание проводили водопроводной водой. Энтомоцидная активность.(31 серотип) 4-06. Сравнительные данные энтомоцидной активности штамма.с типовым штаммом -52 приведены в табл. 1. и 2. В таблице 1 показана активность спорокристаллических препаратов Активность спорокристаллических препаратов.для двух видов личинок Штамм 4 Сг-06 Типовой штамм. ЛК 50, в скобках - доверительный интервал личинки чермуховой моли гусеницы яблонной моли 0,94 (от 0,82 до 1,06) 0,15 (0,12-0,17) 1,6(1,47-1,75) 0,27(0,23-0,31) ЛК 50 (мг/мл) для чермуховой моли равна 0,94 мг/мл (от 0,82 до 1,06), для яблонной моли - 0,15 мг/мл (0,12 - 0,17). Активность типового штамма составляла соответственно 1,6 и 0,27 мг/мл. Таким образом, активность штамма 4-06 оказалась выше таковой типового штамма для личинок черемуховой и яблонной моли соответственно в 1,7 и 1,8 раза. В то же время личинки черемуховой моли значительно устойчивее гусениц яблонной моли. На гусеницах листоверток в условиях лабораторных опытов ЛК 50 культуры штамма 4-06 и типового штамма составляла соответственно 3 х 106 спор/мл суспензии. Результаты проведенных полевых испытаний штамма 4-06 и -52 направленных на оценку биологической эффективности штаммов в отношении к гусеницам розанной листовертки и яблонной моли при использовании титров спор 1108 показали высокую вирулентность - 100,тогда как активность типового штамма -52 составила 58,0 и 60,0 гибели насекомых (таблица 2). Таблица 2 Биологическая активность штамма 4 Сг-06 на гусеницахвозраста различных чешуекрылых Общий процент гибели гусениц в среднем на 5 сутки яблонная моль 100 60,069, 9 0 В ходе эксперимента поставленных в лабораторных условиях оценивалась вирулентность штамма бактерий 4-06 и -52 на гусеницах розанной листовертки и яблонной моливозрастов при титрах спор 1107 и 1108 (таблица 3). Таблица 3 Биологическая эффективность штамма 4-06 на гусеницах чешуекрылых Штамм Общий процент гибели гусениц в среднем на 5 сутки розанная листовертка яблонная моль 100 100 92,03,0 85,02,8 59,068,3 56,065,6 0 0 Как видно из таблицы, при титре спор 1108 штамм 4-06 на гусеницах розанной листовертки и яблонной моли показал 100-ую смертность. Высокая смертность насекомых происходила также при титре спор 1 х 107 - 92,0 и 85,0. Смертность типовым штаммом была в 1,6 и 1,7 раз ниже соответственно. Таким образом, лабораторные и полевые испытания показали высокую активность штамма 4 Сг-06. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий.(31 серотип) 4 -06, депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов РГП НЦБ РК МОН РК под номером 0254, используемый для получения биологического препарата против листовертки.