Штамм бактерий Bacillus thuringiensis A1, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

(51) 12 1/20 (2006.01) 09 1/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 1 используют для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Штамм депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов РГП НЦБ РК КН МОН РК под номером В 0198. Предлагаемый штамм 1 активно утилизирует сырую нефть при концентрации 10 на 43,57. В полевых условиях снижает концентрацию нефти в почве на 87,4, что улучшает экологическую обстановку окружающей среды.(72) Саданов Аманкелди Курбанович Шорабаев Ерик Жарылкасынович Чукпарова Айгуль Ултараковна Айтуганов Канат Абшекенович Кулжанова Камшат Арыстановна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитет науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 1, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 21708 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Известен штамм нефтеокисляющих микроорганизмов-24 2266, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов (заявка на изобретение 2001122916 А, 2004). Наиболее близким является штамм бактерий. 109, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов (предпатентА 16969, 2006). Недостатком данного штамма является низкая степень деградации нефти и неспособность осуществлять утилизацию нефти в разных типах почв, при аридности климата. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий, характеризующегося нефтеокисляющей активностью при высокой концентрации нефти. Техническим результатом изобретения является ускорение процесса очистки почвы от нефти и нефтепродуктов до полного разложения углеводородов нефти в короткие сроки (2 недели). Характеристика штамма Штамм 1 выделен из нефтезагрязненной почвы Карагандинской области. Штамм представляет собой подвижные палочки. Грамположительные, некислотоустойчивые, спорообразующие, при этом споры эллипсоидной формы с центральным расположением. На МПА культура образует распластанные колонии с изрезанными краями, влажные, со слизистым содержимым,колонии бежевого цвета диаметром 3-5 мм. Консистенция мягкая,легко снимается с поверхности агара. Край колоний ровный,пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте на СПБ образует тонкую бесцветную пленку, исчезающую при встряхивании среды, бульон прозрачный со скудным осадком. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки В качестве источника углерода использует лактозу с образованием кислоты. Желатину разжижает, крахмал не гидролизует. Сероводород образует, индол не образует. Не восстанавливает нитраты до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Образует рост на СПБ при 6,5 . Растет при температуре 537 С, оптимум температуры роста 2530 С. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют через 3 месяца. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 1 депонирован в коллекции в Республиканской коллекции микроорганизмов НЦБ РК под номером- 0198. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами Пример 1. Для оценки нефтеокисляющей активности культуру выращивают на минеральной среде следующего состава, г/л -10,0 43 1,0 К 2 НРО 4-1,0 КН 2 РО 4-1,0 472-0,2 СаС 12-0,02 дистиллированная вода - 1 л, рН среды 7,0-7,2. Среду разливают по 100 мл в колбы объемом 250 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 1 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода используют сырую нефть. Культивируют на качалке 180 об./мин при 28-30 С в течение 7 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом, экстрагируя остаточную нефть гексаном и хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтяной смесью без бактерий. Данные представлены в табл. 1. Результаты исследований показали,что предлагаемый штамм бактерий способен использовать 7 и 10 сырой нефти в жидкой среде,так деструкция на 7-е сутки 7 нефти составила 49,09, а 10 - 43,57. Пример 2. Проведение полевых испытаний в с. Сарепта Карагандинской области. Объектом служила загрязненная нефтью почва. Посевной материал вносили в количестве 109 кл/г почвы. При внесении проводили полив и рыхление. Контролем служил вариант без бактерий. Время культивирования 14 суток. Остаточное количество нефти в почве определяли гравиметрическим методом,экстрагируя нефть гексаном и хлороформом. Результаты исследования показали,что в опытных образцах содержание нефти снизилось на 87,4 (табл. 2). Таким образом, предлагаемый штамм способен утилизировать сырую нефть в почве и может быть использован для очистки нефтезагрязненных почв. Таблица 1 Потребление сырой нефти штаммомпри разной ее концентрации Варианты Контроль Степень утилизации сырой нефти за 7 суток,7 10 4,55 4,91 49,09 43,57 21708 Таблица 2 Степень деградации нефти в почве под воздействием штаммаВарианты Контроль ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий 1 микроорганизмов НЦБ РК,- 0198) используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.