Штамм бактерий Bacillus polymyxa Дн, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

(51) 12 1/20 (2006.01) 09 1/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерийДн используют для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Штамм депонирован в ДТП Республиканская коллекция микроорганизмов РГП НЦБ РК КН МОН РК под номером В 0197. Предлагаемый штаммДн активно утилизирует сырую нефть при концентрации 7 на 41,35. В полевых условиях снижает концентрацию нефти в почве на 90,9, что улучшает экологическую обстановку окружающей среды.(72) Саданов Аманкелди Курбанович Шорабаев Ерик Жарылкасынович Чукпарова Айгуль Ултараковна Кулжанова Камшат Арыстановна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитет науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ БАКТЕРИЙДН, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 21709 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Известен штамм нефтеокисляющих микроорганизмов. -24 2266,используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов (заявка на изобретение 2001122916 А, 2004). Наиболее близким является штамм бактерий. 109, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов (предпатент 16969, 2006). Недостатком данного штамма является низкая степень деградации нефти и неспособность осуществлять утилизацию нефти в разных типах почв, при аридности климата. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий, характеризующегося нефтеокисляющей активностью при высокой концентрации нефти. Технический результат - ускорение процесса очистки почвы от нефти и нефтепродуктов до полного разложения углеводородов нефти в короткие сроки (2 недели). Характеристика штамма. ШтаммДн выделен из нефтезагрязненной почвы Карагандинской области. Штамм представляет собой подвижные палочки. Грамположительные,не кислотоустойчивые,спорообразующие, споры эллипсоидной формы с центральным расположением. На СПА культура образует округлые, выпуклые бежевого цвета колонии диаметром 3-5 мм. Консистенция мягкая,легко снимается с поверхности агара. Край колоний ровный, пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте на СПБ образуется придонный рост, при встряхивании среды осадок волокнистый,бульон прозрачного цвета. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки. В качестве источника углерода использует лактозу с образованием кислоты. Крахмал гидролизует слабо, желатину разжижает. Сероводород образует, индол не образует. Не восстанавливает нитраты до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Образует рост на СПБ при 6,5 . Растет при температуре 537 С, оптимум температуры роста - 2530 С. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют через 3 месяца. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерийДн депонирован в Республиканской коллекции микроорганизмов НЦБ РК под номером - 0197. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами Пример 1. Для оценки нефтеокисляющей активности культуру выращивают на минеральной среде следующего состава, г/л -10,0 43 - 1,0 К 2 НРО 4 - 1,0 КН 2 РО 4 - 1,0 472 - 0,2 СаС 12 0,02 дистиллированная вода- 1 л, рН среды 7,0-7,2. Среду разливают по 100 мл в колбы объемом 250 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 1 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода используют сырую нефть. Культивируют на качалке 180 об./мин при 28-30 С в течении 7 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом, экстрагируя остаточную нефть гексаном и хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтяной смесью без бактерий. Данные представлены в таблице 1. Результаты исследований показали, что предлагаемый штамм бактерий способен использовать 7 и 10 сырой нефти в жидкой среде, так деструкция на 7-е сутки 7 нефти составила 41,47, а 10 38,79. Пример 2. Проведение полевых испытаний в с.Сарепта Карагандинской области. Объектом служила загрязненная нефтью почва. Посевной материал вносили в количестве 109 кл/г почвы. После внесения в почву проводили полив и рыхление. Контролем служил вариант без бактерий. Время культивирования 14 суток. Остаточное количество нефти в почве определяли гравиметрическим методом, экстрагируя нефть гексаном и хлороформом. Результаты исследования показали, что в опытных образцах содержание нефти снизилось на 90,9(таблица 2). Таким образом, предлагаемый штамм способен утилизировать сырую нефть в почве и может быть использован для очистки нефтезагрязненных почв. Таблица 1 Потребление сырой нефти штаммомДн при разной ее концентрации Варианты Степень утилизации сырой нефти за 7 суток,7 10 Контроль 4,55 4,91 Дн 41,47 38,79 Таблица 2 Степень деградации нефти в почве под воздействием штаммаДн Варианты Содержание нефти в почве, г/кг Степень утилизации,исходное 14 суток контроль 14,5 6,0 58,62 Дн 18,8 1,7 90,9 2 21709 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерийДн микроорганизмов НЦБ РК,- 0197),используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.