Штамм бактерий Вac. thuringiensis var.kurstaki Z-52 v-3, используемый для получения биоинсектицида

(51) 01 63/00 (2010.01) 12 1/20 (2010.01) 12 1/07 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Штамм.-52 3,депонированный в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов РГП Национальный центр биотехнологии МОН РК, - 0210,используют для получения биоинсектицида. Практическое использование штамма в производстве лепидоцида позволит сократить производственные потери при длительном хранении и повысит качество выпускаемой продукции по уровню биологической активности.(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма,используемого для получения энтомопатогенных препаратов. Изобретение относится к микробиологической промышленности, микробиологии и биотехнологии,а именно к производству бактериальных биопрепаратов, предназначенных для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур, в частности с листогрызущими гусеницами. Эффективная борьба с вредителями играет важную роль в сохранении и увеличении урожая,поскольку потери сельскохозяйственной продукции,связанные с жизнедеятельностью насекомыхвредителей, составляют до 30 от ожидаемого урожая. Все возрастающую роль в защите растений от сельскохозяйственных вредителей играют биологические методы борьбы с использованием препаратов, полученных на основе вирусных,бактериальных и грибных патогенов или синтезируемых ими продуктов. Преимущество большинства известных микробиологических средств защиты растений по сравнению с химическими - их экологическая безопасность. Наиболее широко в качестве микробиологических средств защиты растений используют продукты на основе различных штаммов энтомопатогенной бактерии. Эти бактерии при споруляции синтезируют кристаллические белки, или, как их еще называют, дельта-эндотоксины, отличающиеся между собой по спектру энтомопатогенного действия. Дельта-эндотоксины обладают избирательным токсичным действием только по отношению к насекомым. Промышленное производство препаратов на основе Вас..требует их отбора по параметрам технологичности для крупномасштабного культивирования высокая продуктивность, устойчивость при длительном хранении. Известен штамм ВТ-НЗ-52 продуцент дельтаэндотоксина (авт. св. СССР 769787, 1984). Штамм ВТ-НЗ-52 способен образовывать кроме дельта-эндотоксина значительное количество спор, которые могут прорастать, размножаться и загрязнять окружающую среду. Задачей изобретения является получение штамма Вас.. , обладающего более высокой биологической активностью и большей устойчивостью при длительном хранении, чем известный штамм. Штамм депонирован в Республиканской коллекции микроорганизмов под номером-0210. Сущность изобретения Штамм бактерий Вас.. поддерживающей селекции. Штамм характеризуется повышенной биологической активностью и большей устойчивостью при длительном хранении. Полученный штамм обладает следующими свойствами. Морфолого-культуральные Аэроб. Грамположителен. Способен продуцировать дельта-эндотоксин, синтезируемый клетками в виде кристаллических образований. Вегетативные клетки подвижные, палочковидные с закругленными концами, жгутики расположены перитрихиально, размеры клеток 3,0-5,01,0-1,3 мкм, расположены цепочками, образуют споры овальной формы, размером 1,4-2,61,0-1,3 мкм. Кристаллы ромбовидной или квадратной формы,разнообразные по размерам от 0,6 до 2,0 мкм. В некоторых спорангиях наблюдается наличие двух кристаллов. Температура выращивания 28-30 С. Колонии на МПА круглой формы, гладкие,плоские, матовые по центру белые с зубчатым или волнистым краем. Структура мелкозернистая,плотная по консистенции, диаметр колоний от 5 до 10 мм. Физиолого-биохимические Использует глюкозу, мальтозу, кукурузный и картофельный крахмал, соевую и кукурузную муку,кукурузный экстракт. Не использует лактозу,глицерин, сахарозу, ксилозу, маннозу. Органические источники азота,используемые данными микроорганизмами пептоны, мясные, рыбные и растительные экстракты, соевая, кукурузная и рыбокостная мука, автолизаты дрожжей и казеина,гидролизаты из кукурузной и соевой муки,кормовые дрожжи. Усваивает аммонийные и нитратные формы азота. Хранение культуры Культура хранится в лиофильно высушенном состоянии при температуре не выше 0 С. На коротко скошенной агаризованной среде под минеральным маслом при температуре 4-5 С культура хранится в течение 1 года. При хранении на скошенной агаризованной среде при температуре 4-5 С необходим пересев 2 раза в год. Используется МПА при температуре инкубации 2830 С в течение 3-4 суток. Культивируется на агаризованной среде МПА при температуре 28-30 С, в течение 3-4 суток. Сравнительные характеристики штамма Вас..-523 и штамма Вас..-52 при культивировании на дрожжеполисахаридной среде при производстве лепидоцида приведены в таблице. Таблица 1 Сравнительные характеристики штамма..-52.3 и шт. ..-52 при культивировании на среде ДПС. .-52 .3 Биологическая Биологическая Продуктивность (Титр Продуктивность (Титр активность( 50) на активность( 50) на клеток по Пастеру) клеток по Пастеру) гусеницах непарного гусеницах непарного шелкопряда 2-го возраста шелкопряда 2-го возраста 9 6 9 6 3,9110 4,610 4,1310 1,4 10 3,88109 2,5106 3,9109 1,5106 9 6 9 4,210 2,310 3,8410 2,1106 6 9 9 3,1110 3,710 3,7610 2,2106 6 9 9 3,310 4,1810 4,1810 2,7106 6 2,910 3,84109 3,84109 2,2 106 6 9 9 2,310 3,9310 3,9310 1,7106 6 9 9 2,310 4,2810 3,8410 2,1106 6 2,510 4,3109 3,82109 2,1106 Таким образом,представленные данные Биологические пробы проведены на гусеницах показывают, что штамм -523 существенно непарного шелкопряда 2 возраста при свободном превышает по биологической активности поглощении корма гусеницами. Практическое производственный штамм -52, сравним с ним по использование штамма в производстве лепидоцида продуктивности и обладает устойчивостью при позволит сократить производственные потери при длительном хранении. длительном хранении и повысит качество Пример. Проведено культивирование штаммоввыпускаемой продукции по уровню биологической-523 и-52 на жидкой дрожжеполисахаридной активности. среде в лабораторных условиях. Количество посевного материала - 5 - 10 к ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ объему питательной среды. Время ферментации на качалке с числом оборотов 180 об/мин при Штамм бактерий В.. температуре 28 - 30 С - 40 - 48 часов. По окончании 52 -3, депонированный в ДГП Республиканская ферментации проведен анализ культуральной коллекция микроорганизмов РГП Национальный жидкости. центр биотехнологии МОН РК, регистрационный Культура штамма -523 развивалась номер - 0210, используемый для получения синхронно, освобождение спор и кристаллов биоинсектицида. происходило на 40 - 48 часов роста. Кристаллы крупные, хорошо видимые при окраске фуксином.