Консорциум бактерий Lactobacillus brevis-67, Lactobacillus casei var. alactosus-22, Lactobacillus fermentum-96, Lactobacillus fermentum-104, Lactobacillus plantarum-2, активный в отношении Escherichia coli и Salmonella typhimurium и Bacillus subtilis

(51)712 1/20,61 35/74,23 9/12, 61 31/04 // ( 12 1/20,12 124,12 1245,12 125) ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Дудикова Галина Николаевна Витавская Анастасия Васильевна Тулемисова Клара Ахмедьевна Зайнуллина Гульжахан Хамзиновна Цуркан Людмила Геннадьевна(73) Республиканское государственное предприятие Научно-производственный центр перерабатывающей и пищевой промышленности Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(57) Изобретение относится к микробиологии и представляет собой консорциум бактерий, активный в отношении патогенной микрофлоры, вызывающей желудочно-кишечные заболевания различных групп животных. Консорциум бактерий-67,. -22,. Изобретение обладает высокой активностью в отношении . ,и, что позволяет использовать его для профилактики и лечения дисбактериозов и желудочнокишечных заболеваний различных групп животных. 8945 Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в составе препаратов для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний различных групп животных. Известен штамм бактерий-22, предназначенный для использования в составе лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний человека и животных, проявляющий активность в отношении,и другой патогенной микрофлоры (предварительный патент РК 5028, кл.12 1/20, 1997). Однако как монокультура, он обладает более низкой активностью в отношении указанных микроорганизмов и более подвержен влиянию бактериофагов. Задачей изобретения является создание консорциума бактерий, обладающего высокой активностью в отношении патогенной микрофлоры. Предложенный консорциум бактерий-67,.-96, -104,2, активный в отношении,и. Консорциум обладает довольно высокой активностью. Консорциум молочнокислых бактерий был выделен из пшеничной муки и обладает широким спектром антимикробной активности. Является активным антагонистом в отношении,и. Штаммы молочнокислых бактерий, входящие в состав консорциума, не являются антагонистами в отношении друг друга, что позволяет их совместное культивирование. Известно, что молочнокислые бактерии помимо молочной кислоты продуцируют вещества-пробиотики. Однако нейтрализация культуральной жидкости, в которой был выращен консорциум, приводит к потере его антибиотической активности. Но накопление молочной кислоты одними штаммами способствует синтезу веществпробиотиков другими штаммами, что усиливает антимикробную активность консорциума в отношении указанной патогенной микрофлоры. Другой основной причиной совместного культивирования МКБ является защита культур от бактериофагов. Штаммы бактерий.-22 и-67 являются наиболее фагоустойчивыми, что дает гарантию их развития и накопления молочной кислоты до предела,при котором не могут существовать бактериофаги. Следовательно, медленно растущие молочнокислые бактерии оказываются под надежной защитой. Высев моноклональных изолятов консорциума на Среде-10 и изучение их кислотообразующей активности, способности сбраживать углеводы и других физиолого-биохимических свойств дают возможность определить видовой состав консорциума.-2) имеет следующие морфологические,физиологические и биохимические признаки. Палочки разной длины, одиночные и в цепочках. Неспорообразующие, грамположительные. Характерная черта - способность расщеплять сахара при сбраживании глюкозы рН снижается на одну и более единиц. Лактат не сбраживается. Желатину не разжижают. Казеин не расщепляют. Индол и Н 2 не образуются. Каталазо- и цитохромотрицательные(порфирины отсутствуют) бензидиновая реакция отрицательная. Факультативные анаэробы. Растут на солодовом сусле, среде МРС, Среде-10 следующего состава, г солодовое сусло (8 СВ) 1000 442 - 0,05 472 - 0,2 цистин или цистеин - 0,2 К 2 НРО 4 - 2,0 цитрат аммония - 0,2 ацетат натрия - 2,5 сахароза - 20 пептон - 10 дрожжевой автолизат - 50 мл рН 5,5. В жидкой среде в первые 48 ч вызывают интенсивное равномерное помутнение. По окончании процесса брожения клетки оседают на дно, а среда несколько осветляется. При глубинном посеве на твердую питательную среду образуют плотные колонии в виде правильных линз (чечевицеобразные). Температурные пределы - 5-53 С оптимум 30-40 С. Кислотолюбивые, оптимум рН - 5,5-5,8. Устойчивы к действию пепсина и стрептомицину. Не токсичны и не патогенны.-2 Гомоферментативные. Клетки имеют вид толстых палочек средних размеров 3-8 х 0,7-1,0 мкм. Клетки расположены одиночно или короткими цепочками. Колонии средней величины, куполообразные, беловатые. На средах с мелом вокруг колоний образуется зона растворения мела. Растет на средах с содержанием 0,4 типуля. Молочная кислота основной продукт. Газ из глюкозы не образуют, образуют газ из глюконата. Сбраживают рибозу, сорбит, целлобиозу, рамнозу, мелицитозу, галактозу,мальтозу, сахарозу, маннозу, лактозу, салицин, маннит. Тиамин не требуется. Образуют- молочную кислоту. Вариабельный рост при 45 о С. Рост при 15 С. Оптимальная температура роста - 30 С. Спиртоустойчив..- 22 Гомоферментативные. По морфологическим,культуральным и физиологическим признакам очень близок к . .растет на средах с содержанием 0,4 типуля. Молочная кислота - основной продукт. Газ из глюкозы не образуют, образуют газ из глюконата. Сбраживают рибозу, сорбит, целлобиозу, мелицитозу, галактозу, мальтозу, сахарозу,маннозу, салицин и маннит. На сбраживают рамнозу и лактозу. Тиамин не требуется. Образуют главным образом- молочную кислоту. Вариабельный рост при 45 С. Рост при 15 С. 8945 Гетероферментативные. Клетки в виде коротких палочек (2-3 х 0,5-1,0 мкм), расположенных одиночно или цепочками. Не растет на средах с содержанием 0,4 типуля. Из фруктозы образуется маннит. Образуют газ из глюкозы и глюконата. Рибозу сбраживают до молочной и уксусной кислот без газа. Сбраживают галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, лактозу и маннит. Не сбраживают сорбит, целлобиозу, рамнозу, мелицитозу и салицин. Нуждаются в тиамине. Образуют- молочную кислоту. Альдолаза не обнаруживается. Растут при 45 С нет роста при 15 С. Температурный оптимум - 37-40 оС.-67 Гетероферментативные. Клетки преимущественно короткие (2-4 х 0,7-1,0 мкм), расположены одиночно или цепочками. Колонии мелкие, выпуклые,беловатые, блестящие. Из фруктозы образуется маннит. Образуют газ из глюкозы и глюконата. Рибозу сбраживают до молочной и уксусной кислот без газа. Сбраживают галактозу, мальтозу, сахарозу. Не сбраживают сорбит, целлобиозу, рамнозу, мелицитозу, маннозу, лактозу, салицин и маннит. Нуждаются в тиамине. Образуют- молочную кислоту. Альдолаза не обнаруживается. Обычно растут при 15 С не растут при 45 С. Оптимальная температура роста - 30 С. Культуры консорциума сохраняются в лиофилизированном виде в ампулах. Культуры высушивают в защитной среде с криопротекторами обезжиренное снятое молоко с добавлением 5 сахарозы и 5 лактозы. Пример Изучение антагонистической активности молочнокислых бактерий (. -67, ..-2) в отношении патогенных микроорганизмов,. Монокультуры предварительно выращивались на Среде-10. Затем готовилась закваска на стерильной муке для каждого штамма отдельно (соотношение мукавода - 11,510 МКБ) и для консорциума в целом. Антагонистическая активность проверялась следующим образом. Чашки Петри с ровным дном помещают на ровную поверхность. На водяной бане расплавляют в колбах плотную питательную среду следующего состава агар Хотингерасусло-агар (2,71). Содержимое колбы разливают в чашки Петри по 10 см 3 в каждую. На поверхность застывшей среды помещают 0,1 см 3 тест-культуры, растирают шпателем для получения равномерного газона. Затем буром или пробочным сверлом вырезают лунки (по 3 в каждой чашке Петри). В приготовленные лунки вносят по 0,1 см 3 2-суточной закваски МКБ. Тест-образцы для диффузии раствора в агар предварительно выдерживают в холодильнике в течение 48 ч. Затем чашки помещают в термостат при 37 С на 16-18 ч. Измеряют диаметр отсутствия роста тест-культур. Для каждого образца рассчитывают среднее арифметическое значение не менее чем из шести определений. Результаты представлены в таблице. Антагонистическая активность молочнокислых бактерий и их консорциума в отношении,иТесткультуры Диаметры зон подавления роста тест-культур, мм Штаммы МКБ Характер действия молочнокислых бактерий и консорциума в целом - бактерицидный. Как видно из данных, приведенных в таблице, в консорциуме МКБ усиливается антагонистическая активность в отношении . ,и. Предложенное изобретение обладает высокой активностью в отношении . ,и, что позволяет использовать его для профилактики и лечения дисбактериозов и желудочно-кишечных заболеваний различных групп животных. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум бактерий-67,. -22,