Способ микроскопического определения восстановленного молока

(51) 01 33/04 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технической задачей реализации настоящего изобретения, является достижение быстрого определения (в течение 20-25 минут) присутствия восстановленного (порошкового) молока в цельном при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы натуральности молока. Указанный результат достигается отделением казеина (основной фракции белка) молока от сыворотки молока с последующим его микроскопическим исследованием и сравнением с рисунками, изображенными на фиг. 1, которые были получены экспериментальным путем. А также производится сравнительная оценка количества и размера жировых шариков цельного молока(стойловой пробы) с таковыми в исследуемой пробе. Изобретение позволяет получить возможность экспресс оценки натуральности молока, а именно установление наличия или отсутствия в цельном молоке примеси восстановленного молока(72) Балджи Юрий Александрович Галкина Елена Николаевна(73) Акционерное общество Казахский агротехнический университет им. Сакена Сейфуллина(54) СПОСОБ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОССТАНОВЛЕННОГО МОЛОКА(57) Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения восстановленного молока, и может быть использовано при проведении оценки качества молока в ветеринарных лабораториях и лабораториях пищевой безопасности. Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения восстановленного молока, и может быть использовано при проведении оценки качества молока в ветеринарных лабораториях и лабораториях пищевой безопасности. В настоящее время, согласно Технического регламента Требования к безопасности молока и молочной продукции,утвержденного постановлением Правительства Республики Казахстан от 11 марта 2008 года, молоко отличается от молокосодержащего продукта. Тем не менее производители продолжают изготавливать молоко из сухого порошкового молока (восстановленное молоко), при этом называют конечный продукт молоком,что соответственно нарушает потребительские права. При добавлении восстановленного молока в питьевое снижается пищевая ценность продукта за счет многократного проведения тепловой обработки, усугубляются процессы, приводящие к блокированию некоторых аминокислот молока,особенно реакционноспособных лизина и цистеина,снижается содержание ионно-молекулярного кальция,витаминов,происходит частичный гидролиз триглицеридов молочного жира и уменьшение в их составе количества ненасыщенных жирных кислот,уменьшается количество фосфолипидов, что существенно снижает его пищевую ценность. В каких-либо нормативно-технических документах нет рекомендованных официальных методик определения восстановленного молока или молока полученного из сухого молока, поэтому не представляется возможным определить действительную натуральность молока, в связи с чем предложенный способ является актуальным и востребованным для лабораторий пищевой безопасности и ветеринарно-санитарной экспертизы. Известно определение восстановленного молока по степени его температурной обработки, в результате чего образуется аминокислота фурозин. Для определения концентрации фурозина, после кислотного гидролиза белка молока, используют точные и воспроизводимые методы газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии, . , ... . .. 1990, 3, 173183. Известен метод количественной оценки степени теплового воздействия на молоко, который учитывает одновременно два процесса,протекающих в молоке при сушке снижение количества свободной аминокислоты -триптофана и увеличение содержания конечных продуктов реакци. Для учта данных процессов введена универсальная величина -индекс, который получается путм деления значения флуоресценции конечных продуктов реакции на значение флюоресценции триптофана и умножения на 100 Галстян А.Г. Функционально-технологические 2 свойства сырья в производстве сгущенных молочных консервов из сухого молока /А.Г Галстян,В.В. Павлова, А.Н. Петров // Сборник научных трудов. Серия Продовольствие, СКГТУ. Ставрополь, 2002. с.13-16. Известен способ обнаружения восстановленного молока путм измерения отношения стабильных изотопов 2 Н/1 Н. Данный метод основан на разнице в количестве свободных протонов аминокислот и аминокислотных остатков в сыром молоке и прошедшем термообработку. Реакция изотопного(1 Н-2 Н) обмена протекает по механизму электрофильного замещения и затрагивает лишь определенные наиболее чувствительные к замещению протоны в ароматических аминокислотах. Затем снимают ИК-спектр и по интенсивности показаний судят о степени тепловой обработки молока Мосин О.В. Включение атомов дейтрия 2 Н, углерода 13 С, азота 15, и кислорода 18 О в молекулы аминокислот и белков. Журнал Биотехнология, 10, 1996 г Недостатком данного способа является то, что при исследовании стерилизованного, прошедшего УВТ-обработку или нормализованного молока продукты реакции меланоидинообразования,также будут накапливаться в конечном продукте в достаточно высокой степени и оценить наличие восстановленного молока в питьевом (цельном) становиться не возможным. Общими недостатками выше перечисленных методов являются их трудомкость, использование определенного аналитического оборудования(газожидкостный или высокоэффективножидкостный хроматограф, флюороскоп, ИКспектрометр), длительность выполнения, что не приемлемо при рутинной работе ветеринарносанитарного врача в лабораториях ветеринарносанитарной экспертизы и пищевой безопасности Известен способ определения наличия примеси восстановленного молока в пастеризованном молоке Антонов А.Р., Ковалев Д.В., Меренкова Л.И.,Новоселов Я.Б. 2406085, заявка 2010102952/10 от 28.01.2010. Указанный способ включает следующее пробу молочного продукта подвергают кипячению в течение 15 с, после чего пробу переливают в тмную фарфоровую мкость и охлаждают преимущественно в течение не менее 30 минут. Затем сливают через края мкости медленными вращательными движениями и после полного высыхания равномерными при комнатной температуре внутренней поверхности указанной емкости визуально оценивают наличие или отсутствие на е дне осадка (казеина), при наличии которого в виде мелких зрен белого цвета судят о присутствии примеси восстановленного молока в исследуемой пробе в количестве не менее 20 от общего объема продукта. Недостатком способа является то, что при современных технологиях производства сухого молока получается продукт с повышенной растворимостью и однородностью при смешивании сухого молока с водой, при этом после кипячения не образуется осадок в виде мелких зрен белого цвета. Наиболее близким способом к заявленному,является рефрактометрический способ определения белка молока ГОСТ 25179-90 Молоко. Методы определения белка, при котором отделяют сыворотку молока следующим путм в пробирку наливают 5 мл молока, добавляют 6 капель 4 раствора хлорида кальция, перемешивают, затем помещают в водяную баню (100 С) и кипятят 10 минут, далее пробирки извлекают, энергичным встряхиванием разрушают белковый сгусток(казеин), после чего пробирки центрифугируют в течение 10 минут. Далее, на рефрактометре определяют коэффициент преломления сыворотки и коэффициент преломления молока, после чего отнимают полученное значение сыворотки от молока, полученная разница является процентным содержанием белка в молоке. Но данный метод не определяет восстановленное молоко или присутствие его в цельном молоке. Технической задачей реализации настоящего изобретения, является достижение быстрого определения (в течение 20-25 минут) присутствия восстановленного (порошкового) молока в цельном при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы натуральности молока. Указанный результат достигается отделением казеина (основной фракции белка) молока от сыворотки молока с последующим его микроскопическим исследованием. Отделение казеина осуществляется следующим образом в пробирку наливают 15 мл молока,добавляют 15 капель 4 раствора хлорида кальция,перемешивают, затем помещают в водяную баню(100 С) и кипятят 10 минут, далее пробирки извлекают, энергичным встряхиванием разрушают белковый сгусток (казеин) после чего содержимое фильтруют через бумажный фильтр. Микроскопическое исследование проводится в следующем порядке на предметное стекло наносят освобожденный от сыворотки кофеин размером с горошину и шлифованным краем другого предметного стекла равномерно распределяют его по большей части предметного стекла, то есть делают мазок(аналогично мазку крови). Казеиновый мазок не должен быть толстым. Далее необходимо провести микроскопию под малым и среднем увеличении микроскопа (х 60, х 150, х 600). При микроскопическом анализе учитывается структура казеина, которая сравнивается с рисунками на фиг.1. Рисунки, отраженные на фиг.1 были получены экспериментальным путем- Цельным молоком являлась стойловая проба натуральное коровье молоко,- Восстановленное молоко было получено разбавлением сухого молочного порошка в теплой- Цельное и восстановленное молоко было перемешано собой между в пропорции 11. На фиг.1 в столбике 1 показана структура мазка казеина цельного молока (ЦМ), мицелий которого имеет своеобразную полосчатую рыхлость в столбике 2 структура мазка казеина восстановленного молока (ВМ), приготовленного из сухого молока, где белок группируется в глыбки неправильной формы разного размера и увеличенного диаметра казеиновых частиц в столбике 3 - структура мазка казеина цельного молока, содержащего 50 восстановленного молока, имеющий однородный песчаный рисунок Кроме этого, проводят микроскопирование мазка цельного молока (стойловой пробы), в котором подсчитывают количество жировых шариков,которых составляет в 10-15 раз больше, чем в восстановленном молоке, приготовленном из сухого порошкового молока. По форме и структуре жировые шарики не отличаются друг от друга, а размеры некоторых жировых шариков восстановленного молока больше в 2-3 раза, чем цельного молока. Увеличение размера отдельных жировых шариков связано с тем, что при изготовлении восстановленного молока, под действием высоких температур, происходит более сильная денатурация белка оболочек шариков жира и нарушение целостности некоторых оболочек, в результате чего часть шариков жира сливается в более крупные. Изобретение позволяет получить возможность экспресс оценки натуральности молока, а именно установление наличия или отсутствия в цельном молоке примеси восстановленного молока(порошкового). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ микроскопического определения восстановленного молока, включающий отделение казеина от сыворотки молока, перемешивание,кипячение в водяной бане при 100 С в течение 10 минут, разрушение встряхиванием белкового сгустка (казеина), отличающийся тем, что сыворотку отделяют путм добавления в пробирку к 15 мл молока 15-и капель 4 раствора хлорида кальция, полученную смесь, после выдержки в водяной бане, фильтруют и микроскопируют полученный казеин под малым увеличением микроскопа, при котором учитывают его структуру и проводят оценку присутствия примеси восстановленного молока, а также производят сравнительную оценку количества и размера жировых шариков цельного молока (стойловой пробы) с таковыми в исследуемой пробе, при этом в цельном молоке их в 10-15 раз больше, а размер некоторых жировых шариков в восстановленном молоке больше в 2-3 раза, чем в цельном.