Способ определения безопасности мяса контактным биотестированием

(51) 12 1/02 (2006.01) 01 33/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ мяса путем использования биологических тест объектов инфузорийв микро аквариуме с добавлением в него исследуемого образца, нанесенного на фильтровальную бумагу и визуальной оценкой общей токсичности. Указанный результат достигается путем предварительной подготовки инфузорий и оценки общей токсичности исследуемого образца по хемотаксису (положительному, отрицательному),времени и проценту гибели инфузорий под действием мясного сока, которым пропитана фильтровальная бумага. Применение разработанного способа определения безопасности мяса биотестированием,повысит качество проведения работы специалистами лабораторий ветеринарносанитарной экспертизы и пищевой безопасности в осуществлении достоверной оценки качества и безопасности мяса убойных животных без применения какого-либо аналитического оборудования.(72) Балджи Юрий Александрович Майканов Балгабай Садепович Кожухова Екатерина Владимировна(73) Акционерное общество Казахский агротехнический университет им. С.Сейфуллина(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ МЯСА КОНТАКТНЫМ БИОТЕСТИРОВАНИЕМ(57) Изобретение относится к способам биотестирования, ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения общей токсичности мяса, и может быть использовано при проведении оценки качества и безопасности мяса в ветеринарных лабораториях и лабораториях пищевой безопасности. Технической задачей реализации настоящего изобретения, является определение безопасности Изобретение относится к способам биотестирования, ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения общей токсичности мяса, и может быть использовано при проведении оценки качества и безопасности мяса в ветеринарных лабораториях и лабораториях пищевой безопасности. Предметом контроля и мониторинга пищевой промышленности являются объекты не просто переменного, но принципиально неопределенного состава, характеризующиеся большим числом многокомпонентных ингредиентов, способных, к тому же, изменять свои частные свойства под влиянием внешних факторов. В результате протекающих,при этом,химических и биохимических реакций образуются новые соединения, зачастую обладающие выраженной негативной биологической активностью, к тому же не способных идентифицироваться современным аналитическим оборудованием, которое определяет лишь конкретные контаминанты либо токсические элементы, либо антибиотики, либо пестициды,нитраты и т.п., что в итоге затрудняет дать оценку общей токсичности исследуемого продукта. Одним из способов решения данной проблемы является применение биологических методов(биотестов), способных на себе моделировать общее токсическое действие продуктов питания,содержащих какие-либо ксенобиотики, обладающих токсическими свойствами. В настоящее время разработано большое количество способов биотестирования водных сред,воздуха, почв, кормов, использующих в качестве тест-организмов разнообразных гидробионотов, но имеются единичные способы биотестирования продуктов питания. Гидробионты относятся к таким группам животных, как простейшие (инфузории,жгутиконосцы), кишечнополостные (гидра), черви(дафнии,гаммарусы), моллюски (пластинчатожаберные,брюхоногие), рыбы. По литературным данным,наиболее распространены способы биотестирования таких сред, где в качестве тест-организмов используют дафний и инфузорий. Это обусловлено тем,что по сравнению со способами биотестирования, использующими пиявок и рыб,способы, использующие простейших, обладают большей чувствительностью к основным классам токсикантов. Известен способ комплексной оценки токсичности кормовых и пищевых продуктов Гроздов А.О. Патент 2266015, заявка 2001123068/13 от 16.08.2001. Сущность предложенного способа оценки токсичности заключается в следующем одновременно готовят водный раствор ацетонового экстракта и водный раствор исследуемого продукта, затем инкубируют инфузориив том и другом растворах. Оценку токсичности производят в водном растворе ацетонового экстракта продукта по проценту выживаемости инфузорий за определенный период времени,а оценку токсичности водного экстракта того же продукта 2 определяют по времени полной гибели инфузорий. В качестве питания, для выращивания инфузорий, применяют специально подготовленные зерна риса. Недостатком способа является использование химических реактивов и некоторая сложность выполнения исследований. Известен,также,способ определения токсичности кормов для сельскохозяйственных животных с тестированием водных растворов исследуемых проб с помощью культуры инфузорийАгеев В., Долторниязов И. Определение токсичности корма. Птицеводство, 8,1988, с.42 Недостатком способа является то, что для проведения биотестирования требуется 24 часовая подготовка инфузорий к биоанализу. В результате этого, общая длительность анализа составляет более суток, что не приемлемо в производственных условиях лабораторий ветеринарно-санитарной экспертизы, требующих экспрессность методик. Также, общим недостатком, приведенных способов, является использование большого объема биологических тест организмов, что затрудняет оценку токсического действия испытуемого образца. Наиболее близкого способа к заявленному, нам найти не удалось, но общим во всех приведенных явилось использование для анализа биологических тест объектов - инфузорий,учет их поведенческой реакции (положительный и отрицательный хемотаксис),процента выживаемости и времени гибели. Технической задачей реализации настоящего изобретения, является определение безопасности мяса путем использования биологических тест объектов инфузорийв микро аквариуме с добавлением в него исследуемого образца, нанесенного на фильтровальную бумагу и визуальной оценкой общей токсичности. Указанный результат достигается путем предварительной подготовки инфузорий и оценки общей токсичности исследуемого образца по хемотаксису (положительному, отрицательному),времени и проценту гибели инфузорий под действием мясного сока, которым пропитана фильтровальная бумага. Предварительная подготовка инфузорий осуществляется путем их культивирования в отстоявшейся воде при комнатной температуре (1823 С) без попадания прямых солнечных лучей с добавлением в качестве питательной среды сухих кулинарных дрожжей или сенного экстракта. В результате, на 3-4 день, концентрация парамеций должна быть приблизительно 5000 ед/мл. Подготовленные таким образом тест организмы,можно использовать в течении месяца. Способ выполняется следующим образом. На предметное стекло, с помощью дозатора, наносится капля (микро аквариум) объемом 10 мкл с содержанием культуры биологических тестобъектов -. Под микроскопом подсчитывается количество парамеций, которых в данном объеме должно быть около 50 единиц, и их поведенческую реакцию(должен быть положительный хемотаксис). Затем необходимо пропитать диск фильтровальной бумаги (полоску фильтровальной бумаги) непосредственно мясным соком, который выделяется из мяса при его разрезе(т.е. путем вложения диска или полоски фильтровальной бумаги в мышечный разрез). Далее отрезают от пропитанной фильтровальной бумаги часть наименьшего размера (не более 0,51,0 мм), который вносят в микро аквариум, содержащий инфузории. При этом, под малым и среднем увеличении микроскопа виден полностью микродиск,что легко позволяет изучить поведенческую реакцию тест-объектов,т.е. положительный и отрицательный хемотаксис, а также, определить время и процент гибели биотестов. Таким образом, исключается необходимость приготовления мясной вытяжки, что сокращает время выполнения способа,кроме этого,концентрация мясного сока составляет 100, т.е. не разбавляется водой. Простейшие, как и все подвижные организмы,обладают реакцией направленного перемещения популяции под воздействием химических веществ. Хемотаксис имеет токсикологическую интерпретацию микроорганизмы уходят из зоны опасности в безопасную зону или к источникам корма. В случае присутствия в исследуемом мясе остаточных количеств каких-либо токсических веществ будет наблюдаться отрицательное их влияние на инфузорий, в результате чего парамеции в течении 5-8 секунд отдалятся от опасного объекта и сконцентрируются в отдалении от него (по краям микро аквариума). Под действием токсических веществ, инфузории могут выполнять вращательные движения на месте, вокруг своей оси. Оценка результата безопасности мяса определяется следующим образом- не токсично тест организмы в течении 15 минут не погибают, наблюдается положительный хемотаксис,т.е. инфузории не избегают пропитанной части фильтровальной бумаги, а наоборот концентрируются возле нее- умерено токсично погибает в течении 15 минут от 30 до 50 инфузорий,наблюдается отрицательный хемотаксис- токсично в течении 15 минут погибает 60100 инфузорий, наблюдается резко выраженный отрицательный хемотаксис высокотоксично инфузории погибают мгновенно или в течении 1 минуты. Применение разработанного способа определения безопасности мяса контактным биотестированием, повысит качество проведения работы специалистами лабораторий ветеринарносанитарной экспертизы и пищевой безопасности в осуществлении достоверной оценки качества и безопасности мяса убойных животных без применения какого-либо аналитического оборудования. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения безопасности мяса контактным биотестированием,включающий использование в качестве биологических тест объектов - инфузорий Р ,изучение положительного и отрицательного хемотаксиса, а также, определение процента выживаемости и времени гибели биотестов,отличающийся тем, что на предметное стекло с помощью дозатора наносят микроаквариум объемом 10 мкл с содержанием около 50 единиц инфузорий,затем пропитывают диск фильтровальной бумаги мясным соком и отрезают от пропитанной бумаги часть наименьшего размера (не более 0,51,0 мм),который вносят в микроаквариум, содержащий инфузории, при этом под малым и средним увеличении микроскопа учитывают происходящие изменения.