Способ определения безопасности мяса биотестированием

(51) 12 1/02 (2006.01) 01 33/12 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ мяса путем использования биологических тест объектов инфузорийв микро аквариуме с добавлением в него исследуемого образца, нанесенного на фильтровальную бумагу и визуальной оценкой общей токсичности. Указанный результат достигается путем предварительной подготовки инфузорий и оценки общей токсичности исследуемого образца по хемотаксису (положительному, отрицательному),времени и проценту гибели инфузорий под действием мясной водной вытяжки, приготовленной 14 и пропитанной фильтровальной бумагой. Применение разработанного способа определения безопасности мяса биотестированием,повысит качество проведения работы специалистами лабораторий ветеринарносанитарной экспертизы и пищевой безопасности в осуществление достоверной оценки качества и безопасности мяса убойных животных без применения какого-либо аналитического оборудования.(72) Балджи Юрий Александрович Майканов Балгабай Садепович Сатиева Радгуль Ратбековна(73) Акционерное общество Казахский агротехнический университет им. С.Сейфуллина(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ МЯСА БИОТЕСТИРОВАНИЕМ(57) Изобретение относится к способам биотестирования, ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения общей токсичности мяса, и может быть использовано при проведении оценки качества и безопасности мяса в ветеринарных лабораториях и лабораториях пищевой безопасности. Технической задачей реализации настоящего изобретения, является определение безопасности Изобретение относится к способам биотестирования, ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения общей токсичности мяса, и может быть использовано при проведении оценки качества и безопасности мяса в ветеринарных лабораториях и лабораториях пищевой безопасности. Современная наука отличается созданием новых методов на стыках различных смежных областей наук. Примером служит развитие биологических методов анализа, базирующихся на достижениях таких областей биологии, как микробиология,зоология, ботаника, а также аналитической химии. Предметом контроля и мониторинга пищевой промышленности являются объекты не просто переменного, но принципиально неопределенного состава, характеризующиеся большим числом многокомпонентных ингредиентов, способных, к тому же, изменять свои частные свойства под влиянием внешних факторов. В результате протекающих,при этом,химических и биохимических реакций образуются новые соединения, зачастую обладающие выраженной негативной биологической активностью, к тому же,не способных идентифицироваться современным аналитическим оборудованием, которое определяет лишь конкретные контаминанты либо токсические элементы, либо антибиотики, либо пестициды,нитраты и т.п., что в итоге затрудняет дать оценку общей токсичности исследуемого продукта. Одним из способов решения данной проблемы является применение биологических методов(биотестов), способных на себе моделировать общее токсическое действие продуктов питания,содержащих какие-либо ксенобиотики, обладающих токсическими свойствами. В настоящее время разработано большое количество способов биотестирования водных сред,воздуха, почв, кормов, использующих в качестве тест-организмов разнообразных гидробионотов, но имеются единичные способы биотестирования продуктов питания. Гидробионты относятся к таким группам животных, как простейшие (инфузории,жгутиконосцы), кишечнополостные (гидра), черви(дафнии,гаммарусы), моллюски (пластинчатожаберные,брюхоногие), рыбы. По литературным данным,наиболее распространены способы биотестирования таких сред, где в качестве тест-организмов используют дафний и инфузорий. Это обусловлено тем,что по сравнению со способами биотестирования, использующими пиявок и рыб,способы, использующие простейших, обладают большей чувствительностью к основным классам токсикантов. Известен способ комплексной оценки токсичности кормовых и пищевых продуктов Гроздов А.О. Патент 2266015, заявка 2001123068/13 от 16.08.2001. Сущность предложенного способа оценки токсичности заключается в следующем одновременно готовят водный раствор ацетонового экстракта и водный раствор исследуемого продукта, затем инкубируют 2 инфузориив том и другом растворах. Оценку токсичности производят в водном растворе ацетонового экстракта продукта по проценту выживаемости инфузорий за определенный период времени,а оценку токсичности водного экстракта того же продукта определяют по времени полной гибели инфузорий. В качестве питания, для выращивания инфузорий, применяют специально подготовленные зерна риса. Недостатком способа является использование химических реактивов и некоторая сложность выполнения исследований. Известен,также,способ определения токсичности кормов для сельскохозяйственных животных с тестированием водных растворов исследуемых проб с помощью культуры инфузорийАгеев В., Долторниязов И. Определение токсичности корма. Птицеводство, 8,1988, с.42 Недостатком способа является то, что для проведения биотестирования требуется 24 часовая подготовка инфузорий к биоанализу. В результате этого, общая длительность анализа составляет более суток, что не приемлемо в производственных условиях лабораторий ветеринарно-санитарной экспертизы, требующих экспрессность методик. Также, общим недостатком приведенных способов является использование большого объема биологических тест организмов, что затрудняет оценку токсического действия испытуемого образца. Наиболее близкого способа к заявленному, нам найти не удалось, но общим во всех приведенных явилось использование для анализа биологических тест объектов - инфузорий,учет их поведенческой реакции (положительный и отрицательный хемотаксис),процента выживаемости и времени гибели. Технической задачей реализации настоящего изобретения, является определение безопасности мяса путем использования биологических тест объектов инфузорийв микро аквариуме с добавлением в него исследуемого образца, нанесенного на фильтровальную бумагу и визуальной оценкой общей токсичности. Указанный результат достигается путем предварительной подготовки инфузорий и оценки общей токсичности исследуемого образца по хемотаксису (положительному, отрицательному),времени и проценту гибели инфузорий под действием мясной водной вытяжки, приготовленной 14 и пропитанной фильтровальной бумагой. Предварительная подготовка инфузорий осуществляется путем их культивирования в отстоявшейся воде при комнатной температуре (1823 С) без попадания прямых солнечных лучей с добавлением, в качестве питательной среды, сухих кулинарных дрожжей или сенного экстракта. В результате на 3-4 день концентрация парамеций должна быть приблизительно 5000 ед/мл. Подготовленные таким образом тест организмы,можно использовать в течении месяца. Водная мясная вытяжка готовится путем мелкого нарезания 10 г, с отобранных проб исследуемого мяса, его перетирания в ступке, добавлением 40 мл дистиллированной воды с температурой 43-45 С,тщательным перемешиванием в течение 1015 минут и фильтрованием. Способ выполняется следующим образом. На предметное стекло с помощью дозатора наносится капля (микро аквариум) объемом 10 мкл с содержанием культуры биологических тестобъектов -. Под микроскопом подсчитывается количество парамеций, которых в данном объеме, должно быть около 50 единиц, и их поведенческую реакцию(полоску) фильтровальной бумаги подготовленной исследуемой вытяжкой и отрезают от бумаги часть наименьшего размера (не более 0,51,0 мм), который вносят в микро аквариум,содержащий инфузории. При этом, под малым и средним увеличении микроскопа виден полностью микродиск,что легко позволяет изучить поведенческую реакцию тест-объектов,т.е. положительный и отрицательный хемотаксис, а также определить время и процент гибели биотестов. Простейшие, как и все подвижные организмы,обладают реакцией направленного перемещения популяции под воздействием химических веществ. Хемотаксис имеет токсикологическую интерпретацию микроорганизмы уходят из зоны опасности в безопасную зону или к источникам корма. В случае присутствия в исследуемом мясе остаточных количеств каких-либо токсических веществ будет наблюдаться отрицательное их влияние на инфузории, в результате чего парамеции в течении 5-8 секунд отдалятся от опасного объекта и сконцентрируются в отдалении от него (по краям микро аквариума). Под действием токсических веществ, инфузории могут выполнять вращательные движения на месте вокруг своей оси. Оценка результата безопасности мяса определяется следующим образом- не токсично тест организмы в течение 15 минут не погибают, наблюдается положительный хемотаксис,т.е. инфузории не избегают пропитанной части фильтровальной бумаги, а наоборот концентрируются возле нее- умерено токсично погибает в течение 15 минут от 30 до 50 инфузорий,наблюдается отрицательный хемотаксис- токсично в течении 15 минут погибает 60100 инфузорий, наблюдается резко выраженный отрицательный хемотаксис высокотоксично инфузории погибают мгновенно или в течении 1 минуты. Применение разработанного способа определения безопасности мяса биотестированием,повысит качество проведения работы специалистами лабораторий ветеринарносанитарной экспертизы и пищевой безопасности в осуществление достоверной оценки качества и безопасности мяса убойных животных без применения какого-либо аналитического оборудования. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения безопасности мяса контактным биотестированием,включающий использование в качестве биологических тест объектов - инфузорий Р ,изучение положительного и отрицательного хемотаксиса, а также определение процента выживаемости и времени гибели биотестов,отличающийся тем, что на предметное стекло с помощью дозатора наносят микроаквариум объемом 10 мкл с содержанием около 50 единиц инфузорий,затем пропитывают диск фильтровальной бумаги подготовленной исследуемой мясной водной вытяжкой в соотношении 14 и отрезают от пропитанной бумаги часть наименьшего размера (не более 0,51,0 мм), который вносят в микро аквариум, содержащий инфузории, при этом под малым и среднем увеличении микроскопа учитывают происходящие изменения.