Штамм микромицета aspergillus awamori 1-8-продуцент комплекса пектинрасщепляющих ферментов

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к микробиологической промышленности, и касается создания нового штамма гриба 1-8 из исходной культуры 16. Полученная культура может быть как продуцент пектинрасщепляющих ферментов применяемых в пищевой промышленности для увеличения выхода плодовоовощных продукции из сырья и осветления и стабилизации виноматериалов. Штамм получен при длительном культивировании иммобилизованной культуры 16. Предпосылками для образования активного варианта 1-8 были стрессы, которые испытывала исходная культура в процессе длительного культивирования,что и способствовало образованию активной культуры.(72) Блиева Раушан Кажкеновна Искакбаева Жанар Алибаевна Сулейменова Жанара Бегежановна Рахметова Жанар Кайыргазыкызы Нурлыбаева Азиза Ергалиевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан Суть изобретения. Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в производстве ферментов для пищевой,легкой промышленности и кормопроизводства. Новый селективный бесспоровый штамм получен при естественных условиях длительного непрерывного культивирования исходной культуры без применения мутагенов путем выращивания исходной культуры 16 в иммобилизованном состоянии на подложке с периодической сменой питательной среды и удаления скапливающейся биомассы с использованием Патента 1047954. При таком культивировании сформировалась селективная высокоактивная бесспоровая культура 1-8. Описание изобретения. Получен новый высокоактивный бесспоровый штамм 1-8,обладающий способностью синтезировать комплекс пектинрасщепляющих ферментов,разрушающий пектиновые полисахариды как гидролитическим, так и элиминативным механизмом действия, расщепляя 1-4 связи пектинов различной степени метоксилирования. Изобретение относится к микробиологической промышленности и защищает собой новый бесспоровый высокоактивный продуцент пектинрасщепляющих ферментов 1-8, обладающий гидролитическими и лиазными ферментами, который может быть использован как высокоактивный продуцент в производстве ферментов. Штамм получен селекцией без применения мутагенов химической и физической природы путем отбора изолятов с подложки при длительном культивировании продуцента в иммобилизованном состоянии. Отбор изолятов проходил в несколько этапов, связанных с удалением мицелия с подложки. Полученный штамм бесспоровый и активнее исходной по образованию комплекса пектинрасщепляющих ферментов. Комплексные пектинрасщепляющие ферменты имеют большое промышленное значение в различных отраслях биотехнологии при получении пищевых пектинов,для интенсификации производства соков из плодоовощного сырья и осветления виноматериалов, при растяжке мехового и кожевенного сырья, а также при облагораживания кормового сырья. В связи с этим, селекция новых штаммов-продуцентов комплексных пектинрасщепляющих ферментов актуальна. Кроме того, получение бесспоровых культур экологически безопасно для применения их в пищевой промышленности. Известен продуцент пектинрасщепляющих ферментов(ПТЭ-1) ВКПМ -317), который разрушает пектиновые полисахариды только по элиминативному механизму действия в количестве от 10 до 12 ед/мл. Известен также продуцент пектинрасщепляющих ферментов -(Предпатент РК 2006/0089.1), образующий целевой фермент в 2-3 раза активнее, чем известные продуценты. Однако данный продуцент не образует комплекса пектинрасщепляющих ферментов и расщепляет пектины только по элиминативному механизму действия. Поэтому несмотря на высокую ферментативную активность данный продуцент не будет полностью расщеплять пектиновые полисахариды. Наиболее близким к заявляемому объекту является получение продуцента пектолитических ферментов . 379- (ВКПМ -962) многоступенчатой селекцией из штамма . 37 (ЦМПМ-270) с использованием мутагенов. Полученный штамм . 379- позволяет синтезировать комплекс пектинрасщепляющих ферментов с высоким уровнем активности эндополигалактуроназы,-глюканаз,ксиланаз,целлюлаз, манназ и хитиназ. Однако данный продуцент не образует пектинлиазные ферменты. Поэтому несмотря на комплекс ферментов,образуемых данным штаммом, он не осуществляет полного гидролиза пектиновых веществ.(А.с. РФ 2393212 кс 1 27.06.2010). Задача изобретения -получение нового штамма микромицета -продуцента широкого комплекса пектинразрушающих ферментов, обладающего полиметилгалактуронатлиазной(ПМГ) и полигалактуроназной (ПГ) активностями. Нами получен новый продуцент пектинрасщепляющих ферментов,который расщепляет пектины гидролитическим и элиминативным механизмом действия, образуя целевые ферменты на высоком ферментативном уровне. Продуцент получен без применения мутагенных факторов путем выращивания исходной культуры в иммобилизованном состоянии на подложке длительное время при непрерывном культивировании с периодической сменой питательной среды. При таком культивировании культура испытывает ряд стрессов механическое повреждения гиф при снятии мицелия с подложки,смену обедненной питательной среды и сам процесс длительного культивирования. В таких условиях сформировалась селективная бесспоровая высокоактивная культура 1-8. Штамм не патогенный. Он депонирован в Республиканской коллекции микроорганизмов МОН РК. Штамм 1-8 поддерживается на среде Ролена. Состав среды Ролена (в) глюкоза-2 агар-2,0 4 О 3 -0,03 КН 2 РО 4 - 0,1 О 4 - 0,001 рН 7,2-7,3. Штамм высевается на косяках со средой Ролена,выращивается в термостате при 26-28 С в течении 5-7 суток и хранится в холодильнике при 4 С. Пересев культуры проводится один раз в 4-6 месяцев. Полученный штамм 1-8 имеет следующие характеристики. Культурально-морфологические признаки Колонии полученной культуры без спорообразования, в молодом возрасте без пигментации, с возрастом преобретают бежеватый оттенок. На обратной стороне колонии неокрашенные или слегка желтоватые, экссудата нет. Колонии гладкие, слегка выпуклые, форма округлая. Конидиеносцы бесцветные, гладкие,иногда шероховатые. По морфологическим признакам культура представляет сильно ветвящийся мицелий. Запах культуры несильный,неясный. Физиолого-биохимическая характеристика Отношение к кислороду - аэроб. Оптимальная температура роста 26-28 С. Хорошо усваивает глюкозу, мальтозу, пектин. Слабо усваивает лактозу, галактозу, маннит, сахарозу, крахмал. Использует неорганические и органические источники азота О 3, (4)2 О 4,(4)2 О 4,4 44 43, 4, казеин, пептон. Изучение свойств полученного штамма вели двумя методами выращивания - обычным периодическим методом глубинного культивирования, когда продуцент выращивали в свободном состоянии в периодических условиях культивирования. Второй метод заключается в выращивании продуцентов в иммобилизованном состоянии в нитчато-губчатой структуре длительное время. При выращивании штамм 1-8 в периодических условиях культивирования максимальное образование комплекса пектинрасщепляющих ферментов происходит на третьи сутки с постепенным падением активности к 96 часам выращивания. При выращивании же этой культуры длительное время в иммобилизованном состоянии биосинтез комплекса пектинрасщепляющих ферментов идет непрерывно на высоком ферментативном уровне в течения 210250 часов с получением целевого продукта через каждые двое - трое суток культивирования. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1 Новый бесспоровый высокоактивный штамм 1-8 выращивали на среде Ролена в пробирках диаметром 1,5-1,7 см и длиной 18-20 см. Засев косяков проводили суспензией конидий,выращенных в течение 5-7 суток при 30 С. Посевным материалом для культивирования служила водная суспензия конидий, вносимая в количестве 2 к объему питательной среды. Выращивание культуры проводили в условиях длительного культивирования на подложке в иммобилизованном состоянии, в глубинных условиях роста при 26-28 С на среде следующего состава глюкоза 2, пектин 0,5 (4)2 4 КН 2 Р 4 - 0,1 4 - 0,001 -0.05 4-0.05. Эндополигалактуроназная активность характеризует способность фермента снижать вязкость 1-ного раствора пектина. Культивирование штамма 1-8 осуществляли в аппарате по А.с. 1047954 с получением активной культуральной жидкости через каждые 2-3 суток выращивания с образованием полиметилгалактуроназы (ПМГ),активность которой определяли по способности снижения вязкости субстрата - 1-ного раствора яблочного пектина за 30 сек. при 30 С-20,2 и эндополигалактуроназы (ПГ), которая снизила вязкость субстрата- 1 пектовой кислоты за 30 сек. 30 С на 21,3. Пример 2. Процедура выращивания штамма 1-8 повторяется аналогично примеру 1, но в отличие от него выращивание осуществляют со снятием мицелия с подложки. Эта процедура активизирует культуру и биосинтез ферментов увеличивается в два - три раза. Практическая значимость. Комплексный ферментный препарат, расщепляющий пектиновые вещества, образуемый штаммом 1-8 может быть использован для увелечения выхода сока из плодоовощного сырья и улучшения качества виноматериалов, а также в кормопроизводстве в составе мультиэнзимных комплексных ферментных препаратов, обеспечивающие снятие слизистых образований в кишечнике птицы, усвоения труднорасщепляемых некрахмалистых и крахмалистых полисахаридов. Штамм 1-8 - новый продуцент пектинрасщепляющих ферментов,отличающийся тем, что он является бесспоровым и высокоактивным в образовании гидролитических и лиазных ферментов участвующих в гидролизе пектина. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм микромицета А 16-. 1-8-7, депонированный в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов КН МОН РК, под номером В РКМ-0477,продуцент комплекса пектинрасщепляющих ферментов.