Способ выделения лактоферрина из молозива

(51) 61 35/20 (2006.01) 61 38/40 (2006.01) 01 15/08 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ производящей препараты лечебного и профилактического назначения, и может быть использовано для выделения лактоферрина из молозива. Способ выделения лактоферрина из молозива включает осаждение сывороточных белков сернокислым аммонием, при этом предварительно отделяют казеин, для чего в молозиво,освобожденное от жира и клеточных элементов,вводят раствор 0,1 Н.НС 1 с 4,6, и выдерживают в течение 20 минут при температуре 20 С, после чего центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 минут, жидкий центрифугат собирают, а осадок с казеином выбрасывают. Предлагаемый способ позволяет получить больший выход лактоферрина лучшего качества.(72) Темиргалиева Эльмира Маратовна Туганбекова Мариям Абуовна Сеитов Зулхарнай Сеитович(73) Негосударственное учреждение образования Казахстанско-Российский медицинский университет(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛАКТОФЕРРИНА ИЗ МОЛОЗИВА Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической промышленности, производящей препараты лечебного и профилактического назначения, и может быть использовано для выделения лактоферрина из молозива. Лактоферрин - железосодержащий белок сыворотки молока, является гликопротеином, содержит 7,2 углеводов, имеет молекулярную массу 76143 и состоит из 689 аминокислотных остатков. Он обладает уникальными полифункциональными свойствами антиканцерогенным,антиоксидантным,антибактериальным,противовирусным,противовоспалительным. Наибольшее количество лактоферрина содержится в молозиве - в 10-12 раз больше, чем в молоке. Кроме того, молозиво характеризуется высоким содержанием других биологически активных белков иммуноглобулинов, лизоцима, которые обеспечивают новорожденного детеныша пассивным иммунитетом,предохраняя его от различных болезней. На основе лактоферрина уже создано несколько эффективных лечебных препаратов. Один из них - Лапрот, получен в Московском онкологическом институте имени П.А. Герцена, оказывает широкий диапазон действия, главным из которых является противоопухолевое свойство препарата. Кроме того Лапрот применяется для лечения ревматоидных артритов и местных осложнений. Лактоферрин в Европе, Японии, Южной Корее, Таиланде разрешен к применению в качестве биологически активной добавки к пище. Известен способ выделения лактоферрина из молока,включающий элюирование белка с использованием ступенчатого градиента концентрации бифера,содержащего 0,05 М фосфат с 7,4 с 0,5 М .(Сеитов З.С., Серикбаева Ш.А. Выделение лактоферрина - физиологически активного вещества из кобыльего молока Материалы 3-его Международного Беремжановского съезда, Усть - Каменогорск, 2001 г.,с.224). Недостатком данного способа является то, что такой бифер не полностью вымывает белок с адсорбента. Наиболее близким к предлагаемому является способ выделения лактоферрина из молозива, включающий осаждение сывороточных белков сернокислым аммонием.( .. ., 1999, 58, .211) Недостатком данного способа является то, что осаждение сывороточных белков сернокислым аммонием проводят непосредственно из цельного молозива, предварительно не отделив казеин. Однако в казеиновых мицеллах задерживаются низкомолекулярные белки. А при введении в молозиво соляной кислоты, для осаждения казеина, его мицеллы разрушаются и адсорбированные низкомолекулярные белки, такие как лактоферрин, поступают в сыворотку. Задача изобретения - разработка способа выделения лактоферрина из молозива. Технический результат - предлагаемый способ позволяет получить больший выход лактоферрина лучшего качества. Указанный технический результат достигается тем,что в способе выделения лактоферрина из молозива,включающем осаждение сывороточных белков сернокислым аммонием, отличительной особенностью,согласно изобретению, является то, что предварительно отделяют казеин, для чего в молозиво, освобожденное от жира и клеточных элементов, вводят раствор 0,1 Н.НС 1 с 4,6, и выдерживают в течение 20 минут при температуре 20 С, после чего центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 минут, жидкий центрифугат собирают, а осадок с казеином выбрасывают. Способ осуществляется следующим образом Молозиво, полученное в первые 2 дня после рождения теленка от здоровой коровы, освобождают от жира и клеточных элементов путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 30 минут. Остаток,содержащий клетки, и верхний слой жира отбрасывают. Жидкую часть сливают в один сосуд. Для осаждения казеина вводят раствор 0,1 Н.НС 1 до 4,6, при температуре 20 С выдерживают в течение 20 минут. Затем центрифугируют в тех же условиях, указанных выше. Жидкий центрифугат собирают, измеряют количество, осадок с казеином выбрасывают. В полученную молочную сыворотку при постоянном помешивании добавляют кристаллический сернокислый аммоний до концентрации 2 М. Раствор инкубируют при постоянном помешивании при температуре 4 С в течение 8-10 часов, затем центрифугируют при 1000 об/мин 60 мин. Осадок удаляют, надостаточную жидкость пропускают через хроматографическую колонку с силосорбом С 18 (2,410 см). После того, как весь объем, содержащий лактоферрин,пропущен через колонку, начинают элюирование белка линейным градиентом концентрации ацетонитрила (от 0 до 60). Лактоферрин выходит из колонки при концентрации ацетонитрила 47-52. Элюат подвергают диалогу, лиофильной сушке и получают сухой порошок лактоферрина. Чистоту получаемого по предлагаемому способу препарата проверяли при помощи электрофореза в полиакриламидном геле. На электофореграмме образовалось только одно пятно, что доказывает гомогенность полученного белка. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ выделения лактоферрина из молозива,включающий осаждение сывороточных белков сернокислым аммонием, отличающийся тем, что предварительно отделяют казеин, для чего в молозиво,освобожденное от жира и клеточных элементов, вводят раствор 0,1 Н.НС с 4,6 и выдерживают в течение 20 минут при температуре 20 С, после чего центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 минут,жидкий центрифугат собирают, а осадок с казеином выбрасывают.