Способ выделения ДНК сельскохозяйственных животных

(51) 07 21/04 (2006.01) 12 15/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ генетической гетерогенности, путем выявления микро - и минисателлитных ДНК и создания банка ДНК животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением выражается в изыскании оптимального способа выделения ДНК для создания банка данных ДНК сельскохозяйственных животных. Способ выделения ДНК сельскохозяйственных животных,включающий использование для выделения ДНК буфера для экстракции с протеиназой К и инкубирование в течение 12 часов,ДНК выделяют НВ-буфером и инкубируют в течение 10 минут.(72) Батырханов Мархабат Серикбаевич Тореханов Айбын Адепханович Спанов Абзал Абушакипович(56) Батырханов М.С Тореханов А.А., Бурабаев А.А., Медетова А.К. Методы проведения ПЦРамплификации Методические рекомендации.Алматы, 2006. с.11-12(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для изучения 22174 Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для изучения генетической гетерогенности, путем выявления микро - и минисателлитных ДНК и создания банка ДНК животных. Известен способ выделения ДНК сельскохозяйственных животных, включающий использование для выделения ДНК буфера для экстракции с протеиназой К и инкубирование в течение 12 часов Батырханов М.С., Тореханов А.А.,Бурабаев А.А., Медетова А.К. Методы проведения ПЦР амплификации Методические рекомендации. Алматы, 2006. с.11-12. Недостатком известного способа является временные и материальные затраты связанные с использованием протеиназы К. Задачей изобретения является выделение ДНК из цельной крови животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением выражается в изыскании оптимального способа выделения ДНК для создания банка данных ДНК сельскохозяйственных животных. Способ выделения ДНК сельскохозяйственных животных,включающий использование для выделения ДНК буфера для экстракции с протеиназой К и инкубирование в течение 12 часов,ДНК выделяют НВ-буфером и инкубируют в течение 10 минут. Способ выделения ДНК из цельной крови сельскохозяйственных животных осуществляют следующим образом. Пример. Выделение ДНК из цельной крови сельскохозяйственных животных. 100 мкл крови переносят в пробирку типа Эппендорф с подогретым НВ-буфером, состоящим из додецилсульфат натрия 2, этилендиаминтетраацетат 10 мМ, хлорид натрия 350 мМ, реагент буферной емкости раствора Трис НС 1 рН 8.0 100 мМ и мочевины 7 М. Смешанные компоненты осторожно перемешивают и инкубируют при 60 С в течение 10 минут. Гомогенат тщательно перемешивают тефлоновым пестиком и инкубируют в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляют равный объем смеси фенол/хлороформ/изоамиловый спирт, содержащий фенол (перегнанный) 25 частей от объема, хлороформ (перегнанный) 24 части от объема, изоамиловый спирт 1 часть от объема. Полученную смесь осторожно перемешивают и центрифугируют в течение 10 минут при 13400 об/мин в настольной центрифуге. Водную фазу реэкстрагируют равным объемом смеси хлороформ/изоамиловый спирт,содержащий хлороформ (перегнанный) 24 части от объема и изоамиловый спирт 1 часть от объема. Полученную дисперсию осторожно перемешивают и центрифугируют 10 минут при 13400 об/мин в настольной центрифуге. ДНК из водной фазы осаждают центрифугированием с добавлением 0,54 объема изопропилового спирта. Осадок ДНК дважды отмывают 70 этанолом и растворяют в бидистиллированной воде. Чистоту полученных препаратов определяют электрофорезом в 1-ном агарозном геле,окрашивают бромистым этидием и визуализируют на приборе-. Электрофоретическое разделение ДНК в агарозном геле. Агарозный гель готовят на основе трис-ацететного буфера,содержащего 40 мМ трис-, рН 7,5-8,0, 5 мМ уксуснокислый , 1 мМ ЭДТА. Электрофорез проводят при напряжении 80-100 В. На одну дорожку наносят от 0,2 до 0,5 мкг ДНК. После электрофореза гели окрашивают флуоресцирующим красителем бромистым этидием и анализируют с помощью прибора - фирмы - в проходящем ультрафиолетовом свете при длине волны от 260 до 360 нм. На фиг. 1 и 2 представлены результаты электрофоретического разделения ДНК сельскохозяйственных животных выделенные с использованием НВ-буфера. Из фиг. 1 и 2 видно, что применение способа выделения ДНК сельскохозяйственных животных позволит выделить ДНК из цельной крови животных и получить образцы высокомолекулярных ДНК без примесей РНК. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ выделения ДНК сельскохозяйственных животных,включающий использование для выделения ДНК буфера для экстракции с протеиназой К и инкубирование в течение 12 часов,отличающийся тем, что ДНК выделяют НВбуфером и инкубируют в течение 10 минут.