Способ получения препарата “Биоконс”

(51) 23 1/165 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Задачей и техническим результатом предлагаемого изобретения является усовершенствование способа получения биологически активного препарата Биоконс с повышенной антагонистической активностью. Это достигается тем, что способ получения биологически активного препарата Биоконс предусматривает культивирование молочнокислых бактерий - консорциума культур-67,.-22,-104,- 2 в соотношении 1111 на питательной среде,содержащий глюкозу, дрожжевой автолизат, натрий хлористый, воду, 20-25 г/л соевой муки, а также магний сернокислый в количестве 0,10-0,15 г/л и ацетат натрия в количестве 5-6 г/л, смешивание биомассы с сахаросодержащей средой и лиофильное высушивание.(72) Дудикова Галина Николаевна Орлюк Татьяна Михайловна Чижаева Анна Викторовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт переработки сельскохозяйственной продукции(56) Патент Российской Федерации 2280465, кл. А 61 К 35/66, А 23 К 1/165, 2005(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА БИОКОНС(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к технологии получения бактериальных препаратов, и может быть использовано в ветеринарии для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц. 23307 Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к технологии получения бактериальных препаратов, и может быть использовано в ветеринарии для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц. Известен способ получения сухого пробиотического препарата Бацелл,предусматривающий глубинное культивирование микроорганизмовВКПМ В-8130,, ВКПМ В - 4625 и-Кг., их смешивание в соотношении 11, засев этой смесью автоклавированного подсолнечникого шроат и инкубирование полученной смеси при 30-45 С в течение 4-8 дней с получением в полувлажном препарате не менее 1108 клеток/г препарата,причм смешивание ведут в соотношении 110-112,влажность препарата составляет 8-10 (Патент Российской Федерации 2280464, по МПК А 61 К 35/66, А 23 К 1/165, публикация 2006 г). Недостатком известного способа является высокая остаточная влажность 8-10, что снижает качество препарата при его хранении. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ получения сухого пробиотического препарата, предусматривающий культивирование молочнокислых бактерий. 39, .83 на питательной среде, содержащий глюкозу, дрожжевой автолизат,натрий хлористый, воду и источник азотистого питания, при этом культивирование проводят в два этапа, на первом этапе разведнные в питательной среде штаммы соединяют 11 и культивируют в течение 24 часов при температуре 37 С, а на втором этапе полученную биомассу смешивают со свежей питательной средой в соотношении 11000 и продолжают культивирование в течение 24 часов при той же температуре, затем проводят смешивание биомассы с сахаросодержащей средой и лиофильное высушивание (Патент Российской Федерации 2280465, по МПК А 61 К 35/66, А 23 К 1/165, публикация 2005 г). К недостаткам известного способа относится то,что по данной технологии получают небольшую биомассу клеток, а приготовленный из них препарат быстро теряет свою биологическую активность. Задачей и техническим результатом предлагаемого изобретения является усовершенствование способа получения биологически активного препарата Биоконс с повышенной антагонистической активностью. Это достигается тем, что способ получения биологически активного препарата Биоконс предусматривает культивирование молочнокислых бактерий - консорциума культур-67,.-22,-104,-2 в соотношении 1111 на питательной среде,содержащий глюкозу, дрожжевой автолизат, натрий хлористый, воду, 20-25 г/л соевой муки, а также магний сернокислый в количестве 0,10-0,15 г/л и ацетат натрия в количестве 5-6 г/л., смешивание биомассы с сахаросодержащей средой и лиофильное высушивание. Способ осуществляют следующим образом. Для получения биологически активного препарата Биоконс используют консорциум молочнокислых бактерий-67,.-22,- 104,-2 в соотношении 1111, который обладает высокой активностью в отношении патогенной микрофлоры и культивируют его в один этап на питательной среде, состоящей из глюкозы 20-25 г/л, соевой муки 20-25 г/л, дрожжевого автолизата 50-55 г/л, магния сернокислого 0,1-0,15 г/л, натрия хлористого 5-6 г/л,ацетата натрия 5-6 г/л и воды до 1 литра. Культивирование осуществляют при температуре 35-37 С в течение 24-48 ч до титруемой кислотности 10-16 град. или 3,5-3,6 ед. активной кислотности. В готовую культуральную жидкость добавляют стерильную защитную среду для высушивания, после чего проводят замораживание при температуре 50-70 С в течение 5-6 часов, затем проводят лиофильное высушивание до остаточной влажности 1,5-2,0. Полученный препарат характеризуется высокой антагонистической активностью, количество живых клеток лактобактерий в одной дозе препарата составляет не менее 1109. Полученный биологически активный препарат Биоконс сравнивали с прототипом по достижению технического результата. Таблица Сравнительная характеристика биологически активного препарата Биоконс и прототипа. Способ получения препарата Наименование показателей предлагаемый По прототипу Антагонистическая активность,35-37 22-23 диаметр зоны подавления роста тест - культуры, мм Пример 1. Для получения биологически активного препарата Биоконс использовали консорциум молочнокислых бактерий-67,.-22,-104,-2 в соотношении 1111. Засевную культуру 2 молочнокислых бактерий выращивали на среде МРС или оптимизированной среде до стационарной стадии роста (24 ч) при температуре 35 С. Титр клеток перед посевом достигал значения 1109 КОЕ/мл. Затем культуры смешивали и проводили засев питательной среды в количестве 5 от объма. Питательную среду готовили из глюкозы 23307 20 г/л, соевой муки 20 г/л, дрожжевого автолизата 50 г/л, магния сернокислого 0,1 г/л натрия хлористого 5 г/л, ацетата натрия 5 г/л и воды до 1 литра. Культивирование осуществляли при температуре 35 С в течение 24 ч до титруемой кислотности 10 град, или 3,5 ед. активной кислотности. В готовую культуральную жидкость добавляли стерильную защитную среду для высушивания, после чего проводили замораживание при температуре 50 С в течение 5 часов, затем лиофильно высушивали в вакуум-сушильном аппарате до остаточной влажности 2,0. Препарат представлял собой сухую пористую массу желтовато-белого цвета. Пример 2. Для получения биологически активного препарата Биоконс использовали консорциум молочнокислых бактерий-67,.-22,-104,-2 в соотношении 1111. Засевную культуру молочнокислых бактерий выращивали на среде МРС или оптимизированной среде до стационарной стадии роста (24 ч) при температуре 35 С. Титр клеток перед посевом достигал значения 1109 КОЕ/мл. Затем культуры смешивали и проводили засев питательной среды в количестве 5 от объма. Питательную среду готовили из глюкозы 20 г/л,соевой муки 25 г/л, дрожжевого автолизата 50 г/л,магния сернокислого 0,15 г/л, натрия хлористого 5 г/л, ацетата натрия 7 г/л и воды до 1 литра. Культивирование осуществляли при температуре 35 С в течение 24 ч до титруемой кислотности 10 град, или 3,5 ед. активной кислотности. В готовую культуральную жидкость добавляли стерильную защитную среду для высушивания, после чего проводили замораживание при температуре 50 С в течение 5 часов, затем лиофильно высушивали в вакуум-сушильном аппарате до остаточной влажности 2,0. Препарат представлял собой сухую пористую массу желтовато-белого цвета. Пример 3 Для получения биологически активного препарата Биоконс использовали консорциум молочнокислых бактерий-67,.-22,-104,-2 в соотношении 1111. Засевную культуру молочнокислых бактерий выращивали на среде МРС или оптимизированной среде до стационарной стадии роста (24 ч) при температуре 35 С. Титр клеток перед посевом достигал значения 1109 КОЕ/мл. Затем культуры смешивали и проводили засев питательной среды в количестве 5 от объма. Питательную среду готовили из глюкозы 22 г/л,соевой муки 22 г/л, дрожжевого автолизата 50 г/л,магния сернокислого 0,12 г/л, натрия хлористого 5 г/л, ацетата натрия 6 г/л и воды до 1 литра. Культивирование осуществляли при температуре 35 С в течение 24 ч до титруемой кислотности 10 град, или 3,5 ед. активной кислотности. В готовую культуральную жидкость добавляли стерильную защитную среду для высушивания, после чего проводили замораживание при температуре 50 С в течение 5 часов, затем лиофильно высушивали в вакуум-сушильном аппарате до остаточной влажности 2,0. Препарат представлял собой сухую пористую массу желтовато-белого цвета. По примерам 1-3 выявлено, что при более высоких количествах введения соевой муки, магния сернокислого и ацетата натрия происходит интенсивное размножение клеток молочнокислых бактерий, титр достаточно высок (109), но антагонизм слабый (20-25 мм), а при более низких дозах происходит торможение роста бактерий, титр снижается (107) и антагонистическая активность невысока (18-20 мм). Пример 4. С целью изучения эффективности предлагаемого биологически активного препарата Биоконс были проведены производственные испытания на новорожднных телятах Алатауской и чрно-п 1 стро 1 пород МТФ Раимбек Алматинской области. Установлено, что одно- и двукратное введение препарата в рацион с профилактической целью способствовало повышению сохранности телят на 10 по сравнению с контролем. Увеличение живой массы у опытных телят наблюдалось к 10 дню жизни при введении препарата в дозе 50 мг/кг на 21, двух кратное введение в дозе 75 мг/кг в сутки на 30 и 100 мг/кг - 25. Использование изобретения - способа получения биологически активного препарата Биоконс позволит повысить антагонистическую активность препарата и его сохранность при хранении,повысить эффективность профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения биологически активного препарата, предусматривающий культивирование молочнокислых бактерий на питательной среде,содержащий глюкозу, дрожжевой автолизат, натрий хлористый, воду и источник азотистого питания,смешивание биомассы с сахаросодержащей средой,замораживание и лиофильное высушивание,отличающийся тем, что культивирование ведут в один этап, при этом в качестве молочнокислых бактерий используют консорциум культур-104,- 2 в соотношении 1111, в качестве азотистого источника применяют 20-25 г/л соевой муки, а также магний сернокислый в количестве 0,1-0,15 г/л и ацетат натрия в количестве 5-6 г/л.