Способ получения препарата азотфиксирующих бактерий “нитрагин” (паста)

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности - к способам получения препаратов азотфиксирующих бактерий.
Способ включает выращивание посевного материала в колбах на качалке, инокуляторах, глубинное культивирование в ферментерах, центрифугирование с получением концентрата клеток азотфиксирующих бактерий в виде пасты и смешивание препарата с наполнителем (каолином).
Способ позволяет сократить время ферментации (24-25 ч вместо 48 ч), а также предусматривает экономический эффект за счет сокращения технологического процесса во времени путем исключения этапов предварительного замораживания и сушки под вакуумом в условиях глубокого холода, что обосновывает внедрение технологии получения препарата азотфиксирующих бактерий "нитрагин" (паста).
Нитрагинизация семян перед посевом с использованием препарата, полученного предлагаемым способом, повышает урожай бобовых растений в среднем на 27-30 %.

Текст

Смотреть все

(51)7 05 11/08 КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Саданов Амангельды Курбанович Керимжанова Бахытжан Фазылжановна Жилкин Валерий Станиславович(73) Акционерное общество Институт промышленной биотехнологии(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА АЗОТФИКСИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ НИТРАГИН (ПАСТА)(57) Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности - к способам получения препаратов азотфиксирующих бактерий. Способ включает выращивание посевного материала в колбах на качалке, инокуляторах, глубинное культивирование в ферментерах, центрифугирова ние с получением концентрата клеток азотфиксирующих бактерий в виде пасты и смешивание препарата с наполнителем (каолином). Способ позволяет сократить время ферментации(24-25 ч вместо 48 ч), а также предусматривает экономический эффект за счет сокращения технологического процесса во времени путем исключения этапов предварительного замораживания и сушки под вакуумом в условиях глубокого холода, что обосновывает внедрение технологии получения препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин(паста). Нитрагинизация семян перед посевом с использованием препарата, полученного предлагаемым способом, повышает урожай бобовых растений в среднем на 27-30 . 17633 Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способам получения азотфиксирующих бактериальных удобрений. Известен способ изготовления нитрагина путем культивирования клубеньковых бактерий в реакторах на питательной среде, содержащей кукурузный экстракт (а. с. СССР 161180 кл. С 05 11/08,1964). Согласно известному способу бактерии культивируют на кукурузном экстракте, в который вводят дрожжевой экстракт, мел, агар-агар, аммоний сернокислый, гидрокарбонат натрия, затем выращенные бактерии отделяют от питательной среды сепарированием, замораживают с защитной средой и высушивают под вакуумом. Массовое культивирование азотфиксирующих бактерий осуществляют в реакторах в течение 48 ч при плюс 28-30 С в условиях непрерывной аэрации на питательной среде следующего составакукурузный экстракт - 0,5 дрожжевой экстракт - 0,3 агар-агар - 0,1 сахар - 1,0 (4)24 - 0,05 4 0,02- 0,02 К 2 НРО 4 - 0,05 мел - 0,1 3 0,03. Недостатками данного способа являются потребность в дорогостоящих компонентах ферментационной питательной среды и защитной среды высушивания, невысокая эффективность, которая заключается в больших затратах энергоресурсов, длительности процессов культивирования и последующей сушки под вакуумом, потери продукта при сепарировании и высушивании. Задачей изобретения является повышение эффективности способа получения препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин. Поставленная задача достигается использованием упрощенных питательных сред, позволяющих исключить из их состава дорогостоящие компоненты и сокращением времени культивирования, исключением стадии высушивания под вакуумом,снижением потерь целевого продукта. Способ получения препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) заключается в следующем 1. Выращивание посевного материала в колбах на качалке. 2. Выращивание посевного материала в инокуляторах (содержание бактерий 2,4-5,3 млрд/мл). 3. Культивирование в течение 25 ч в ферментерах с мешалкой. 4. Центрифугирование культуральной жидкости для получения пасты влажностью 80-85 . 5. Смешивание биомассы азотфиксирующих бактерий с наполнителем (каолином) и стандартизация препарата. При наработке посевного материала на колбах используют штаммы азотфиксирующих бактерий из вида , полученные из Института почвоведения г. Алматы (предпатент 7901 кл. С 12 1/20 от 16.08.99). Состав посевной среды (ПН)кукурузный экстракт 0,6 глюкоза 1,0 2(4)24 0,02 4 х 7 Н 2 О вода питьевая остальное рН среды 6,75. Операции по культивированию азотфиксирующих бактерий из видапроводят в ферментерах с мешалкой. Культивируют на среде следующего составакукурузный экстракт 0,6 глюкоза 1,0(4)24 0,02 472 вода питьевая остальное рН среды 6,85. Питательную среду готовят в ферментере и стерилизуют при температуре 121 С в течение 30 минут. Объем загрузки составляет 85 л. Режим культивирования температура(25-28)С обороты мешалки 450 об/мин расход технологического 50 л/мин воздуха давление в аппарате 0,02-0,04 МПа время культивирования 22-25 часов. Титр клеток должен быть не менее 4,5 млрд/ кл/мл (подсчетом в камере Горяева). Культуральную жидкость, полученную после ферментации, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 60 мин. После декантации фугата определяют общий вес клеточной массы. Выход биомассы азотфиксирующих бактерий с 85 л жидкой культуры составляет в среднем 0,5-0,6 кг (влажность - 80-85 ). Титр биомассы азотфиксирующих бактерий(подсчетом в камере Горяева) - не менее 250 млрд. кл/г. Готовят 50 глинистый раствор каолина (каолин - супернатант в соотношении 11). Добавляют биомассу азотфиксирующих бактерий после центрифугирования. Перемешивают на механической мешалке в течение трех часов. Титр клеток в готовом продукте - не менее 6,0 млрд. кл/г. Готовый препарат азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) фасуют в пластиковые бутыли. Готовый препарат хранят в герметично укупоренной таре при температуре 4 С. По внешнему виду препарат азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) напоминает сметанообразную однородную массу, имеет светло-серый или коричневый цвет, содержащий в 1 грамме не менее 6 млрд. бактериальных клеток в момент выпуска. Гектарная порция 200 г препарата должна содержать не менее 1200 млрд. клеток. Гарантийный срок хранения препарат азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) - 14 суток. 17633 Получение препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) предлагаемым способом обладает рядом преимуществ по сравнению с действующим в настоящее время производством нитрагина (базовым способом). Помимо упрощенной питательной среды, в предлагаемом способе сокращается время культивирования (24-25 ч вместо 48 ч), а также применение предлагаемого способа предусматривает экономический эффект за счет сокращения технологического процесса во времени путем исключения этапов предварительного замораживания и сушки под вакуумом в условиях глубокого холода, что обосновывает внедрение технологии получения препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста). Пример 1. Засев колб проводят с косяка агаризованной среды биомассой одной петли на колбу. Культивируют при 25 С в течение 24 ч на качалке при 220 об/мин. В процессе ферментации измеряют оптическую плотность культуральной жидкости и определяют титр клеток по камере Горяева. Посевной материал азотфиксирующих бактерий выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 50 мл посевной среды (ПН) при 28 С на качалке с 220 об/мин в течение 24 ч. Для проведения ферментации готовят стерильный посевной материал в 7-литровых инокуляторах фирмыв объеме 1200 мл азотфиксирующих бактерийшт.А-15 сои- А-15 сои проводят в ферментеревместимостью 130 л с мешалкой. Время биосинтеза 25 ч. Состав ферментационной средыкукурузный экстракт 0,60 глюкоза 1.00(4)24 0,02 472 вода питьевая остальное рН среды 6,85. Объем загрузки составляет 85 л. Титр клеток в культуральной жидкости 4,5 млрд. кл/мл. Культуральную жидкость передают на центрифугирование. Титр клеток в концентрате азотфиксирующих бактерий составляет - 599,4 млрд. кл/г. Масса концентрата - 0,535 кг (влажность 83 ). Готовят 50 глинистый раствор каолина (каолин - супернатант в соотношении 11).Состав готового продукта каолин 21,2 кг супернатант 28,25 л биомасса азотфиксирующих 0,5 кг бактерий итого готового продукта 49,95 кг. Перемешивают на механической мешалке в течение трех часов. Титр готового препарата азотфик сирующих бактерий нитрагин (паста) подсчетом в камере Горяева составляет 6,0 млрд. кл/г. Готовый препарат азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) фасуют в пластиковые бутыли. Готовый препарат хранят в герметично укупоренной таре при температуре 4 С. Пример 2. Засев колб производят с косяка агаризованной среды биомассой одной петли на колбу. Культивируют при 25 С в течение 24 ч на качалке при 220 об/мин. В процессе ферментации измеряют оптическую плотность культуральной жидкости и определяют титр клеток по камере Горяева. Посевной материал азотфиксирующих бактерий выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 50 мл посевной среды (ПН) при 28 С на качалке с 220 об/мин в течение 24 ч. Для проведения ферментации готовят стерильный посевной материал в 7-литровых инокуляторах фирмыв объеме 1200 мл азотфиксирующих бактерийшт. А-17 сои- 25 часов. Состав ферментационной средыкукурузный экстракт 0,60 глюкоза 1.00(4)24 0,02 472 вода питьевая остальное рН среды 6,85. Объем загрузки составляет 85 л. Титр клеток в культуральной жидкости 16 млрд. кл/мл. Культуральную жидкость передают на центрифугирование. Титр клеток в концентрате составляет - 1277 млрд. кл/г. Масса концентрата азотфиксирующих бактерий 0,47 кг (влажность 81). Готовят 50 глинистый раствор каолина (каолин - супернатант в соотношении 11). Состав готового продукта каолин 42,918 кг супернатант 56,612 л биомасса азотфиксирующих 0,47 кг бактерий итого готового продукта 100,0 кг. Перемешивают на механической мешалке в течение трех часов. Титр готового препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) подсчетом в камере Горяева составляет 6,0 млрд. кл/г. Готовый препарат азотфиксирующих бактерий нитрагин (паста) фасуют в пластиковые бутыли. Готовый препарат хранят в герметично укупоренной таре при температуре 4 С. 17633 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения препарата азотфиксирующих бактерий нитрагин, включающий культивирование продуцирующих его микроорганизмов видав условиях аэрации на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, минеральные соли в присутствии источников ростовых веществ, концентрирование бактерий из культу ральной жидкости, усреднения титра клеток путем смешивания концентрата клеток с наполнителем,отличающийся тем, что культивирование осуществляют на упрощенной питательной среде и центрифугируют, при этом время биосинтеза азотфиксирующих бактерий сокращают до 22-25 ч.

МПК / Метки

МПК: C05F 11/08

Метки: способ, бактерий, получения, азотфиксирующих, паста, препарата, нитрагин

Код ссылки

<a href="https://kz.patents.su/4-17633-sposob-polucheniya-preparata-azotfiksiruyushhih-bakterijj-nitragin-pasta.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Способ получения препарата азотфиксирующих бактерий &#8220;нитрагин&#8221; (паста)</a>

Похожие патенты