Штамм Streptomyces candidus – продуцент макролидного антибиотика

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) ШТАММ ЗТКЕРТОМУСЕЗ САЫВТВПБ ПРОДУЦЕНТ МИКРОЛИДНОГО АНТИБИОТИКА(57) Штамм Зтгертошусез сапс 11 с 1 из продуцент Макролидного антибиотика. Использование производство антибиотиков и касается получения нового Макролидного антибиотика, высоко активного в отношенииШтамм ИМВ 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомицином / Не 2062 коллекция ВНИИА и З - 919 коллекция ВНИИ генетика/. Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к К 1 еЬ 51 е 11 а рпеишогпае и других грамотрицательных бактерий и грибов Еизагшш и Азрегг 111 из. Штамм продуцирует новый макролидный антибиотик,отличающийся от всех ранее известных по молекулярной Массе с ш/е 998,1.Известен ряд макролиднь 1 х антибиотиков (метимицин, магнамицин,олеандомицин, лейкомицин, англомицин), отличающихся по молекулярной массе и активности в отношении К 1 еЬ 51 е 11 а рпеишогпае (1).Задача изобретения - получение штамма - продуцента нового макролидного антибиотика.Штамм Не 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомициномПолученный штамм депонированин во ВНИИА и во ВНИИ Генетика.На всех диагностических средах ВМ-беловать 1 й, СМ-бесЦветнь 1 й,РП нет. Цепочки спор прямые, волнистые (КР). Споры гладкие. Штамм растет при температуре 28 0 С, оптимальные значения рН 7,0-7,2.Хорошо ассимилирует 1-инозит, В-лактозу и В-мальтозу, хуже Ьрамнозу, В-рафинозу, В-маннит, глюкозу, Ь-дульцит, сахарозу, арабинозу и В-сорбит. Не используют В-ксилозу. В качестве источников азота интенсивно используют пептон, дрожжевой экстракт, соевую муку,гидролизат Хоттингера. Плохо усваивает минеральные источники.Клеточная стенка содержит Ь-ДАПК, которая оценивается хромографическим методом (Ьес 11 еуа 11 ег, 1968).Штамм Зтгертошусез сапс 1 ос 1 из 425 поддерживается на средах Гаузе 1 и Гаузе 2. Состав среды Гаузе 1 ( в ) крахмал растворимый - 2,0 К 2 НРО 4 - 0,05 М 3 О 4 - 0,05 К 11 О 3 - 0,1 ЫаС 1 - 0,05 РеО 4 - 0,01 агар 3,0 рН 7,2-7,4. Гаузе 2 (в ) бульон Хоттингера - 3,0 пептон - 0,5 глюкоза - 1,0 агар - 3,0 рН 7,0-7,2. Штамм Не 425 высевается на среды Гаузе 1 и Гаузе 2 на косяки, выраЩивается в термостате при 28 0 С в течение 5-7 суток и хранится в холодильнике при -2 3 0 С. Пересев музейных культур проводится один раз в 3 месяца.Посевной материал получали на 0,5 питательной кукурузной среде следующего состава (в) кукурузный экстракт - 0,5 (11 Н 4)2 О 4 - 0,35Пример 1. Для биосинтеза антибиотика использовали среду А 4,содержащую (в) соевая муку - 1,0 глюкоза -1,011 аС 1- 0,5 СаСОЗ - 0,26 рН 7,2-7,4. Посевной материал вносили в количестве 3. ВыраЩивали при 28 0 С в течение 96 часов в колбах на качалке (180 об/мин). Антибиотическая активность культуральной ЖИДКОСТИ составляет 2197 ед/мл. в отношении К 1 еЬ 51 е 11 а рпеишогпае.Пример 2. Для биосинтеза антибиотика использовали среду 5339,содержащую (в ) глицерин - 2,0 соевая муку - 0,5 (11 Н 4)О 4 - 0,15 ЫаС 1- 0,3 СаСОЗ - 0,3 рН 6,8. Посевной материал вносили в количестве 3 . Выращивали при 28 С в течение 96 часов в колбах на качалке ( 180 об/ мин). Антибиотическая активность культуральной жидкости составляла 81 ед/мл в отношении К 1 еЬ 51 е 11 а рпеишогпае.Штамм М 425 продуцирует антибиотик, выделяемый из мицеллия и нативного раствора продуцента. Антибиотик из мицеллия извлекали ацетоном при рН 7,0, упаривали в вакууме. Водный остаток реэкстрагировали н-бутанолом (1/15 от объема водного остатка). Бутанольный экстракт упаривали в вакууме при температуре 45 0 С. Из сконцентрированного экстракта антибиотик осаждали гексаном, осадок высушивали.Пример 3. Из фильтрата культуральной жидкости антибиотик извлекали экстракцией хлороформом 1/15 от объема фильтрата. Экстракт упаравали до минимального объема и осаждали гексаном. Получали аморфный порошок белого цвета, выход которого составлял 2,3 г с антибиотической активностью 1,5 мкг/мл в отношении К 1 еЬ 51 е 11 а рпеишошае.Очистку антибиотика осуЩествляли методом колоночной хроматографии на кизельгеле 60 марки Мегск. Выход очиЩенного антибиотика из 1 л культуры составляет 600 мг. Антимикробный спектр антибиотика приведен в таблице.Антибиотик 425 хорошо растворим в спиртах, хлороформе, ацетоне,мало растворим в воде. Анализ спектральных данных (ИК-, ЯМР-, масс спектроскопии) позволил отнести изучаемый антибиотик к группемакролидов. Он отличается от всех Известных макролидов по Молекулярной массе (ш/е 998).Антибиотик 425 высоко активен в отношении К 1 еЬ 51 е 11 а рпеишошае и других грамотрицательных бактерий в отличии от известных макролиднь 1 х антибиотиков. Антибиотическая активность составляет 1,5Штамм Зтгертошусез сапс 11 с 1 из ВКПМ 5-919 - продуцент макролидного