Способ получения антибиотика S-541, штаммы стрептомицетов – продуценты антибиотика S-541

3 более конкретно формулы 11Изобретение распространяется на соединения, имеющие указанные выше формулы, как индивидуальные, так н их сочетания. Для определенных областей использования, наприер в земледелии, в садоводстве или в ветеринарной медицине, более удобны может быть применение Антибиотнков 3, без разделения на индивидуальные компоненты, однако для других областей нспользования например в гуманитарной медицине, может быть предпочтнтедънн использование инднвИдУальныщ соединеннй.Первоначально выделение антибиотики 554, легко разделяются посредством хроматографы на силикагеле на два компонента, которые ОБЛЗДЗЮТ 88 пример, противогельминткой активностью и тушат упьтрафиолет 0 ВУЮ.ФПУ 0 Р 8 С ценцию при 25 д нм. Компонент 1 карактеризуется значением ЕЕ 0,7 - 0,75,а компонент 11 - 0,39 - 0,д 6, что было определено методом тонкослойной хроматографии на пластинах ФИРМЫ Мерк 5735 из силикагеля 60, элюнруемъш смесью 31 ХЛОРОФОРНЗ И Этиддде тата. Компоненты 1 и 11, где Ед является соответственно группой -СН 3 н Н, антиботиов 554, могут быть дополнитепно очищены с образованием шести веществ ФОРМУЛЫ 1, обладаюпн активностью антибиотика, наприер протнвогельминтной, имеющих общую формулу 111Где Е, нетндьная зтильная или изопропилънан группа На водарад или МЕТНПЪНЗЯ ГРУП па.Эти шесть веществ ФОРМУЛЫ 111 обозначим как фактор А (Е, изопроПНЛ На - водород), фактор В (Ед метил, Н 1 - метил), фактор С (К МЕТКИ, На - водород), фактор В ( ЭТИ-П, д- водород), фактор (К этил, На-метил) и фактор Р (К, Нзопропнл, К 2 - метил). Факторы А н С являются особенно предпочтительными.Факторы В, Е и Р получают из компонента 1, а факторы А, С н В - из компонента 11. еВещества по изобретению обладают активностью антибиотиков, например протнвогельминтной, в частности, против нематод, и в особенности активностью против внутренних и внешних паразитовгВ частности.обнаружено, что такие вецестваявпяются активнымнпротнв па разнтирущщикненатод,напрнмер наетопслив сопсогсцв, 0 вегса 31 а с 1 гситс 1 пека, Тг 1 сЬовсгоп 3 у 1 ив со 1 цЬ 1 Еогш 15. В 1 суосаи 1 цв ч 1 у 1 ра 1 в, Соорегйа опсороета, Оасегсавйа овегса 31, Н 1 р ровсгоп 3 у 1 иа 1 ога 2111 епв 1 а, н паравирующиж нлещнков, таких как Засор сев ар., Рвоторгев ар. Следовательно,эти вещества могут быть использованы при лечении кнотнык и людей, пораженным внутренними и/или внешним паразитами. Крометого, было обнаружено, что такие вещества обладают протнвофунгицидной активностью, например противштаммов Сапбйба вр., такии как СапсЦ оа а 1 Ь 1 сапа, Сапойоа 31 аЬаса, и проти дрожжей, такишкак Засснагошусев саг 1 аЬег 5 епв 1 в. ГЭти вещества также активны против свободно живущих нематод СаепотЬаЬ 1 Ев е 1 е 3 апв.Кроме того, бнлонайдено, что вещества, полученные по предлагаемому способу являются эффективными при борьбе с насекомым, клещевидными и нематодными вредителями в продуктах земледелия, садоводства, лесоводства,в хранящнся продуктах и для общего здравоохранения. Вредители почвы и растительным плодов, включая злакисовые), а также корнеплоды (например,сахарная свекла, картофель) могут быть эффективно уничтожены.В частности, обнаружено, что пред лагаемые вещества являются активиьми,например, против йруктовых клешиков и тлей, таких как Арпйв Еаьае, Аи 1 асоггьот ситопЕ 1 ехцт, Пуацв регайсае,е а 11, и представителей рода Тг 1 аЪеигойоев, нематод, таких как пред-ставителя рода АрЬе 1 епсо 1 ое 5, С 1 оЬо бега Негегооега е а 1., чешуекрылых, таких как Не 11 оЬз Р 1 ое 11 а, Броаорсета, калаилрин, таких как Аппропопив дгапо 1 з, 51 орЬ 11 иа атапагйцв,мучных хруцаков, таких как Тг 1 Ьо 11 ит савсапепш, мух, таких как Мизса оотев 1 са, муравьев Рнхтера, узкокрылык молейминеровр Реаг рву 11 а, Тпгйрв саЬас 1, тараканов, таких как В 1 аЕе 11 а аегпапйса, Рет 1 р 1 апеса атег 1 сапа,н комаров, таких как Аеоез ае 5 урс 1.Вообще эти вещества могут применяться как в отношении хозяина (животного или человека, или растения,или другой растительности), так и в отношении самих вредителей или их очага. Особенно предпочтительнъми являются факторы А, В, С, П, Е и Р, которые указаны выше. Вещества, полу- ценные по предлагаемому способу, могут быть использованы в вице различных лекарственных форм для введения любым удобным способом в ветеринарии или медицине .Композиции, в состав которых входят предлагаемые вещества, могут быть использованы для парзнтерального(включая внутригрулиое, орального,ректального, местного или имплантиого введения. При составлении композиции,которая должна быть стериальнои, например инъекция, глазнью капли и ма зи, актнвньй компонент сам может быть приготовлен антисептическим или сте рильннм, например, после обработки гаммаизлучением или окнсью этилена.по предлагаемому способу, могут быть включены в рецептуры сухого или жидкого типов, например дУСТЫ ВКЛЮ чаюце основы дуста, ил концентраты,порошки, включающие растворимые дн увлажненные порошки, ГргНУЛЯТЫ ВКЛЮчаюцне нкрогранулы или гранулы, способные диспергироватьсл таблетки,текучие жидкости, эмульсии, такие как разбавленные эмульсии или концентра 6ты, способные змульгироваться, кипкости для погружения, такие как поГРУЖНЫЕ БЕДНОСТИ ДЛЯ корней ИЛИ ДЛЯ семян, оболочки семян, семенные таблетки, масляные концентраты, масляные растворы, инъекции, например инъекции в стебель, аэрозоли, доп-ан и пгмганьд Обычно такие рецептуры включают соединение в сочетании с подходящим носителем или разбавителем. Такие посители иогут быть кндкни или твердыми и предназначаются для облегчении применения вещества или посредством диспергирования там, где оно должно быть нанесено, или для обеспечения рецептуры, которая может быть составлена потребителем в виде препарата,способного к диспергировани. Такие рецептуры хорошо известны и могут быть получены траднционньми методами,такими как, например, смешивание И/или размалывание активного компонента(тов) вместе с носителем или разбавителем, например твердьш носителем,.растворителем или поверхност НОЗКТНВНЬН ВЕЩЕСТВОМ. Твердые НОСИТЕЛИ, ПОДХОДНЩНЕ ДЛЯ-дусты, гранулиты и порошки, могут быть выбраны, например, из природных минеральных наполнителей, такиж как циатомит, тальк, каолин, монтмориллонит, пиротиллит или аттапульгит. Сильно диспергированнал кремневая кислота или-сильно диспергировапиые поглощающие полимеры могут быть включены в компознци. Используемые гранулированные адсорбирующие носители могут быть пористьми Стакии как пемза, размолотый кирпич, сепиолит или бентонит) или непористын (такими как кальцит или песок). Могут быть использованы подходяще предварительно гранулированные материалы, которые могут быть органическими или неорганическими и вкючают доломит и размолотые растительные остатки.используемые в качестве носителей или разбавителей растворители представляют собой ароматические углеводороды, алифатические углеводороды,спирты и гликолнли их простые эфиры, сложные эфиры, кетоны, амиды кислот, сильно полярные растворители,необязательно зпоксидированные растительные масла н воду.Также могут быть использованы традиционные иеионогеииые, катиоиоген ные или анионные поверхностно-актив 1595ные вещества, наприер зтоксилнронанные алкнлфенолы и спирты, соли щелочпых или щелочнозенельных металлов алннлбензолсульфокислот, лнгносульфоч кислоты пли сульфонаты полимерных фенолов, которые обладают хорошими эпульгируюцими, диспергирующими идилн увлажняющими свойствами, или индивидуально или в сочетании в композицияк.Кроме того, в композициях могут быть использованы стабилизаторы, противослежнвающиеся добавки, регуляторы вязкости, связующие н липкие добавки,фотостабилизаторы, а также удобрения,стимуляторы питания или другие активные вещества, вещества полученные по предлагаемому способу, могут быть использованы в смеси с другими инсектицидами, акарнцндамп и ненатоцидами.В этих рецептурах концентрация активного материала обычно составляет 0,01 -ЭВ и более, предпочтительно 0,01 40 вес.2.Промышленные продукты обычно поставляются в виде концентрированных композиций, которыедлн использования могут быть разбавлены до соответствуюцей концентрации активного материала, например от 0,001 - до 0,0001 вес.2.В земледелии, садоводстве и в ветерииарии может быть желательным использование цельного ферментационного бульона (без разделения его на компоненты или факторы) в качестве источника актнныи веществ. Может Д быть удобны использована высушенного бульона, содериацего мицелий,.илн лнзнрованного мнцля, живого нлн неживого мицелия, выделенного на бульона с использованием методик разделении жидкость - твердое тело или методик вышаришанин, ипис использованием ферментационного бульона, остающегося после выделения ицелия. По жепаишо мцелий может быть пастеризован пли, ибо более предпочтительно,высушен, например, методами распылтельной суши или суши на ролиах. Ьшщелм или бульон могут входить всостав композиций, включающих традиционные инертные носители, среды дляНа основе таксономических.нсследопани, конкретным ннрооргаиизмон,способным продУНровать указанные вып ше вепества, является новый вид рода-Зсгерготусеа ЬегтоагсЬаеп 515. Обра зец этого микроорганизма, выделенного из почвы, депонирован в постоянную коллекцию культур Национальны Коллскц промышленным и морских бактерий (Исследовательская станция Торри,г. Абердин, Великобритания) н ему присвоен номер НС 1 В 12015.Изобретение также распространяется на любые вещества, которые способНЫ продуцнроватьсн посредством ФБР иентаци 5. Епетшоагспаепвйв НС 1 В 12015 и которые являются оптическими изомерами веществ формулы 1.Организм рода Зсгерсощусеа предпочтительно представляет собой 3 сгерсотусеа сьегшоагспаепзйв НС 1 В 12015 или его мутант.Мутанты 5. ЬегшоагсЬаеп 515 ЫС 1 Б 12015 могут возникать самопроизвольно или продуцнроваться множеством способов. Такие способы включают ионизирующее излученпе.хиническне методы, наприер обработку Ы-метилН -нитро-Н-нитрозогуанидннон (НТГ),термообработку, генетические методики, такие как рекомбинации, трансдукт инв, трансформаця, лзогенизация н лаогенное превращение, и селективные методик для самопроизвольным мутантов.Так, например, получены четыре мутантнык штамма 5. епегтоагсьаепайа НС 1 В 12015, причем кажды штам депонирован в коллекции культур нацио нальнык Коллекции проышленнын н мор ских бактерии (Исследовательская станция Торри, г. Абердмн, Великобритания) и им присвоены номера 8013 12111, НС 1 В 12112, НС 1 В 12113 и НС 1 В 12114 5. ьпегшоатсьаепайз НС 1 В 211 Д 12112, 12113 и 12114. мутантные штаммы НС 1 В 12111,12112 и 12113 выведены путем обработ ки спор 8. спегпоагслаепайа НС 1 Д 12015 Ниетил-И-нитроН-ннтрозогуанидиком и затем бкарактернзованы одностадимымспособом Холлидзя.Нутантный штамм НС 1 В 12116 возникпри самопроизвольной мутации 5. снегшоагсьаепайв 8013 12015 и был идентиФицнрован как стойкий к стрептомици-ну, так как оставался жнзнеспособньмпосле воздействия сульфата стрептомициа (100 нгк/ил) при 28 С в течение 5 сутТЗКСОНОННЧЕСКПЕ ПССЛЕЛОВЗННЯ ПОКЗ зывают, что 5.сЬегпоагсЬаеп 51 э ЫС 1 В 12015 представляет собой микроорга Низн нового вида, характеристики которого описаны иие.На предпочтительным споруляцноннык средах - агаре овсяной муки, солодоводрожжевом агаре и крахмалъиом агаре с неорганическими солями .ЬЬег шоагсЬаепз 15 НС 1 Б 12015 обильно растет, продуцируя стабильньш субстратэшт мицелий и воздушиът мицелий, по рождающий споры в открытых спиральным цепочках п виде боковых ответвлений от основных гиф. На этих средах обратная пигментации жептокоричневая,а спорофоры серые. При стократном увеличении видно, что спорофоры содержат 2-5 витков в цепочке с 5-10 спорами внутри каждого витка спирали. В среднем спорофоры содержат 20-50 спор. При увеличении в 12 000 в скаиирующем электронном микроскопе вид но, что споры иеют гладкие стенки и эллнпсондную форму 0,71,6 мкм в наиболее широкой части эллипсоида.5.сЬегшоагсЬасп 51 в ПС 1 Б 12015 ивллется граыположительным организмом и способен расти и образовывать споры при 20-5000.Сравнение приведенных вше данных с опубликованными описаниями в Бергеевском справочнике определительнойНлеитификацию 5.ЬегтоагсЬаспв 15 ЫС 1 В 12015 на уровне вида-группы проводят, используя компьютеризированную матрицу идентификации.Ниже приведены результаты 41 таксономического испытания для 5.Ьегтоагслаепвйа НС 1 В 12015Признак Результат Цепочка спор мутовчатая Цепочка спор жестко связанная Цепочка спор прлмоизвитая Цепочка спор спиральная Фрагментации мицелия ПОВЕРХНОСТЬ СПОР гладкая Поверхность спор морщинистая .Цвет спор серый Цвет спор красный Цвет спор зеленый Обратный иептокоричневы Обратный красноораижевй Производство меланинаТОЛЗ Использование инулина использование маннитола Использование раффинозы Использование рамиозы Использование Пксилозы Использование ПЪ-альфааниномасляной кислоты ч Использование Ь-гистидииа Использование Ьгипроксипролииа Расщепление Расщепление Расщепление ксантина Расщепление пектина Расщепление лецитина Восстановление нитрата Производство сероводорода Устойчивость к азиду натрия (0,012.вес/об) Устойчивость к хлориду натрия (72 вес/об) Устойчивость к фенолуМутантные штаммы НС 1 В 12111,12112, 12113 В 12114 все имеют практнческианалогичные 8.сЬетоагсЬаеп 515 существенные признаки. Однако НС 1 В 12111 для роста требуется аде нин НС 1 В 12112 - серии, нсчв 12113 ч гистидин, а НС 1 В 12114 стоек к стрептомицину.Микроорганизмы, способные продуцировать антибнотики 854 легко могут быть обнаружены с помопью удобного нелконасштабного теста с применением нематод СаепотЬаЬ 11 в е 1 е 3 апв, например путем добавления испытуемого образца к суспензии нематод и опредеч пения последующего воздействия на хмзиеспособиость последних.Получение антибиотиков 54, путем ферментации подходящего организма