Консорциум Lactobacillus casei subsp. casei 104, Lactobacillus pontis 2, Pediococcus acidilactici P1-6 для получения закваски при силосовании кормов

(51) 12 1/20 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(КазНИИППП В-464), в соотношении 111 используемый для приготовления закваски при силосовании кормов и препарата пробиотического действия. Изобретение позволяет получить силос с хорошей усвояемостью, увеличить содержание питательных свойств силоса.(72) Дудикова Галина Николаевна Чижаева Анна Викторовна Титова Ираида Владимировна Амангелд Алма Аманос ызы Сарманкулов Торехан Мукажанович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт перерабатывающей и пищевой промышленности.104,2,1-6 ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАКВАСКИ ПРИ СИЛОСОВАНИИ КОРМОВ Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к производству заквасок для силосования кормов с применением консорциума молочнокислых бактерий пробиотиков, используемых в качестве консерванта. В реальных условиях естественная подавляющая доминанта молочнокислого брожения далеко не всегда имеет место. Это связано со смыванием эпифитной молочнокислой микрофлоры дождями в период уборки и силосования зелных растений и наоборот - излишком соляризации растений в сухую солнечную погоду, загрязнением силосуемых растений почвой. В комплексе это приводит к снижению уровня относительной доминанты молочнокислых бактерий в составе микрофлоры силосуемой массы. В связи с этим широкое распространение при силосовании получили различные силосные закваски, принципиальное назначение которых состоит в том, чтобы обеспечить подавляющую доминанту молочнокислого брожения Микробиология консервирования трудносилосующихся растений / Н.К. Чуканов, А.К. Попенко. Алма-Ата, 1986. с.198 Препараты Кофасил-Лак, Биотроф, Силзак на основе осмотолерантных штаммов молочнокислых бактерий применяют в дозе 105 КОЕ на 1 г силосуемой массы. Техника обработки массы указанными препаратами проста, экологически чиста и безопасна для работающих с ними людей. Перед внесением жидкие препараты Биотроф и Силзак разводят водой в соотношении 150 и вносят из расчета 4 л рабочего раствора на 1 т силосуемой массы Заготовка и использование силоса из провяленных трав с препаратом Биотроф(Рекомендации)/А.С. Шпаков, А.И. Фицев, Ю.А. Победнов и др. М., 2005. с.16 В качестве биологических препаратов при силосовании многолетних трав использовали одиночные штаммы гомоферментативных молочнокислых бактерий(.),(. ) и(. ), при силосовании смесей однолетних трав Биосил НН, состоящий из равного количества штаммов бактерий .и .отдельно . . Недостатком данного изобретения можно отнести использование только одного штамма и малый титр 105. Кучин Н.Н.,3 авиваев С.Н. и др. Качество брожения консервируемых кормов при использовании биопрепаратов на основе молочнокислых бактерий/Вестник НГИЭИ, 12 (9), 2012 г. с.27 Известен способ силосования кормов с внесением бактериальных заквасок и препаратов на основе молочнокислых бактерий (сочетание бактериальной массы в виде 1106 клеток в 1 г препарата и 80107 клеток в 1 г препарата, в дозе 150 г/т.),применяемых в качестве консервантов при заготовке силоса Патент 2477966, кл. опубликовано 27.07.2013. Известен способ силосования кормов с внесением закваски молочнокислых и пропионово 2 кислых бактерий, которые способны снижать закисление конечного продукта в дождливую погоду, когда технология подвяливания исходного растительного сырья трудно осуществима (Патент 2265655). В засушливые годы применение заквасок на основе только молочнокислых бактерий предпочтительнее,т.к. трава на корню подвяливается и содержание сухого вещества в ней возрастает до 30 и более, что благоприятно сказывается даже на трудносилосующихся кормовых растениях (люцерна и др. бобовые). Таким образом, качество силоса зависит от погодных условий в период сенокоса и ставится задача разработки универсальной закваски,обеспечивающей эффективность их применения в независимости от погодных условий и вида растительного сырья. Известна закваска Биотроф для силосования кормов на основедля силосования трав и кукурузы. Используемый штамм обладают высокой антагонистической активностью против гнилостных микроорганизмов и маслянокислых бактерий, отличается свойством осмотолерантности, что позволяет применять препарат не только для силоса, но и для корма из подвяленных трав Патент 2168909, 2001 г. Штамм бактерийдля силосования кормов, патентообладатель ООО Биотроф. Однако, применение данной закваски ограничено возможностями одного штамма. Задачей изобретения является создание благоприятных условий для протекания процесса брожения, и за счет этого, обеспечение качества кормов. Изобретение позволяет получить консорциум с устойчивым соотношением культур,высокими титром клеток, титруемой кислотностью,антагонистической активностью в получаемой закваске. Сущность изобретения заключается в создании консорциума культур молочнокислых бактерий,состоящего из.104,2,-6. Штаммы, входящие в состав консорциума,обладают высокой кислотообразующей активностью, биохимической и антагонистической активностью. Консорциум содержит безопасные микроорганизмы, при совместном культивировании имеющие высокий суммарный титр,обеспечивающие его устойчивость при длительном хранении и многократном пассировании. При использовании заявленного консорциума в качестве закваски для силоса, полученный продукт содержит живые пробиотические микроорганизмы в высоком титре продолжительное время, а также имеет продолжительный срок хранения. Технический результат изобретения - получение закваски, применяемой в производстве силоса высокого качества и новыми свойствами. Консорциум получен при выращивании трех штаммов разных видов микроорганизмов.104 (КазНИИППП-517),1-6 (КазНИИППП В-464),имеющих сходные физиологобиохимические свойства. Микроорганизмы, входящие в консорциум, были выделены из пшеничной муки и ржаных заквасок и депонированы в коллекцию микроорганизмов Казахского НИИ перерабатывающей и пищевой промышленности (КазНИИППП) под В-539. Имеется заключение ТОО Нутритест (учредитель АО Казахская академия питания) о безопасности и безвредности этих культур. Культурально-морфологические и физиологобиохимические признаки микроорганизмов,входящих в состав консорциума Штамм 104, выделен из пшеничной муки. Палочки размерами 1,060,502,750,66 мкм, одиночные, короткими цепочками,неподвижные, спор не образует. На поверхности МРС-агара культура образует гладкие беловатые колонии -формы средней величины. При глубинном выращивании образует чечевицеобразные колонии. Продукт,синтезируемый штаммом молочная кислота. Среда для культивирования - МРС, молочный гидролизат агаризованный. Дополнительная информация, аэротолерантный анаэроб, штамм обладает высокой кислотообразующей способностью и антагонистической активностью по отношению к спорообразующей микрофлоре муки. Титруемая кислотность 36,03,0 град на среде МРС,антагонистическая активность, диаметр зоны подавления В. - 17 мм. Штамм 2 выделен из пшеничной муки. Толстые палочки средних размеров 3-80,7-1,0 мкм. При неблагоприятных условиях клетки приобретают более вытянутую форму. Палочки расположены одиночно или короткими цепочками. Колонии средней величины,куполообразные, беловатые, зерен волютина, как правило, не образуют. Растут на средах с содержанием 0,4 типуля. Продукт, синтезируемый штаммом -молочная кислота, антибиотик пептидной природы. Титруемая кислотность 24,4 град на среде 10, антагонистическая активность, диаметр зоны подавления роста В.- 15,0 мм. Среда для культивирования МРС, молочный гидролизат агаризованный,обезжиренное молоко. Устойчив к антибиотикам и фагам. Штамм-6 выделен из ржаных заквасок. Имеют вид коротких овальных клеток с закругленными концами, сцепленных по две или по четыре клетки - тетрады. При глубинном посеве в твердой питательной среде (МРС) колонии имели чечевицеобразную форму, а на поверхности колонии мелкие, плоские, гладкие. Продукт,синтезируемый штаммом молочная кислота. Титруемая кислотность 33,83,2 Н,- 4,22 зона подавления роста В.составляет 212,2 мм. Устойчив к канамицину,ванкомицину,пефлоксацину. Педиококки не так привередливы в пищевых потребностях, как лактобациллы, растут в ферментерах до большей плотности, лучше выдерживают лиофилизацию и более стабильны при обычных условиях хранения. Выбор кокков для включения их в консорциум диктовался их способностью быстро размножаться в ограниченно аэробных и анаэробных условиях и достигатьниже 5,0 быстро, так чтобы клостридии и другие портящие силос микроорганизмы не смогли размножаться. В процессе длительной селекционной работы нами был получен консорциум микроорганизмов,обладающий следующими микробиологическими и биохимическими показателями 1. При росте на среде МРС имеет высокий суммарный титр (не менее 1013 КОЕ/г). 2. При пересевах на питательной среде МРС консорциум способен сохранять свои свойства не менее 10 пассажей. 3. Консорциум обладает более высоким антагонистическим свойством по сравнению с антагонизмом каждого штамма - зоны угнетения роста В.20 мм (таблица 1). Таблица 1 Характеристика физиолого-биохимических показателей молочнокислых бактерий Варианты Культуры консорциума сохраняются в лиофилизированном виде в ампулах при минус 302 С и под вазелиновым маслом в пробирках. Пример использования консорциума для приготовления закваски и препарата пробиотического действия Получение закваски консорциума осуществляется в два этапа 1. Приготовление жидкой биомассы консорциума. Чистые культуры . 104, . 2,-6 в соотношении 111 вносим в питательную среду МРС. Термостатируем при температуре 312 С в течение 24 часов до титруемой кислотности 20 град Неймана. 3 Полученный консорциум используется для приготовления пробиотического препарата. 2. Приготовление пробиотического препарата Пробиотический препарат получают путем смешивания 25 мл жидкой биомассы закваски консорциума с 500 мл мучной питательной среды,которая ставится в термостат для заквашивания при температуре 312 С на 24 часа. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум микроорганизмов.104,2.-6, депонирован в КазНИИППП под номером В-539,используемый для для приготовления закваски при силосовании кормов и препарата пробиотического действия.