Экспресс способ определения безопасности генетически модифицированных продуктов биотестированием

(51) 12 1/02 (2006.01) 12 1/00 (2006.01) 01 33/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технической задачей реализации настоящего изобретения, является определение безопасности ГМ-продуктов путем использования биологических тест объектов инфузорийс добавлением в качестве корма исследуемую пробу ГМ-продукта с последующей визуальной оценкой отдаленных последствий на 5-10-ти поколениях инфузорий и более в течении сравнительно короткого времени, составляющего от 15 дней до 6 месяцев. Указанный результат достигается путем предварительной подготовки инфузорий и оценки безопасности исследуемого ГМ-продукта по хемотаксису,времени и проценту гибели инфузорий, количеству гест объектов, их размерам,форме и морфологическим изменениям. Применение разработанного экспресс способа определения безопасности ГМ-продуктов биотестированием, даст возможность специалистам лабораторий пищевой безопасности проводить ускоренные исследования ГМ-продуктов с предварительной оценкой их отдаленных воздействий без применения какого-либо аналитического оборудования.(72) Балджи Юрий Александрович Сатиева Радгуль Ратбековна Балджи Владислав Юрьевич(73) Акционерное общество Казахский агротехнический университет им. Сакена Сейфуллина(54) ЭКСПРЕСС СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ БИОТЕСТИРОВАНИЕМ(57) Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения безопасности генетически модифицированной продукции способом биотестирования, и может быть использовано при проведении оценки безопасности генетически модифицированных продуктов (как растительного,так и животного происхождения) в лабораториях пищевой безопасности и ветеринарно-санитарной экспертизы. Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарно-санитарной экспертизе для экспресс определения безопасности генетически модифицированной продукции способом биотестирования, и может быть использовано при проведении оценки безопасности генетически модифицированных продуктов (как растительного,так и животного происхождения) в лабораториях пищевой безопасности и ветеринарно-санитарной экспертизы. Известно, что экспертизу пищевой продукции из ГМИ (осуществляют по следующим направлениям 1) медико-генетическая оценка(изучение заявленного внедренного гена на молекулярном и клеточном уровне и его влияния на растение и другие объекты) 2) технологическая оценка(изучение органолептических, потребительских и других свойств) и 3) медико-биологическая оценка,по результатам которой проходят клинические испытания, выдается заключение о качестве и безопасности продукции из ГМИ Л.П. Шаулина,Л.Н. Корсун. Контроль качества и безопасности пищевых продуктов и продовольственного сырья. Учебное пособие. Иркутск, 2011. с.92. Известна поэтапная оценка безопасности и качества генетически модифицированных источников О.Ю. Петров. Медико-биологические и нравственные аспекты полноценного питания. Учебное пособие. Йошкар-Ола, 2008. с.99-100. В основе этого подхода лежит принцип композиционной или реальной эквивалентности,который заключается в сравнении генетически модифицированных источников с традиционным аналогом. Для этого необходимы изучение химического состава изучаемого продукта и сравнение его с традиционным аналогом содержание основных нутриентов,антиалиментарных и токсических веществ и аллергенов, характерных для данного вида продовольствия или определяемых свойствами переносимых генов. Если в результате оценки композиционной эквивалентности не обнаруживается отличий генно-модифицированной пищевой продукции от традиционных аналогов, то ее причисляют к первому классу безопасности и предлагают считать полностью безвредной для здоровья потребителей. При обнаружении отличий от традиционного аналога(второй класс безопасности) или полного несоответствия традиционным аналогам(третий класс безопасности) оценка безопасности генномодифицированной пищевой продукции должна быть продолжена. Этапы исследования пищевой безопасности предусматривают изучение пищевых и токсикологических характеристик продукции. Оценка пищевых свойств включает изучение- пищевой ценности нового продукта- поступления отдельных нутриентов (если ожидаемое поступление нутриента превышает 15 от его суточной потребности) 2- влияния на микрофлору кишечника (если генно-модифицированный источник содержит живые организмы). Токсикологическая характеристика обусловливает определение следующих показателей- потенциальная колонизация в желудочнокишечном тракте (в случае содержания в генномодифицированном источнике живых микроорганизмов)- результаты субхронического (90 суток) токсикологического эксперимента на лабораторных животных и исследований на добровольцах. Однако такая система оценки качества и безопасности генно-модифицированных источников пищи, основой которой является принцип композиционной эквивалентности, может быть рекомендована для продукции, не содержащей белков и ДНК. Общим недостатком выше приведенных методов является невозможность определения отдаленных последствий(в частности влияние на репродуктивные свойства, мутагенность и др.) воздействия генетически модифицированных продуктов на живые организмы. На лабораторных животных (мыши, крысы, морские свинки) проверяется воздействие на репродуктивные свойства через несколько поколений, что занимает длительное время(1-3 года),на сельскохозяйственных животных такие исследования не проводятся вследствие длительности эксперимента (десятки лет), либо проводятся, но результаты в настоящее время еще не получены. Известна тест-система для определения качественного и количественного содержания генетически модифицированных организмов (ГМО) в пищевых продуктах методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) Патент 72083. Ример В.Д., Семенович В.К. и соавт. 12 15/00. Данная тест-система определяет только качественное и количественное содержание генетически модифицированных организмов, но не нацелена на определение безопасности ГМпродуктов. Известен способ комплексной оценки токсичности кормовых и пищевых продуктов Гроздов А.О. Патент 2266015, заявка 2001123068/13 от 16.08.2001. Известен способ определения токсичности кормов для сельскохозяйственных животных с тестированием водных растворов исследуемых проб с помощью культуры инфузорийАгеев В., Долторниязов И. Определение токсичности корма. Птицеводство, 8, 1988, с.2 В данных способах применяются биологические тест объекты - инфузориии анализ общей токсичности исследуемой пробы проводят по учету их поведенческой реакции(положительный и отрицательный хемотаксис),процента выживаемости и времени гибели. Наиболее близкого способа к заявленному, нам найти не удалось, но общим явилось использование для анализа биологических тест объектов инфузорий, учет их поведенческой реакции(положительный и отрицательный хемотаксис),процента выживаемости и времени гибели. Технической задачей реализации настоящего изобретения, является определение безопасности ГМ-продуктов путем использования биологических тест объектов инфузорийс добавлением в качестве корма исследуемую пробу ГМ-продукта с последующей визуальной оценкой отдаленных последствий на 5-10-ти поколениях инфузорий и более в течении сравнительно короткого времени, составляющего от 15 дней до 6 месяцев. Предварительная подготовка инфузорий осуществляется путем их культивирования в отстоявшейся воде при комнатной температуре (1823 С) без попадания прямых солнечных лучей с добавлением в качестве питательной среды сухих кулинарных дрожжей (не генномодифицированных) или сенного экстракта. В результате на 3-4 день концентрация парамеций должна быть приблизительно 10000 ед/мл. После чего с исходного материала берутся инфузории в объеме 10 мкл, где содержится около 100 инфузорий, и переносятся в колбы с подготовленной водой в объеме 100 мл, куда в качестве питательной среды вносят исследуемый ГМ-продукт (0,3-0,6 г). Далее,на начальном этапе эксперимента, в течении 1-15 дней ведется ежедневный учет и визуальная оценка результатов, затем 2 раза в неделю,осуществляя подкормку исследуемым ГМпродуктом. Культуру инфузорийможно использовать длительное время, поскольку у данных простейших периодически меняется путь размножения (половой и делением). Результаты исследований оценивают по следующим показателям 1. Количество тест объектов. 2. Подвижность (хемотаксис) тест объектов. 3. Размеры тест объектов. 4. Форма тест объектов. 5. Морфология тест объектов. 6. Процент гибели тест объектов. 7. Размножение (воспроизводительная функция) тест объектов. Преимуществом способа является то,что становится возможным определение безопасности ГМ-продуктов на десятках и более поколениях биологических тест объектов,являющихся моделями макро организма, за сравнительно короткий промежуток времени, при этом не требуется больших финансовых затрат. Применение разработанного экспресс способа определения безопасности ГМ-продуктов биотестированием, даст возможность специалистам лабораторий пищевой безопасности проводить ускоренные исследования ГМ-продуктов с предварительной оценкой их отдаленных воздействий без применения какого-либо аналитического оборудования. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Экспресс способ определения безопасности генетически модифицированных продуктов биотестированием, включающий использование в качестве биологических тест объектов - инфузорий, изучение хемотаксиса,определение процента выживаемости и времени гибели биотестов, отличающийся тем, что предварительно выращенных тест объектов берут в объеме 10 мкл с содержанием 100 инфузорий, и переносят в колбу с подготовленной водой в объеме 100 мл, куда в качестве питательной среды для биотестов вносят исследуемый ГМ-продукт массой 0,3-0,6 г, далее на начальном этапе эксперимента, в течении 1-15 дней ведут ежедневный учет и визуальную оценку результатов, затем учет проводят 2 раза в неделю в течение от 115 до 6 месяцев, осуществляя подкормку исследуемым ГМпродуктом, при этом результаты исследований оценивают по следующим дополнительным показателям количество тест объектов, размеры,форму и морфологические изменения инфузорий в результате чего оценку проводят на 5-10-ти поколениях инфузорий и более.