Штамм гриба microsporum equinum f-0182, используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей

(51) 12 1/14 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ профилактики микроспории лошадей, кошек, собак и пушных зверей,обусловленной грибом. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной массы гриба родас биологической активностью не менее 145106 макроконидии путем ступенчатого отбора, по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением макроконидий. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15, депонированный в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей.(72) Умитжанов Мынбай Боранбаева Райхан Султанмуратовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ ГРИБА-0182, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ МИКРОСПОРИИ ЛОШАДЕЙ(57) Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики микроспории лошадей, кошек, собак и пушных зверей,обусловленной грибом. Известен штамм гриба рода ,используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории собак Патент Российской Федерации 2084240, А 61 39/00,С 12 1/14, 1997. Недостатком указанного гриба является то, что он обладает слабой иммуногенностью и изготовленная из него вакцина недостаточно эффективна. Задачей изобретения является получение штамма гриба с высокой антигенной активностью, а также пригодной для изготовления эффективной иммуногенной инактивированной вакцины против микроспории лошадей. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной массы гриба родас биологической активностью не менее 145106 макроконидий путем ступенчатого отбора, по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением макроконидий. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15, используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей. Указанный штамм гриба 0182 КазНИВИ 15 депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ. Идентификацию штамма гриба проводят по основным морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, согласно определителю патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов-182 КазНИВИ 15 выделен из поверхности кожного покрова больной лошади, принадлежащего крестьянскому хозяйству Сапа ЮжноКазахстанской области Казыгуртского района с. Шарбулак, путем направленного ступенчатого отбора. После очищения полученного патматериала(суслоагар) и ставили в термостат на 14-21 сут при температуре 26-28 С. Далее из одной колонии выращенного гриба делали повторный посев в течение 5 раз. Методом разведения выделяли клоны названного гриба выросших в чашках Петри на суслоагаре, которые при дальнейшем посеве давали наибольший рост. Накопление биомассы определяли в камере Горяева по общепринятой методике. Таким образом, в результате проведенных исследований был выделен полевой изолят гриба из рода,который был более предпочтителен для дальнейшей работы. Вакцинный штамм-0182 КазНИВИ 15 получен путем направленного 2 ступенчатого отбора, по признаку спорообразования быстро растущих колоний с активным накоплением макроконидий. Полученный штамм отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью,высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Штамм характеризуется следующими признаками. Морфологические признаки. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 обладает морфологическими признаками,характерными для возбудителя микроспории лошадей. Окрашенные по Граму культуры гриба грамположительные. Культуральные свойства. Культуры гриба быстрорастущие, рост колонии наблюдается на 2-5-й день в виде маленького пушистого возвышения, окруженный зоной белесоватого пушка к 10-му дню достигают диаметра 4-5 см. Растущий штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 ветвящийся, беловатый, сероватый или бежевый, пушистый, бархатисто- мучнистый,распростертый,овальный,растущий край воздушного мицелия паутинистый. Размеры шириной 0,6-3,5 мкм, септированный, изогнуты,иногда гифы ракетообразные. микроконидии немногочисленные,овальные,грушевидные,размером 3-62,5-3,5 мкм,сидящие или прикрепленные короткими ножками, встречаются не постоянно, располагаются на конидиеносцах различного размера макроконидии многочисленные,веретеновидной формы с вытянутыми концами, с толстостенной гладкой или зубчатой оболочкой, с 8-12 перегородками,размером 50-12015-25 мкм, располагающихся иногда на равном расстоянии одна от другой по ходу мицелия. Артроспоры гриба единичные или отсутствуют. Хламидоспоры округлые,интеркалярные диаметром 8-12 мкм, располагаются на равном расстоянии друг от друга по ходу мицелия, единичные или отсутствуют. Биохимические свойства. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 состоит из углеводов, постоянно усваивает сахарозу,глюкозу, мальтозу, манит фактором роста являются тиамин,никотиновая,патнтотеновая,парабензойные кислоты. Стимулятором роста железо, цинк, марганец, медь, молибден, кальций,кобальт, никель, бор и др. Сероводород и индол не образует. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме кошек, собак и пушных зверей(кроликов) образуются специфические агглютинины в титрах 140 - 11280. Маркерные признаки. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Пептоны, аспарагин, глутоминовая кислота,сусло агар, аминокислоты, углеводы сахароза,глюкоза, мальтоза, маннит факторы роста (тиамин,никотиновая, пантотеновая, парабензойная кислоты и др.) стимуляторы роста (железо, цинк, марганец,медь, молибден, кальций, кобальт, никель, бор и др.). Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 60 -145 млн/см макроконидии многочисленные, овальные размером 15-2550-120 мкм микроконидии округлые или грушевидные,иногда продолговатые, размер 3-62,6-3,5 мкм,встречается не постоянно. Иммунохимические - в реакциях РСК и РИГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 патогенен для лошадей, кошек, собак, пушных зверей и мышевидных грызунов. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении названного штамма в дозе 20106 макроконидии создает напряженный иммунитет у привитых лошадей, кошек, собак и пушных зверей (кроликов) к последующему заражению микроспории продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 безвреден для лошадей, кошек, собак и пушных зверей (кроликов) в дозе 20106 макроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 слабореактогенен для лошадей, кошек, собак и пушных зверей(кроликов) при внутримышечном введении, так как вакцина приготовлена из убитых(инактивированных) клеток дерматофитов. У привитых животных спустя 15-25 дней на месте инъекции развивается небольшой специфически локализованный поверхностный очажок, который самопроизвольно излечивается в течение 2-3 недель. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на суслоагаре 60-145 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0182 КазНИВИ 15 стабильно сохраняются на протяжении года (при 23-х кратном пассаже в течение года) при пассаже культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока или 10 сахарозы и 1,5 желатина штамм гриба-0182 КазНИВИ 15 не снижает активности при температуре 2-10 С в течении 12 месяцев, в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течении 6 месяцев, при минус 20 С ниже в течение 2 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течении 5 часов, при 4 С 3 сут. Пример. Для приготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей используют 14-21 дневные культуры штаммов, выращенные в матрасных колбах на суслоагаре (рН 7,2-7,4) при температуре 26-28 С в течении 16-18 суток. Выращенную гребницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды специальными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу гомогенизируют в миксерах,а затем с помощью стерильной воды или физиологическим раствором полученный гомогенат ресуспензируют до концентрации макроконидии 20106/см 3. Ресуспензирование проводят в присутствии антибиотика (пенициллин или стрептомицин) из расчета 100 ЕД/см гомогената. К полученной суспензии грибной массы добавляют равное количество стабилизатора(рН 7,2-7,4) содержащего в воде 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкое обезжиренное молоко и все это тщательно перемешивают и разливают в стерильные флаконы или ампулы. Вакцину применяют с профилактической и лечебной целями внутримышечно, двух или трехкратно в область бедра, сначала в одну конечность, а через 10-14 суток - в другую. Для каждого животного используют отдельную стерильную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением, место инъекции дезинфицируют 70 этиловым спиртом. Приготовленный таким образом гомогенат из штамма-0182 КазНИВИ 15 позволяет надежно профилактировать заболеваемость поголовья лошадей от микроспории в течение года. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба-0182 КазНИВИ 15, депонированный в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей.