Способ медико-биологической оценки воздействия генетически-модифицированных организмов растительного происхождения на организм лабораторных животных

(51) 61 16/00 (2006.01) 01 33/48 (2006.01) 01 33/50 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ постнатальное развитие потомства лабораторных животных, в рацион питания которых входил корм,содержащий генетически модифицированные организмы растительного происхождения, с определением эмбриотоксичности и тератогенности до 5 поколения и выявление воздействия генетичеки-модифицированных организмов при патологоанатомическом и гистологическом рассмотрении на клеточном уровне, в качестве экспериментальной модели используют беспородных лабораторных белых крыс, затем исследуют генеративные функции при ренатальном и постнатальном развитии потомства лабораторных крыс в более длительные сроки до 5 поколения с выявлением патологических изменений в печени,селезенке, репродуктивных органах проявляющихся уменьшением размера матки, асимметрией ее формы в виде гипоплазии одного из рогов матки,отсутствием или уменьшением количества плодов,незрелостью внутренних органов, отсутствием одного из трех листков экто, энто-, мезо-дермы и гистологическими изменениями в виде неравномерной пролиферации желез с увеличением количества бокаловидных клеток, инфильтрации подслизистой основы лимфоцитами вплоть до образования лимфоидных фолликул в желудке,зернистой и гидропической белковой дистрофии гепатоцитов с микрофокусами некроза в печени,уменьшения размеров и количества лимфоидных фолликул, отсутствия герминативных центров в селезенке, гидропической, зернистой дистрофии хрящевых клеток, фрагментацией, гипоплазии миоцитов,частичной десквамации клеток эктодермы плодов,которые дают оценку воздействия генетически модифицированных организмов на организм лабораторных животных,устанавливают эмбриотоксичность и тератогенность.(72) Сарбаканова Шолпан Таупиковна Латыпова Залина Акрамовна Анаятова Багдагуль Жамалиевна Омарбек Нуржан Сабажанулы(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ВОЗДЕЙСТВИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИМОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА ОРГАНИЗМ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к медикобиологической области и может быть использовано при оценке безопасности генетическимодифицированных организмов растительного происхождения в опыте на лабораторных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в разработке способа медико-биологической оценки, основанного на изучении отдаленного во времени действия генетически-модифицированных организмов на генеративные функции пренатальное и постнатальное развитие потомства лабораторных белых крыс до 5 поколения, с выявлением структурных изменений на клеточном уровне при гистологическом исследовании внутренних оргнов. Способ медико-биологической оценки воздействия генетически-модифицированных организмов растительного происхождения на организм лабораторных крыс,включающий интегральные, гематологические, биохимические,морфологические, иммунологические показатели,дополнительно включает исследования генеративных функций,пренатальное и Изобретение относится к медико-биологической области и может быть использовано при оценке безопасности генетически-модифицированных организмов растительного происхождения в опыте на лабораторных животных. Известен способ медико-биологической оценки генетически-модифицированных организмов растительного происхождения,включающий интегральные, гематологические, биохимические,морфологические, иммунологические показатели, а также исследования репродуктивной токсичности ГМО на лабораторных животных, которые включают изучение влияния на генеративную функцию, эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития////119807/ ПОСТАНОВЛЕНИЕ Главного государственного санитарного врача РФ от 30.11.200780 О НАДЗОРЕ ЗА ОБОРОТОМ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГМО. Дата документа 30.11.2007. Приложение 1, Медикобиологическая оценка безопасности генноинженерно-модифицированных организмов растительного происхождения. Методические указания МУ 2.3.2.2306-07. Недостатком указанного способа является то, что он не охватывает исследование отдаленного действия генетически-модифицированных организмов растительного происхождения на генеративную функцию,пренатальный и постнатальный периоды развития потомства лабораторных животных до 5 поколения,гистологические исследования внутренних органов. В качестве лабораторной модели используют дорогостоящих крыс линии Вистар. Задачей изобретения является разработка способа оценки репродуктивной токсичности генетически-модифицированных организмов растительного происхождения на организм лабораторных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в разработке способа медико-биологической оценки, основанного на изучении отдаленного во времени действия генетически-модифицированных организмов на генеративные функции,пренатальное и постнатальное развитие потомства лабораторных белых крыс до 5 поколения, с выявлением структурных изменений на клеточном уровне при гистологическом иследовании внутренних органов. Способ медико-биологической оценки воздействия генетически-модифицированных организмов растительного происхождения на организм лабораторных животных, включающий гематологические,биохимические и иммунологические показатели,дополнительно включает исследование генеративных функций,пренатальное и постнатальное развитие потомства лабораторных животных, в рацион питания которых входил корм,содержащий генетическимодифицированные организмы, с определением эмбриотоксичности и тератогенности до 5 2 поколения и выявление воздействия генетичекимодифицированных организмов при патологоанатомическом и гистологическом рассмотрение на клеточном уровне. Изучают 5 поколений лабораторных белых крыс родительское (0), первое (1), второе (2), третье(3), четвертое (4) и пятое (5). Исходная колония крыс (самки и самцы, возраст - 40-50 дней). Животных делят на две группы опытную и контрольную. Каждая группа состоит из 50 белых крыс (30 самок и 20 самцов). В рацион питания животных опытной группы включают корм,содержащий 5 генетически модифицированные организмы растительного происхождения, крысы контрольной группы получают традиционный аналог исследуемого генетическимодифицированного корма по 10 грамм на крысу. Экспериментальные рационы животные получают на протяжении всего срока эксперимента. В каждой группе к началу спаривания не менее 15-20 самцов и 20-30 самок, у которых перед началом опыта проверяют астральный цикл. Для оплодотворения самок подсаживают к самцам в соотношении 32 сроком на 1 эстральный цикл(5 дней). Крысят отсаживают от матерей на 30-й день жизни, для продолжения эксперимента отбирают потомство от разных самок (с целью рандомизации исследований и избежание инцеста). В течение эксперимента ведутся наблюдения за поедаемостью корма. Пренатальное и постнатальное развитие потомства определяют на лабораторных животных. Берут по 5 беременных самок из каждой группы,подвергают эвтаназии на 19-20-й день беременности. При вскрытии проводят морфологическое исследование репродуктивных органов (матки и плаценты), плодов определяют количество мест имплантации и резорбции по правому и левому рогу матки. После чего проводят наблюдение постнатального развития потомства. Для этого в первый день жизни определяют величину помета в день родов,подсчитывают количество живых и мертвых крысят,особей разного пола, устанавливают внешние уродства, измеряют массу тела. При эвтаназии у лабораторных крыс осуществляют забор крови,путем декапитации, в количестве 5-6 см 3 для дальнейших гематологических, биохимических и иммунологических исследований. Постнатальное развитие потомства оценивают в течение первого месяца жизни. Для этого в первый день жизни определяют величину помета в день родов, подсчитывают количество живых и мертвых крысят, особей разного пола, устанавливают внешние уродства, измеряют массу тела. Массу тела и краниокаудальный размер крысят измеряют на 2-е, 5-е, 10-е, 15-е, 20-е и 25-е сутки жизни. Также определяли среднюю величину помета,соотношение самцов и самок. Для продолжения опыта отбирают второе поколение 30- дневных белых крысят и сформировывают опытную и контрольную группы по 30 самок и 20 самцов в каждой. Далее повторяют серию опытов описанную выше и так до пяти поколений. Эмбриотоксичность и тератогенность генетически-модифицированных организмов растительного происхождения(ГМО) в пренатальный и постнатальный периоды определяют на лабораторных белых крысах и их потомстве. У них устанавливают исходные морфологические показатели органов размножения. Для патоморфологических работ отбирают образцы органов и тканей животных. После взятия образцы фиксируют в 96 спирте и 10 растворе формалина,далее подвергают парафиновой проводке, заливке их в парафин. Для изучения гистологической картины изготавливают гистосрезы из опытных образцов тканей органов экспериментальных животных. Срезы окрашивают гемотоксилин эозином и рассматривают под микроскопом. Определяют следующие изменения в постнатальном развитии потомства 3-5 поколений уменьшение общего количества крысят, средней величины помета и процента выживаемости животных макро и микроскопические изменения у животных уменьшение размера матки, асимметрию ее формы в виде гипоплазии одного из рогов матки. Устанавливают отсутствие или уменьшение количества плодов, а также определяют наличие и количество гипоплазированных плодов. Паренхиматозные органы, печень и селезенка,дряблой консистенции. В печени наблюдают зернистую и гидропическую белковую дистрофию гепатоцитов с микрофокусами некроза. В селезенке определяют уменьшение размеров и количества лимфоидных фолликул, отсутствие герминативных центров. Желудочно-кишечный тракта имеет неравномерную пролиферацию подслизистой основы лимфоцитами вплоть до образования лимфоидных фолликул. У плодов животных определяют незрелость внутренних органов,отсутствие одного из трех листков (экто-, энто-,мезодермы). Наблюдают гидропическую,зернистую дистрофию хрящевых клеток,фрагментацию, гипоплазию миоцитов, частичную десквамацию клеток эктодермы. Таким образом, после введения в рацион кормления генетически-модифицированного корма,лабораторным животным, изменяется макро и микроскопическая структура внутренних органов животных и их плодов, наблюдают признаки эмбриотоксичности. Заявляемый способ определения медикобиологической оценки ГМО растительного происхождения,отличается высокой информативностью,поскольку феномен репродуктивной токсичности высокочувствителен ко всем изменениям. Срок проведения эксперимента(до 5 поколений) дает возможность проследить отдаленное действие ГМО растительного происхождения на репродуктивную функцию и организм животных в целом. Использование разработаного способа отличается технической и экономической доступностью. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ медико-биологической оценки воздействия генетически-модифицированных организмов растительного происхождения на организм лабораторных животных, включающий интегральные, гематологические, биохимические,морфологические, иммунологические показатели,исследование генеративных функций, пренатальное и постнатальное развитие потомства лабораторных животных, в рацион питания которых вводят корм,содержащий генетически модифицированные организмы растительного происхождения, с определением эмбриотоксичности и тератогенности и выявление воздействия генетическимодифицированных организмов при патологоанатомическом и гистологическом рассмотрении на клеточном уровне,отличающийся тем,что в качестве экспериментальной модели используют беспородных лабораторных белых крыс, у которых исследуют генеративные функции при пренатальном и постнатальном развитии их потомства до 5 поколения, и, при выявлении уменьшения размера матки, асимметрии ее формы в виде гипоплазии одного из рогов, отсутствии или уменьшении количества плодов, незрелости внутренних органов, отсутствии одного из трех листков экто-, энто-, мезодермы, а также, при гистологических изменениях в виде неравномерной пролиферации желез с увеличением количества бокаловидных клеток, инфильтрацией подслизистой основы лимфоцитами вплоть до образования лимфоидных фолликул в желудке, зернистой и гидропической белковой дистрофии гепатоцитов с микрофокусами некроза в печени, уменьшении размеров и количества лимфоидных фолликул,отсутствии герминативных центров в селезенке,частичной десквамации клеток эктодермы плодов, оценивают отдаленное отрицательное воздействие генетически модифицированных организмов на организм лабораторных животных.