Способ проведения сиквенсовой реакции для идентификации бактерий

(51) 61 10/00 (2006.01) 01 33/53 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ 16 бактерий для идентификации,заключающийся в сокращении времени исследования с 1 часа 13 мин 45 сек до 56 минут. Способ проведения сиквенсовой реакции для идентификации бактерий,включающий приготовление реакционной смеси, с последующим проведением реакции сиквенса в температурно временном режиме, составляющие реагенты реакционной смеси содержат 0,3 мкл - ,2,0 мкл - х 5 буфера, 50-400- матрицы, 3,2 праймера, воды до 6,0 мкл, и изменяют программу,задаваемую в амплификатор с одним циклом при температуре 96 С в течение 1 мин, 30 циклов при температуре 96 С в течение 10 сек, при температуре 50 С в течение 10 сек, при температуре 60 С в течение 1.5 мин, в результате реакции получают целевой продукт для проведения генотипирования микроорганизмов гена 16 бактерий.(72) ултанов Ахметжан Акиевич Барамова Шолпан Аузаровна Даугалиева Аида Тлековна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ СИКВЕНСОВОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ(57) Изобретение относится к области молекулярной микробиологии, в частности к идентификации бактерий и может быть использовано для секвенирования гена бактерий. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в разработке эффективного способа секвенирования гена Программа термоциклирования включает в себя Изобретение относится к области молекулярной микробиологии, в частности к идентификации один цикл при температуре 96 С в течение 1 мин,бактерий и может быть использовано для 30 циклов при температуре 96 С в течение 10 сек, при температуре 50 С в течение 10 сек, при температуре секвенирования гена бактерий. Известен способ проведения сиквенсовой реакции 60 С в течение 1.5 мин. Продукт, полученный в результате проведенной для идентификации бактерий,включающий приготовление реакционной смеси, с последующим реакции, очищают осаждением спирто-ацетатной проведением реакции сиквенса в температурно - смесью. Для этого, вносят 5 М 3 ацетата натрия временном режиме. .,(рН 4,6-5,2) в каждую пробирку и добавляют 1998. Недостатком указанного способа является его холодный раствор этанола С 2 Н 5 ОН (96),непригодность для практического применения в перемешивают вортексом и центрифугируют при лабораториях, в связи с длительностью постановки 3 200 об/мин в течение 30 минут при температуре 4 С. Накрывают микропланшет крышкой для реакции. Задачей изобретения является разработка способа образцов. После центрифугирования снимают и помещают на держатель проведения сиквенсовой реакции для идентификации микропланшет микропланшета центрифуги бумажное полотенце,бактерий. Технический результат,обеспечиваемый сложенное в 3-4 раза. Снимают крышку и микропланшет для удаления изобретением, выражается в разработке эффективного переворачивают жидкости,центрифугируют до способа секвенирования гена 16 бактерий для надсадочной идентификации, заключающийся в сокращении 200 об/мин. Промывают каплю осадка С 2 Н 5 ОН времени исследования с 1 часа 13 мин 45 сек до холодным раствором этанола (70), центрифугируют при 3 000 об/мин 5 минут. Снимают крышку и 56 минут. Способ проведения сиквенсовой реакции для переворачивают микропланшет на выстеленный идентификации бактерий,включающий бумажным полотенцем держатель микропланшета для супернатанта,центрифугируют до приготовление реакционной смеси, с последующим удаления проведением реакции сиквенса в температурно - 200 об/мин. Высушивают микропланшет в центрифуге временном режиме,составляющие реагенты с ротационным испарителем в течение 5 мин при реакционной смеси содержат 0,3 мкл - , температуре 60 С. Затем очищенный продукт секвенирования 2,0 мкл - х 5 буфера, 50-400- матрицы, 3,2 праймера, воды до 6,0 мкл, и изменяют программу, денатурируют формамидом. В каждую пробирку задаваемую в амплификатор с одним циклом при вносят по 10 мкл формамида, центрифугируют до температуре 96 С в течение 1 мин, 30 циклов при 1000 об/мин. Ставят в термоциклер при следующих температуре 96 С в течение 10 сек, при температуре условиях 95 С-5 мин. Разделение фрагментов осуществляют в 50 С в течение 10 сек, при температуре 60 С в течение 1.5 мин, в результате реакции получают целевой полиакриламидном геле в генетическом анализаторе дальнейшего считывания результатов продукт для проведения генотипирования для бактерий. Интерпретация микроорганизмов гена 16 бактерий. генотипирования результатов даст возможность подтвердить родовую Изобретение осуществляют следующим образом. Проводят постановку полимеразной цепной принадлежность бактерий. Использование способа проведения сиквенсовой реакции. Для амплификации в общем объеме 25 мкл готовят смесь, содержащую 15 нг ДНК, реакции для идентификации бактерий, позволит 2.5 реакционной смеси, 10 мкл деионизированной уменьшить время исследования. воды,5 пмоль каждого праймера. Программа термоциклирования включает в себя 94 С 30 сек. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 60 С 30 сек. 72 С 30 сек., в течение 27 циклов с Способ проведения сиквенсовой реакции для последующим выдерживанием при 4 С. ПЦР бактерий,включающий продукты очищают от остатков олигонуклеотидов идентификации методом дефосфолирирования с помощью щелочной приготовление реакционной смеси, с последующим фосфатазы Е 328 ( -) и проведением реакции сиквенса в температурноэндонуклеазы 0582. Готовят смесь в общем временном режиме, отличающийся тем, что объеме 2 мкл для каждой пробы - 2 О - 1.28 мкл, составляющие реагенты реакционной смеси содержат- 12 ед./ мкл,- 12 ед./ мкл. 0,3 мкл- , 2,0 мкл-х 5 буфера, 50-400 Полученную смесь добавляют к каждому ПЦР матрицы, 3,2 -праймера, воды до 6,0 мкл, и продукту, раскапывают праймер - 1 мкл, ставят в изменяют программу, задваемую в амплификатор с термоциклер при следующих условиях 37 С-15 мин, одним циклом при температуре 96 С в течение 1 мин,30 циклов при температуре 96 С в течение 10 сек, при 85 С-15 мин, 4 С-. Готовят компоненты для постановки реакции температуре 50 С в течение 10 сек, при температуре секвенирования 0,3 мкл - , 2,0 мкл - х 5 буфера, 60 С в течение 1,5 мин. 50-400- матрицы, 3,2- праймера, воды до 6,0 мкл. Верстка Ж. Жомартбек Корректор Е. Барч 2