Способ морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов при хирургических операциях на сердце

(51) 61 10/02 (2006.01) 01 1/28 (2006.01) 01 33/50 (2006.01) 01 33/52 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов у больных при хирургических операциях на сердце,включает морфологическое исследование интраоперационных биоптатов миокарда, при этом определяют функциональную потенцию кардиомиоцитов по определению плоидности кардиомиоцитов также значения показателя-ГЭР./белок кардиомиоцитов по сравнению с такими же показателями в норме, и при значении показателя -ГЭР./белок не более 1,0 и при значении удельной плоидности более 1,20 усл. ед. диагностируют хорошую функциональную потенцию кардиомиоцитов,при выявлении значения показателя -ГЭР./белок более 2,0 и при значении удельной плоидности менее 1,20 усл. ед. диагностируют низкую функциональную потенцию кардиомиоцитов. Анализ удельной плоидности клеток несет существенную информацию для оценки функциональной потенции кардиомиоцитов. В частности, высокое значение этого показателя свидетельствует о повышенных резервных возможностях кардиомиоцитов, а его значительное снижение является неблагоприятным признаком.(72) Енин Евгений Альбертович Адильгиреева Люция Халиловна Алдешев Агзам Алмасович Тугамбаев Арман Ермекович Ярема Галина Владимировна(73) Акционерное общество Национальный научный центр хирургии им. А.Н. Сызганова(56) Сиротина О.В., Саликова СП., Стадников А.А. Роль апоптоза клеток миокарда в развитии ремоделирования сердца и хронической сердечной недостаточности. // Морфология, 2004, Т. 126, 4,с.116(54) СПОСОБ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ КАРДИОМИОЦИТОВ ПРИ ХИРУРГИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЯХ НА СЕРДЦЕ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, кардиохирургии и патоморфологии и может быть использовано в качестве объективных критериев для оценки функциональной потенции кардиомиоцитов у больных при хирургической коррекции митральных пороков сердца. Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, кардиохирургии и патоморфологии и может быть использовано в качестве объективных критериев для оценки функциональной потенции кардиомиоцитов у больных при хирургической коррекции митральных пороков сердца. Утрата части сократительного миокарда вследствие инфаркта, повторяющихся ишемий либо воспалительного процесса, а также хроническая перегрузка сердца объемом циркулирующей крови сопровождается комплексом структурных изменений кардиомиоцитов и не мышечных клеток. Поэтому морфологическая оценка компенсаторных и приспособительных возможностей миокарда очень важна. Известен способ морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов при хирургических операциях на сердце,включающий морфологическое исследование интраоперационных биоптатов миокарда при ремоделировании сердца у больных перенесших инфаркт миокарда,при этом выявляемая степень апоптоза клеток миокарда соответствует степени сердечной недостаточности(Сиротина О.В., Саликова С.П., Стадников А.А. Роль апоптоза клеток миокарда в развитии ремоделирования сердца и хронической сердечной недостаточности. // Морфология. - 2004. - Т. 126,4. с.116). Недостатком способа является то, что известный способ предназначен только для использования при ремоделировании сердца у больных перенесших инфаркт миокарда. Задачей изобретения является разработка способа морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов у больных при хирургических операциях на сердце и предназначен для морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов миокарда,полученные при хирургической коррекции митральных пороков сердца, способ позволяет определять патологию ядерноцитоплазменных отношений кардиомиоцитов. Способ морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов у больных при хирургических операциях на сердце,включает морфологическое исследование интраоперационных биоптатов миокарда, при этом определяют функциональную потенцию кардиомиоцитов по опоелелению плоилности каолиомиоцитов также значений показателя 8 Нрр/белок кардиомиоцитов по сравнению с такими же показателями в норме, и при значении показателя -ГЭР./белок не более 1,0 и при значении удельной плоидности более 1,20 усл. ед. диагностируют хорошую функциональную потенцию кардиомиоцитов,при выявлении значения показателя -ГЭР./белок более 2,0 и при значении удельной плоидности менее 1,20 усл. ед. диагностируют низкую функциональную потенцию кардиомиоцитов. Способ осуществляют следующим образом. Морфологическую диагностику функционального состояния кардиомиоцитов у 2 больных при хирургических операциях осуществляют при исследовании биопсии миокарда различных отделов сердца, полученные при хирургической коррекции митральных пороков взятых до кардиоплегии, а также участки миокарда,взятые при аутопсии практически здоровых людей(условная норма). Диссоциацию клеток проводят с помощью обработки кусочков миокарда в 30 КОН, по методике, предложенной Шнайдером и Щитцером(1973). Для выявления ДНК в ядрах кардиомиоцитов используют реакцию Фельгена при стандартных условиях. С целью определения РНК в цитоплазме кардиомиоцитов препараты окрашивают галлоцианин-хромовыми квасцами по методике Зандритера и соавт. О содержании общего белка в мышечных клетках судят на основании изучения препаратов,окрашенных щелочным прочным зеленым(модифицированная методика Олферта и Гешвинда,1969). Для выявления связанных с белком -групп препараты выдерживают в 0,05 растворе 2,2 диокси-6,6-динафтил дисульфида (ДДД) в течениечаса при температуре 55 С и докрашивают раствором диазолиевой соли прочного черного К(Зелигман , 1952 Бар, 1969). Количественные определения содержания ДНК,РНК, белка и сульфгидрильных групп выполняются на цито-спектрофотометре. Площадь кардиомиоцитов измеряют с помощью взвешивания увеличенных бумажных проекций фотоотпечатков клеток с последующим пересчетом весовых данных на единицы площади в мкм 2 . Для практических целей зависимость между плоидностью ядер и площадью клеток выражают в единицах удельной плоидности,которая рассчитывается путем деления относительного количества ДНК на среднюю площадь клеток. Показатель удельной плоидности клеток говорит о количестве ДНК, приходящемся на единицу площади цитоплазмы, и может служить мерой оценки ядерно-цитоплазменных отношений при различных степенях гипертрофии клеток. При значении удельной плоидности более 1,20 усл. ед. диагностируют хорошую функциональную потенцию кардиомиоцитов, что свидетельствует о наличии в кардиомиоцитах наряду с активными, определенного количества резервных белков. При выявлении значении показателя -гр./белок более 2,0, и при значении удельной плоидности менее 1,20 усл. ед. диагностируют низкую функциональную потенцию кардиомиоцитов. Примеры выполнения способа. Пример 1. Больной Б., возраст 65 лет На основании проведения клинико-лабораторных и инструментальных исследований выставлен клинический диагноз хроническая ревматическая болезнь сердца, стеноз и недостаточность митрального клапана,относительная недостаточность трикуспидального клапана, НК ПА, ФКШ, артериальная гипертензия 3 степени. Больному под эндотрахеальным наркозом произведена операция протезирование митрального клапана биоклапаном -27 в условиях искусственного кровообращения. При выполнении хирургического вмешательства была взята интраоперационная биопсия миокарда различных отделов сердца до кардиоплегии. Послеоперационный период протекал соответственно тяжести перенесенной операции. Больной на вторые сутки, после стабилизации состояния переведен в общую палату. Дренажи удалены на третьи сутки. Активизирован. Дыхательная гимнастика. После проведенного хирургического и медикаментозного лечения состояние пациента улучшилось. На момент выписки общее состояние удовлетворительное. При этом морфологическое исследование интраоперационных биоптатов миокарда по определению функциональной потенции кардиомиоцитов при определении плоидности кардиомиоцитов показало следующее значение показателя -ГЭР./белок - 1,0 значение удельной плоидности - 1,2 усл. ед. Диагностировали хорошую функциональную потенцию кардиомиоцитов. Это свидетельствовало о наличии в кардиомиоцитах наряду с активными, определенного количества резервных белков. Пример 2. Больная С, возраст 75 лет,клинический диагноз митральный порок стеноз и недостаточность, недостаточность аортального и трикуспидального клапанов, мерцательная аритмия,тахисистолическая форма, легочная гипертензия А степени, ХСН А,ФК. Больной под эндотрахеальным наркозом произведена операция протезирование митрального клапана биоклапаном Сенджут-25,протезирование аортального клапана биоклапаном Сенджут-23, ремоделирование левого предсердия по Кокс-Мэд , аннулопластика трикуспидального клапана по Де-Вега в условиях искусственного кровообращения. При выполнении хирургического вмешательства была взята биопсия миокарда различных отделов сердца, до кардиоплегии,Послеоперационный период протекал соответственно тяжести перенесенной операции. Больная на вторые сутки, после стабилизации состояния переведена в общую палату. Дренажи удалены на третьи сутки. Активизирована. Дыхательная гимнастика. После проведенного лечения состояние пациентки улучшилось. На момент выписки общее состояние удовлетворительное. Температура тела в норме. Кожные покровы и видимые слизистые чистые, обычной окраски. Над легкими дыхание жестковатое. Хрипов нет. ЧДД 18 в мин. Тоны сердца слегка приглушены. Ритм неправильный. ЧСС 108 в мин. АД 100/60 мм рт.ст. . Послеоперационные раны зажили первичным натяжением. При этом морфологическое исследование интраоперационных биоптатов миокарда для определения функциональной потенции кардиомиоцитов при определении плоидности кардиомиоцитов следующее показатель-ГЭР./белок, значения было выше 2,0. - 2,81. Столь выраженное повышение этого показателя свидетельствовало о напряженной работе белковых структур при отсутствии резервов или о дистрофических изменениях, сопровождающихся распадом белков. При выявленном значении удельной плоидности менее 1,20 усл. ед. 0,91 усл. ед. - диагностировали у данной больной низкую функциональную потенцию кардиомиоцитов. Эти показатели могут быть определяющими при возможной постановки данной пациентки в лист ожидания на пересадку сердца. Апробация способа проведена при цитофотометрическое и морфометрическое исследование кардиомиоцитов, взятых у больных при хирургических операциях осуществляют при исследовании биопсии миокарда различных отделов сердца, полученные при хирургической коррекции митральных пороков сердца,взятых до кардиоплегии (12 пациентов), а также участки миокарда, взятые при аутопсии практически здоровых людей - 8 чел.(условная норма). Анализ удельной плоидности клеток несет существенную информацию для оценки функциональной потенции кардиомиоцитов. В частности, высокое значение этого показателя свидетельствует о повышенных резервных возможностях кардиомиоцитов, а его значительное снижение является неблагоприятным признаком. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ морфологической диагностики функционального состояния кардиомиоцитов у больных при хирургических операциях на сердце,включающий морфологическое исследование интраоперационных биоптатов миокарда,отличающийся тем,что определяют функциональную потенцию кардиомиоцитов по значениям плоидности кардиомиоцитов и показателя -ГЭР/ белок кардиомиоцитов по сравнению с такими же показателями в норме при значениях показателя -ГЭР/белок не более 1,0 и при удельной плоидности более 1,20 усл. ед., диагностируют хорошую функциональную потенцию кардиомиоцитов при выявлении значения показателя -ГЭР/белок более 2,0 и удельной плоидности менее 1,20 усл. ед., диагностируют низкую функциональную потенцию кардиомиоцитов.