Штамм мицелиального гриба Trichoderma citrinoviride F-RKM-0552- продуцент целлюлазы

МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ 0552 - продуцента целлюлазы и обладающего достаточно высокой целлюлозолитической активностью. Штамм был выделен на плотной питательной среде Гетчинсона, методом отпечатков. Образцы древесины сосны отобраны на территории Акмолинской области в 2012 г. Усиление свойств целлюлозолитической активности проведено трехступенчатым химическим мутагенезом из исходной культуры 4. Культивирован на агаризованной питательной среде Чапека при температуре 20 - 25 С в течение 7 сут. Идентифицирован с использованием определителя С.Р. Шварцман и др. Флора споровых растений Казахстана. Штамм гриба 4. на основании результатов анализа патогенности депонирован в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов под 0552.(72) Оспанкулова Гульназым Хамитовна Нечай Наталья Леонидовна Каманова Светлана Георгиевна Тоймбаева Дана Болатовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт переработки сельскохозяйственной продукции(54) ШТАММ МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА 0552 ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЛЮЛАЗЫ(57) Изобретение относится к биотехнологии,микробиологии касается производства ферментных препаратов и представляет собой новый штамм 0552 продуцент целлюлаз. Технической задачей изобретения является получение штамма- 29558 Изобретение относится к биотехнологии,касается производства ферментов и представляет собой новый штамм-0552-продуцент целлюлаз. Известен штамм мицелиального гриба- продуцент целлюлаз,бета-глюканаз и ксиланаз (см. описание к патенту, 2303065, Опублик. 2006 г). Активности ,(целлюлазная), КМЦ-азная, бета-глюканазная и ксиланазная в культуральной жидкости оставляют 9,48, 45 и 50 ед/мл соответственно. Недостатком этого штамма является низкий уровень целлюлаз и-глюканаз при культивировании в глубинных условиях. Известен продуцент целлюлаз 63/300 (А.с.2213138, 2012 г.). Штамм 63/300 получен в результате ступенчатой мутагенной обработки конидий исходного штамма 4411/62/3 (-374). Для получения инокулята используется питательная среда следующего состава,аммоний сернокислый - 0,4 отруби пшеничные - 1,0 калий фосфорнокислый однозамещенный 0,2 лактоза - 0,5 вода водопроводная - до 1005,0. Засев посевной среды осуществляют суспензией спор культуры, выращенной на сусло-агаре. Инокулят выращивают в качалочных колбах емкостью 0,75 л при температуре 30 С в течение 1824 часов. Полученным инокулятом засевают ферментационную среду следующего состава,отруби пшеничные - 2,0 целлюлоза - 0,7 кукурузный экстракт - 1,0 дрожжи кормовые - 0,5 аммоний сернокислый - 0,8 калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,2 вода водопроводная - до 1005,0 объем питательной среды в колбе - 50 мл,количество инокулята - 5 мл. Ферментацию штамма 63/300 проводят в колбах емкостью 0,75 мл на круговой качалке при 210 об/мин и температуре 29 С. Продолжительность процесса 100-110 часов. Активность целлюлазы 60-65 ед/мл, ксиланазы 300350 ед/мл, -глюканазы 80 ед/мл. Приведенный способ по совокупности признаков и достигнутому положительному эффекту является наиболее близким техническим решением(прототипом). Существенным недостатком штамма является низкий уровень ферментов и сравнительно большая продолжительность культивирования. Задача, на решение которой направлено заявленное изобретение, заключается в получении нового высокоэффективного штамма мицелиальных грибов - продуцента целлюлаз. Технической задачей изобретения является получение штамма 4.- продуцента целлюлазы, и обладающего достаточно высокой целлюлозолитической активностью. Штамм был выделен на плотной питательной среде Гетчинсона, методом отпечатков. Образцы древесины сосны отобраны на территории Акмолинской области в 2012 г. Усиление свойств целлюлозолитической активности проведено 2 трехступенчатым химическим мутагенезом из исходной культуры 4. Культивирован на агаризованной питательной среде Чапека при температуре 20 - 25 С в течение 7 сут. Идентифицирован с использованием определителя С.Р. Шварцман и др. Флора споровых растений Казахстана. Штамм гриба 4. на основании результатов анализа патогенности депонирован в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов под 0552. Биологическая характеристика штамма 4 Морфолого-культуральные и физиологобиохимические особенности штамма При росте на агаризованной среде картофельный агар колонии прижатые, зональные темно-зеленые,быстрорастущие. Реверс белый с просвечивающими темными кругами. Конидиофоры, возникающие в основном из воздушных гиф, обычно содержат длинную ось, которая плодородна к кончику фиалиды возникают отдельно от основной оси на расстоянии приблизительно 45 мкм. Фиалиды удлиненно-бутылевидные с хорошо оформленной шейкой, размером (4,90-7,352,45-3,26) мкм. Конидии круглые, диаметром 2,85-3,26 мкм,одноклеточные, образуются на вершинах фиалид. Отношение к источникам углерода сахароза высокая, глюкоза - выше среднего, маннит высокая, мальтоза - средняя, лактоза- выше среднего, крахмал - высокая. Отношение к азоту усваивает 3, 3,43, (4)24, (4)224. Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность) принадлежит к 3 классу патогенности. Область применения штамма в биотехнологии для получения ферментного препарата. Хранение в лиофильно высушенном состоянии при температуре не выше 0 С. Хранение на скошенной питательной агаризованной среде Чапека, подкисленной до рН-56, при температуре 4 С, пересев 1 раз в 3-4 месяца. Криоконсервация при температуре -80 С. Информация о штамме включается в каталог коллекции до получения патента. Обладает ферментативными свойствами(целлюлозолитической активностью). Активности КМЦ-азная в культуральной жидкости на 120 ч культивирования оставляют 333,06 ед/мл. Фиг.1 - Динамика накопления глюкозы при культивировании 4 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм мицелиального гриба,депонированный в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов,под регистрационным номером 0552,обладающий целлюлозолитической активностью.