Штамм гриба Trichoderma viride Pers.134-1, обладающий фунгицидным действием против фитопатогенов лекарственных растений

(51) 12 1/20 (2006.01) 01 63/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ гриба. для получения биопрепарата триходермина. Новый штамм гриба. обладает фунгицидным действием в отношении фитопатогенов лекарственных растений. Методом агаровых блоков значения величин зон ингибирования роста фитопатогенов превышали 20 мм,что свидетельствовало о высокой чувствительности,,к исследуемому штамму- 0560. Методом встречных культур угнетение роста фитопатогенов на 10 сутки(76-95) свидетельствует о наличие антибиотических свойств у штамма гриба 0560. Прирост стебля и корня после обработки семян аянии кустарничковой продуктами метаболизма штамма- 0560 на 5,156,07, полыни гладкой на 6,05-8,12 выше контроля. На 14 сутки инокулирования семян аянии кустарничковой - на 7,32-9,14, полыни гладкой на 8,18-10,05 выше контроля. Данный штамм рекомендуется в качестве основы биопрепарата для защиты сеянцев лекарственных растений от фитопатогенов.(72) Шегебаева Асемгул Амантаевна Рахимова Елена Владимировна Нечай Наталья Леонидовна Карменова Жулдуз Кайратовна Доспаева Райхан Талгатовна Алмагамбетов Каиртай Хамитович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Республиканская коллекция микроорганизмов Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан.134-1,ОБЛАДАЮЩИЙ ФУНГИЦИДНЫМ ДЕЙСТВИЕМ ПРОТИВ ФИТОПАТОГЕНОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ(57) Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, в частности, к получению средств защиты лекарственных растений полыни гладкой.. и аянии кустарничковой(.)от фитопатогенов, и представляет собой новый штамм Изобретение относится к микробиологии,биотехнологии и представляет собой новый штамм гриба, обладающий фунгицидным действием против фитопатогенов лекарственных растений. Известен штамм гриба 0268,обладающий фунгицидным действием к фитопатогенным микроорганизмам(Инновационный патент РК 24478), обладающий антагонистической активностью по отношению к,характеризующийся диаметром стерильной зоны по всей поверхности чашки Петри, а также фитотоксичностью штамма снижением роста ростков и проростков сельскохозяйственных культур на 61,9 и 33,3 соответственно, снижением всхожести на 67 и фитопатогенностью штамма - полным снижением всхоженности (пораженность 100). Недостатком известного штамма является ограниченное действие, направленное на отдельного возбудителя сельскохозяйственных культур. Известен штамм грибаИМИВ-1, обладающий комплексным действием против стеблевых,галловых нематод,колорадского жука и фитопатогенов (Патент РК 10330),характеризующийся антагонистическими свойствами против возбудителей болезней растений,,,,, ,, а также стимулирующий рост проростков сельскохозяйственных растений (пшеницы, огурцов,томатов, сои, сахарной свеклы, кукурузы, перца) на 17-20 выше контроля. Недостатком известного штамма является низкая эффективность антагонистической активности в отношении данных фитопатогенов. Новый штамм гриба. обладает высокой антагонистической активностью в отношении фитопатогенных грибов лекарственных растений,, .. выделен из ризосферы полыни гладкой..,произрастающих на сухостепной зоне Центрального Казахстана с темно-каштановыми почвами. Штамм депонирован в Центральном музее микроорганизмов РГП Республиканская коллекция микроорганизмов с целью гарантийного хранения и патентной процедуры под номером - 0560. Копия свидетельства о депонировании прилагается. Выделение грибов родапроводят путем высева почвенных суспензий на питательную среду Чапека. Для этого использовали навеску в 1 г почвы и переносили в колбу со 100 мл стерильной водопроводной воды. Готовили разведения почвенной суспензии, для чего 1 мл почвенной суспензии из колбы(разведение 1100) последовательно переносили в ряд пробирок с 10 мл стерильной водопроводной воды. Посев почвенной суспензии на плотные среды проводили из разведений 110 1100 11000 и т.д. в зависимости 2 от таксономической принадлежности учитываемых микроорганизмов. На поверхность питательной среды наносили 0,1 мл почвенной суспензии определенного разведения и с помощью стеклянного шпателя распределяли по всему агару. Чашки со средой Чапека инкубировали при 26 С 1 С в течение 5-7 суток. Идентификацию видов проводили на основании исследования физиологоморфологических и культуральных особенностей выделенных изолятов методами, предложенными. и Состав стандартной среды Чапека (г/л дистиллированной воды) 3 - 3,0 Н 2 Р 4- 1,0 4 - 0,5- 0,5 4- 0,01 сахароза - 30,0,агар-агар - 20,0. Стерилизация среды при 0,5 атм. 20-30 мин. Культивирование в течение 5-7 суток при 28 С на качалке 120 об/мин. Хорошо растет на жидкой синтетической среде Чапека картофельнодекстрозном агаре. Морфолого-культуральные признаки Колонии.,формирующиеся на среде Чапека распростертые, на 7 день культивирования занимают всю чашку, центр колонии занят стерильным неокрашенным мицелием, далее располагается зона спороношения,окрашенная в желтый и желто-зеленый цвет. Реверс не окрашенный. При микроскопировании обнаружены септированные, бесцветные гифы различного диаметра. Старые гифы диаметром 3,32-7,66 мкм,вакуолизированы и в них хорошо видны включения. Тонкие гифы диаметром 2,49-3,32 мкм. Конидиеносцы представляют собой боковые ветвящиеся веточки мицелиальных гиф. Фиалиды удлиненно-бутылевидные с хорошо оформленной шейкой, размером (6,64-8,723,32-4,15) мкм. Конидии круглые, диаметром 2,97-3,35 мкм,одноклеточные, образуются на вершинах фиалид.минимальный - 4,5 оптимальный - 5,5-6,7 максимальный - 7,2. Температура скорости роста мицелия минимальная - 7-10 С оптимальная - 21-29 С максимальная - 25-28 С. Физиолого-биохимические свойства Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает глюкозу,сахарозу,крахмал удовлетворительно - мальтозу, маннит. Отношение к источникам азота. Хорошо усваивает азотнокислый калий, азотнокислый натрий, нитрат аммония. Изучены дифференцирующие и диагностические ферменты (амилолитические, протеолитические,целлюлозолитические) проявляет зону просветления на среде с крахмалом, разжижижает желатину, на фильтровальной бумаге не растет. Сведения о наличие патогенных свойств штамм- 0560 принадлежит к 3 классу опасности. Способ, условия и состав сред для хранения штамма. Хранение на скошенной агаризованной среде Чапека подкисленной до рН-5-6, при температуре 4 С, пересев 1 раз в 3-4 месяца. Состав среды Чапека (г/л дистиллированной воды) 3 - 3,0 Н 2 Р 4-1,0 4 - 0,5- 0,5 4- 0,01 сахароза - 30,0, агар- агар - 20,0. Антагонистические свойства Антагонистические свойства штамма в отношении фитопатогенов изучали методами агаровых блоков и встречных культур. Испытуемую культуру гриба высевают сплошным газоном на поверхность агаровой пластинки в чашке Петри. После того как организм хорошо вырастет, пробочным сверлом (диаметр примерно 8 мм) вырезают агаровые блоки с газоном продуцента и переносят их на поверхность другой агаризованной среды, засеянной тест-культурой. На одну чашки Петри размещают 4 агаровых блока. О степени антагонистической активности испытуемой культуры судили по величине зоны ингибирования роста тест-культур вокруг агаровых блоков. По дну чашки Петри провести черту,разделяющую чашку на две равные части. Залить агаризованную среду по 20 мл на чашку. В центр одной половины на расстоянии 2 см от черты поместить, засеяв гриб-патоген, на таком же расстоянии в центр другой - гриб рода . Степень антагонистического воздействия штамма на фитопатогенные тест-культуры учитывали по 5 бальной шкале. Данные по антагонистической активности,полученные методами агаровых блоков и встречных культур штамма гриба 0560 приведены в табл. 1, 2. Таблица 1 Значения величин зон ингибирования роста тест-культур штаммом- 0560, мм Тест-культуры Радиус зоны подавления роста тест-культуры на 5 сут. 22-24 25-30 22-24 Значения величин зон ингибирования роста тесткультур превышали 20 мм, что свидетельствовало о высокой чувствительности данных тест-культур к исследуемому антагонисту. Таблица 2 Показатель ингибирования фитопатогенов штаммом- 0560,Степень нарастания колоний гриба на 5 Внешний вид колоний патогена на 10 сут., балл сут.4 - рост возбудителя угнетен на 75 Мицелий редкий, прижатый к субстрату,патоген угнетен 4 - рост возбудителя угнетен на 75 Мицелий редкий, прижатый к субстрату,патоген угнетен 4 - рост возбудителя угнетен на 75 Мицелий редкий, прижатый к субстрату,патоген угнетен Угнетение роста фитопатогенов,,на 10 сутки (76-95) свидетельствует о наличие антибиотических свойств у гриба- 0560. Ростстимулирующие свойства- 0560 стимулирует произрастание семян лекарственных растений. Прирост стебля и корня на 7 сутки после обработки семян аянии кустарничковой продуктами метаболизма штамма 0560 на 5,15-6,07, полыни гладкой на 6,05-8,12 выше контроля. На 14 сутки инокулирования семян аянии кустарничковой - на 7,32-9,14, полыни гладкой - на 8,18-10,05 выше контроля. Таким образом, приведенные данные позволяют считать, что применение данного штамма, обладающего высокой антагонистической активностью против фитопатогенов, позволит снизить потери продуктивности,а его ростстимулирующие свойства будут способствовать повышению урожайности лекарственных растений. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба.,депонированный в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов МОН РК под номером- 0560, обладающий фунгицидным действием против фитопатогенов лекарственных растений.