Штамм микромицета Beauveria bassiana ( Balsamo ) Vuillemin Б-3 для производства энтомопатогенного препарата

(51) 12 1/20 (2006.01) 01 63/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ был получен методом выделения из погибших личинок азиатской перелетной саранчи. ШтаммБ-3 обладает инсектицидной активностью по отношению к фитофагам и может быть использован для производства грибного энтомопатогенного препарата для защиты растений от вредителей. Выделенный штамм депонирован в коллекции непатогенных культур микроорганизмов ТОО КАЗНИИППП под номером В-373. Обладает повышенной продуктивностью по сравнению с известным штаммом в условиях глубинного режима ферментации - (3,4 - 5,4)108 спор/мл. При выращивании на твердом субстрате (пшено) его продуктивность составляет (1,120,32)109 спор/г. Биологическая активность культуральной жидкости штамма при полевых испытаниях в отношении личинок вредных саранчовых(72) Тен Олег Андреевич Балпанов Дархан Серикович Чарыкова Ирина Владимировна Некрасова Нина Ивановна(54) ШТАММ МИКРОМИЦЕТАБ-3 ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству средств защиты растений от вредных насекомых, и касается нового штамма гриба для производства энтопатогенного препарата. Сущность изобретения штаммБ-3 Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству средств защиты растений от вредных насекомых, и касается нового штамма гриба для производства энтопатогенного препарата. Эффективная защита растений является необходимым условием обеспечения продовольственной и экологической безопасности Республики Казахстан. Потенциальные потери урожая от вредных организмов в настоящее время достигают 28-35. Особо опасные вредные организмы способны причинить громадный ущерб сельскому хозяйству. Саранчовые, в особенности стадные, являются одной из наиболее вредоносных групп многоядных вредителей сельскохозяйственных культур. В настоящее время в странах СНГ для борьбы с ними используются только химические инсектициды. Однако известно, что масштабное применение пестицидов имеет ряд существенных недостатков,важнейшими из которых являются возникновение резистентных популяций вредителей и загрязнение окружающей среды. В связи с этим возникает необходимость поиска альтернативных экологически безопасных методов защиты растений. Одним из таких способов подавления вредных фитофагов является микробиологический метод защиты. Особую актуальность использование биологических приемов снижения численности саранчовых приобретает для водоохранных зон и заповедных территорий,где использование химических пестицидов законодательно полностью запрещено Лачининский А.В., Сергеев М.Г.,Чильдебаев М.К., Черняховский М.Е. и др. Саранчовые Казахстана,Средней Азии и сопредельных территорий // Международная ассоциация прикладной акридалогии и университет Вайоминга, Ларами - 2002. с.403. Среди всего разнообразия энтомопатогенных микроорганизмов одной из наиболее перспективных групп, с точки зрения снижения численности саранчовых являются грибы из анаморфных родови . Известны различные препараты на основе энтомопатогенного гриба, используемые для эффективной защиты различных сельскохозяйственных культур от вредителей Король И.Т. Микробиологическая защита растений / И.Т.Король. - Москва Колос,1993. с.77. Известный штамм гриба вида(А.с.1688820) предназначен для поверхностного культивирования, которое менее технологично, чем глубинное культивирование Патент 2103873,МПК А 01 63/00, С 12 1/14 // Бюл. 4. - 10.02.98. Целью изобретения является получение штамма энтомопатогенного гриба,обладающего повышенной продуктивностью жизнеспособных конидий и способного продуцировать при глубинном режиме ферментации. Штамм получен в результате направленной изменчивости продуктивности наиболее активной культуры природного штамма микромицетаБ-3. Штамм выделен из 2 природных источников собранных в местах массовой гибели азиатской перелетной саранчи. в Костанайской области,Республика Казахстан. ШтаммБ-3 депонирован в коллекции культур микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский институт перерабатывающей и пищевой промышленности в г. Алматы под номером В-373. ШтаммБ-3 характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками При выращивании на твердой агаровой среде сусло (13) при температуре (271)С в течение 10 суток образует колонии округлой формы,непрозрачные,конидиальный слой меловой консистенции белого цвета, пигмент не образует. Морфологические признаки штамма При культивировании на жидкой питательной среде гифы разветвлены,сегментированы,высыпание конидий на 3-4 сутки при температуре(271)С (80-90), шаровидные или яйцевидные конидии размером 2-31,7-2,5 мкм, и с конидофорами, образующими плотные пучки. Гриб растет при температуре в диапазоне (12-34)С,оптимальная температура роста(271)С,водородный показательв диапазоне 5,0-7,0,оптимальныйдля роста культуры 5,0-5,6. Физиологические признаки Отношение к источникам углерода В качестве источника азота используют пептон,казеин, мясной бульон, дрожжи и их гидролизаты,нитриты, кукурузный экстракт. Отношение к источникам углерода Усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу,фруктозу, крахмал. Крахмал гидролизует. По отношению к кислороду - гриб аэроб. Фаги не выявлены. Продуктивность штамма на твердых субстратах(пшено) до 1,2109 конидий/г субстрата, на жидких питательных средах до 7,8108 конидий / мл. Штамм хорошо хранится на сусло-агаре при температуре плюс (4 - 6)С или в колбах на пшене при комнатной температуре в течение 1,5- 2 лет. Суть предлагаемого изобретения иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. В жидкую питательную среду ФВМ следующего состава,солодовый экстракт - 2,5 соевая мука - 1,0 калий йодистый - 0.03 цинк сернокислый - 0.02 вода водопроводная до 100,5,6 - 6,2 вносят не менее 1,0 оживленного с пшена посевного материала и ведут ферментацию при перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4-0,8 л/л среды в минуту при температуре 26-28 С. Оптимальная продолжительность культивирования штаммаБ-3 на данной среде 58-65 часов до образования конидий (начало лизиса мицелия). Результаты культивирования штаммапродуцентаБ-3 на питательной среде ФВМ, средние значения Таблица 1 Продуктивность штаммаБ-3 в динамике роста при глубинном культивировании на питательной среде ФВМ Время роста, ч 32 40 48 58 65 Применение жидкой ферментационной питательной среды ФВМ позволило получить в глубинных условиях повышенное количество конидиоспор и это объясняется тем, что на богатой углеводной среде на начальных этапах культивирования культура гриба Б-3 интенсивно накапливает мицелиальную массу, а затем переходит на спорообразование. Продуктивность биомассы по титру спор - (4.740,3)108. В процессе культивирования шло стабильное накопление сырой биомассы и к концу ферментации достигло 111,4 г на литр культуральной жидкости (фиг.1). Фиг.1 - Диаграмма выхода биомассы штаммаБ-3 при глубинном культивировании на питательной среде ФВМ в динамике роста Пример 2. В жидкую питательную среду Д -2 следующего состава,меласса - 2,0 кукурузный экстракт - 0,2 калий фосфорнокислый 2-ву замещенный - 0,2 магний сернокислый - 0,1 кальций хлористый - 0,05 вода водопроводная до 100, 5,6-6,2 вносят не менее 1,0 - 2,0 оживленного с пшена посевного материала и ведут ферментацию при перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,40,8 л/л среды в минуту при температуре (271)С, в течение 60-68 часов до образования конидий и спор(начало лизиса). Титр спор (2,850,26)108 спор/мл. Пример 3. В жидкую питательную среду Д-4 следующего состава,дрожжевой экстракт - 0,2 пептон - 1,0 глюкоза - 2,0 вода водопроводная до 100,5,8-6,2 вносят не менее 1,0 оживленного с пшена посевного материала и ведут ферментацию при перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4- 0,8 л/л среды в минуту при температуре 26-28 С, в течение 60-65 часов до образования конидий и спор(начало лизиса). Титр спор (3,40,16)108 спор/мл. Пример 4. В жидкую питательную среду К ДПС следующего состава,дрожжи кормовые - 2,0 крахмал картофельный - 1,0 натрий хлористый - 0,2 магний хлористый -0,01 кальций хлористый - 0,05 вода водопроводная до 100 , 5,6-6,2 вносят не менее 1,0 оживленного с пшена посевного материала и ведут ферментацию при перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,40,8 л/л среды в минуту при температуре 26-28 С, в течение 58-65 часов до образования конидий и спор(начало лизиса). Титр спор (3,850,18)108 спор/мл. Препарат на основе стабилизированной культуральной жидкости штамма Б-3 прошел полевые испытания по оценке биологической и хозяйственной эффективности на базе АО Казахский Агротехнический университет им. Сейфулина на сельскохозяйственном предприятии Баянбай, ТОО Есиль Агро, Бурабайского района, Акмолинской области. Испытания проводились против личинок вредных саранчовых 1-3 возраста белополосая кобылка, крестовая кобылка и итальянский прус. Результаты эксперимента представлены в таблице 2. Таблица 2 Влияние обработки препаратами на численность личинок саранчовых, ТОО Есиль Агро, 2013 г. Варианты На день учета 7 14 2,5 2,4 Снижение численности (по модифицированной формуле Аббота) На день учета 7 55,8 Установлено, что после обработки почвы культуральной жидкостью шт. Б-3 произошло снижение численности личинок саранчовых, биологическая эффективность препарата на 14 день, в дозе расхода 5-10 л/га, после обработки составила (58,0 - 65,7) и находится на одном уровне с эталоном (химический препарат Имидор, 20, в.к., норма расхода 0,05). Наибольшую эффективность обеспечили варианты с расходом 10 л/га, что на 7,7 - 7,9 выше,чем при норме расхода 5 л/га. На день учета 7 14 2,8 3,0 2,3 2,3 2,8 2,9 3,1 2,8 2,7 2,9 2,3 2,1 2,2 2,3 8 8 7 8 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ ШтаммБ 3, депонирован в ТОО Казахский научноисследовательский институт перерабатывающей и пищевой промышленности под номером В-373,используемый для получения энтомопатогенных препаратов.