Штамм гриба Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin BCu 9-06, для получения биопрепарата против колорадского жука

(51) 12 1/20 (2010.01) 01 63/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ КОЛОРАДСКОГО ЖУКА(57) Предложенный штамм - выделен из трупа имаго жука долгоносика(,),найденного в предгорьях Заилийского Алатау летом 2006 г. Обладает высокой биологической активностью в отношении личинок колорадского жука. Смертность личинок жука в вариантах с прототипом (штамм гриба В-21) составила на первые сутки - 10, на третьи - 20, на пятые - 45 и на седьмые - 55. При испытании предлагаемого штамма ВС 9-06 эти показатели были 12, 32 и 100 соответственно. Гибель жука в контроле (обработка водой) на 7 сутки была 4. Штамм ВС 9-06 проявил также более высокую скорость роста на среде Чапека по сравнению с прототипом.(72) Сагитов Абай ОразулыЛеднев Георгий РэмовичДуйсембеков Бахытжан Алишерович Лукина Анастасия ВикторовнаСлямова Назира ДусупкановнаСмагулова Шолпан Берекболовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений 23765 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты от жесткокрылых и представляет собой штамм гриба для получения вышеуказанного средства. Экспериментальные препаративные формы препарата В.производятся в США (под названием биотрол), во Франции (колеопе), в Чехии(боверол, боверосил) и в бывшем СССР (боверин зерновой). Среди коммерческих микоинсектицидных препаратов следует упомянуть,--,-,,-,2561,-201,-1200 (// ././. ). Недостатком указанных препаратов в условиях Казахстана является несовпадение оптимума развития штаммов с климатическими условиями Республики. Известен штамм грибаВ-21(Гештовт Н.Ю. Энтомопатогенные грибы. Биотехнологические аспекты. - Алматы, 2002, с. 123-124). Основным недостатком указанного штамма является проявление им активности при умеренных температурах (20-25) и высокой влажности (более 80), что существенно снижает эффективность использования препарата в условиях континентального Казахстана. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в условиях Казахстана в отношении насекомыхлистоедов, в частности, колорадского жука. Колорадский картофельный жук относится к особо опасным видам для картофеля и в меньшей степени - для томатов. Питается также сорняками из семейства пасленовых. Повреждает листья, реже черешки,стебли и цветки. На листах выедает дыры, иногда объедает их полностью. Взрослые жуки буроватожелтые с черными пятнами на переднеспинке и десятью черными продольными полосками на надкрыльях,длиной 7-16 мм. После дополнительного питания на картофеле в июнеиюле самки откладывают на нижнюю сторону листьев по 25-30 ярко-оранжевых яиц. Средняя плодовитость самки до 500 яиц. При температуре воздуха 15-18 эмбриональное развитие продолжается пять-семь дней, стадия личинки около 30 дней. Взрослые личинки горбатые, с грудными ногами, оранжево-красные, длиной до 15 мм. Голова, переднегрудь и два ряда бородавок по бокам тела у них - черные. Окукливаются личинки в почве, на глубине 10-12 см. Молодые жуки появляются через две-три недели. Зимуют жуки на глубине 20-30 см, преимущественно в рыхлых сухих почвах. Весной, когда температура почвы постигает 14-15, они выползают на поверхность и приступают к питанию. Взрослые жуки могут жить 12-14 месяцев. В теплые солнечные дни способны перелетать на расстояние до 10 км. В Прибалтике и Белоруссии преимущественно имеют одно поколение в год. В качестве мер борьбы необходимо строгое соблюдение карантинных правил и опрыскивание инсектицидами в период вегетации. Географическое распространение космополит. Объект, из которого выделен штамм - Выделен из трупа имаго жука долгоносика (, ). Где собран предгорья Заилийского Алатау,ущелье реки Чапай. Когда собран июль 2006. Кем собран Леднев Г.Р., ВИЗР Кем выделен Лукина А.В., Смагулова Ш.Б.,Леднев Г.Р. На какую среду выделен агаризованная среда Чапека следующего состава ( г/л )3 -2,0 КН 2 РО 4 -1,0 КС -0,5 47 2 О -0,5 47 2 -0,01 сахароза-30 г 18 г агар-агара,дистиллированная вода -1000 мл. Для устранения развития посторонней грибной и бактериальной микрофлоры в данную среду дополнительно вносилось 0,04 г молочной кислоты, которая снижала рН до 5,5-6. Микроморфология Штамм ВС 9 -06 относится к виду. Гифы септированные,бесцветные. Конидиеносцы расположены вдоль гиф единолично или парами друг против друга, собраны рыхлые мутовки. Конидии шаровидные 2,0-3,0 х 1,9-2,8 мкм. На вершине бутылевидного конидиеносца расположен характерный зигзагообразный вырост. Фиалиды прямые, короткие. Макроморфология на плотных питательных средах На агаризованной среде Чапека (состав указан выше) Колонии на агаризованной среде Чапека округлые,ватообразные,слегка приподнятые, белого цвета, толщиной 1,5-6 мкм,диаметром 28-31 мм на 10-е сутки культивирования. Агар не окрашивают. Мицелий окраска колонии ровные в центре светло бежевого цвета, рыхлые войлочные, пигмент светло оранжего цвета,мучнистые. Рельеф - сильновыпуклый, имеются капли конденсата на поверхности. Пигментация питательной среды - светло-коричневого цвета,темнее к центру (Фиг. 1). На рыбном агаре (состав, (г/л) рыбный экстракт- 3, пептон - 5, вода водопроводная - 1000 мл, агарагар - 15. Округлые колонии светло-бежевого цвета,мучнистые (Фиг. 2). Рельеф - слабовыпуклый. Пигментация питательной среды - светлокоричневого цвета, выражена сильнее к центру колонии. Колонии на среде Сабуро белого цвета, позднее слегка желтеют, агар не окрашивают, пушистые,синнем не образуют. Состав среды Сабуро (г/л) глюкоза - 10, пептон - 10, мальтоза -10, дрожжевой экстракт 0,5, агар-агар-20, вода водопроводная 1000 мл. Биологическая активность на тест-объектах Оценивалась на личинках колорадского жука 4-5 возрастов, активность высокая (таблица 1). Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность). Принадлежит к 3-му классу опасности для теплокровных животных. Рекомендации по поддержанию роста и хранению культуры 2 23765 Хранение на скошенной агаризованной среде,при температуре 4 С. Пересев два раза в год. Используется модифицированная среда Сабуро. Таблица 1 Биологическая активность грибав отношении личинок старших возрастов колорадского жука (титр 510 7 ) Штамм Как видно из таблицы 1, смертность личинок колорадского жука в контроле была на 3-7 сутки 1015, по прототипу (штамм В-21) составляла на первые сутки 10, на третьи - 20, на пятые - 45 и на седьмые - 55. При испытании предлагаемого штамма ВС 9-06 эти показатели были 12, 32 и 100 соответственно. Таблица 2 Динамика прироста колоний грибана среде Чапека Штамм В-21 Из результатов эксперимента по динамике прироста колоний (таблица 2) видно, что на агаризованной среде Чапека предлагаемый штамм ВС 9-06 проявляет более высокую скорость роста(на 77,7- 84,7), чем стандартный штамм В-21. Как видно из приведенных таблиц,предлагаемый штамм грибаобеспечивает 100-ную гибель личинок колорадского жука на седьмые сутки эксперимента против 55 в опыте с контрольным штаммом (по прототипу). Предлагаемый штамм проявил также более быстрый прирост диаметра колоний на среде Чапека по сравнению со стандартным. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба9-06, депонированный в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов НЦБ РК КН МОН РК, под регистрационным номером-0247, для получения биопрепарата против колорадского жука. Фиг. 1 Колонии штамма ВС 9-06 на среде Чапека Фиг. 2 - Колонии штамма ВС 9-06 на среде Рыбном агаре