Штамм гриба Trichoderma viride ИМиВ F-1, обладающий комплексным действием против стеблевых , галловых нематод, колорадского жука и фитопатогенов

(51)7 12 1/14, 01 63/04 // (12 1/14, 12 1885) ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Бекмаханова Надия Ермухановна Шемшура Ольга Николаевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Институт микробиологии и вирусологии Министерства науки и высшего образования Республики Казахстан(54) ШТАММ ГРИБАИМИВ -1, ОБЛАДАЮЩИЙ КОМПЛЕКСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ ПРОТИВ СТЕБЛЕВЫХ, ГАЛЛОВЫХ НЕМАТОД, КОЛОРАДСКОГО ЖУКА И ФИТОПАТОГЕНОВ(57) Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано в защите растений от болезней и вредителей. Штамм грибаИМиВ -1, обладающий комплексным действием вызывать гибель стеблевых, галловых нематод, личинок колорадского жука и возбудителей болезней растений. 10330 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано в защите растений от болезней и вредителей. Известен штаммЦП-294 для получения триходермина против корневых гнилей, галловых и стеблевых нематод (а. с. СССР 1626482, А-1, С 12 1/14, 1989). Однако этот штамм не обладает инсектицидными свойствами в отношении колорадского жука. Задачей изобретения является получение нового штамма гриба комплексного действия на фитопаразитические нематоды, колорадского жука и возбудителей болезней сельскохозяйственных растений. Штамм выделен из ризосферной почвы сахарной свеклы Талды-Курганской области Республики Казахстан. Изолирование штамма проводилось путем высева почвенных суспензий на агаровую питательную среду Чапека для грибов. Штамм идентифицирован по определителю М.А. Литвинова и Г.Ш. Сейкетова(1982). Штамм хранится на косяках на средах суслоагар и Чапека-агар для грибов. Температура хранения на косяках - 4 С. Состав среды Чапека для грибов, г/л сахароза - 20,0 3 - 1,0 КН 2 РО 4 1,0 О 472 - 0,5- 0,5 вода водопроводная - 1 л. В доступной нам патентной и научнотехнической литературе нет сведений об инсектицидных свойствах грибов родав отношении личинок колорадского жука. Штамм депонирован в музее Института микробиологии и вирусологии МНиВО РК, коллекционный номер ИМиВ -1. Копия свидетельства о депонировании прилагается. Характеристика штамма ШтаммИМиВ -1 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками. Агаризованная среда Чапека, рН 5,5-6,7, субстратный мицелий волокнистый водянистого цвета,сильно разветвленный. За двое суток инкубации средний радиус колонии гриба достигает 2,5-3 см. На вторые-третьи сутки от субстратного мицелия поднимается воздушный мицелий беловато-серого цвета. На третьи сутки наступает конидиеобразование. Конидии образуются по всей поверхности газона. Цвет газона вначале светло-зеленый, затем темно-зеленый. Обратная сторона бесцветная. Сусло-агар, рН 5,5-6,7. Мицелий радиально расходящийся от центра, пушистый. Конидии белые, расположены густым ровным газоном. На 4-5 сутки роста становятся темно-зелеными. Гриб образует интеркалярные шаровидные хламидоспоры. Обратная сторона колонии кремовая, издает специфический грибной запах. Конидиеносцы в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицелия. Тип ветвления дихотомический, на концах ветвей расположены стеригмы, на одной ветви их не более трех. Форма стеригм подобна искривленным кеглям длиной 7-12 мк, диаметром 2-5 мк. На вершинах стеригм расположены конидиальные головки, состоящие из скопления 2 конидиеспор. Конидиеспоры шарообразные, размером около 70 мк. рН минимальный - 4,5 оптимальный - 5,5-6,5 максимальный - 7,5. Температура скорости роста мицелия минимальная - 15-20 С оптимальная - 26-28 С, максимальная - 27-30 С. Физиолого-биохимические свойства Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу удовлетворительно - мальтозу, арабинозу, маннит,крахмал, глицерин плохо - лимоннокислый кальций, уксуснокислый натрий, глюконовокислый кальций. Отношение к источникам азота. Хорошо усваивает казеин, азотнокислый калий,азотнокислый натрий, пролин удовлетворительно пептон, глицин плохо - сернокислый аммоний, мочевину. Крахмал гидролизует, рост на клетчатке средний, желатин разжижает, молоко пептонизирует с зоной просветления. Нитраты в нитриты восстанавливает. ШтаммИМиВ -1 маркерных признаков не имеет. Зрелая культура на агаровых косяках хранится в холодильнике при 4 С с периодическими пересевами 3-4 раза в течение года. Антагонистические свойства Подавляет рост,,,. Гиперпаразитические свойства проявляет по отношению к,, ,,,,, . Ростстимулирующие свойства. Стимулирует рост проростков пшеницы, огурцов, томатов, сои, сахарной свеклы, кукурузы, перца. Прирост стебля и корня после обработки семян сельскохозяйственных растений продуктами метаболизма штаммаИМиВ -1 на 17-20 выше контроля. Пример 1. Для изучения нематоцидных свойств грибаИМиВ -1 в опытах используют личинки стеблевых нематод земляникии картофеля, галловых нематод огурцов и томатов. Опыты проведены в лабораторных условиях на часовых стеклах. Для выделения стеблевых нематод берут пораженные стебли земляники, препаровальной иглой или скальпелем распарывают ткани, а в случае с картофелем - гладкий участок кожицы от сиреневого до свинцово-серого цвета, т. е. места наибольшего сосредоточения нематод, и опускают в воду в чашке Петри. Все жизнеспособные особи выходят в воду и опускаются на дно. 10330 Галловые нематоды выделяют из галлов больных растений теплицы в виде яйцевых мешков, которые помещают в чашки Петри на голодный агар и поддерживают в термостате при 28 С в течение 21 суток. Нематофаговую активность штаммаИМиВ -1 и известного штаммаЦМПМ 294 определяют путем использования их культуральной жидкости. Культуральную жидкость получают путем глубинного выращивания штаммов на среде Аркамона в течение 5-ти суток при 28 С. Состав среды Аркамона (г/л) сахароза 10,0, маннит - 20,0, янтарная кислота - 5,4, 2 О 4 1,0, О 4 - 0,5, О 4 - 0,02, СаСО 3 - 2,0,0,5, вода водопроводная - 1 л. рН 5,2 достигается введением 25 Н 4. В часовые стекла с культуральной жидкостью разной концентрации (10, 5, 2, 1 мл/мл среды) помещают по 40-50 экземпляров самых активных личинок нематод. Контролем служат варианты с водопроводной водой и средой без штамма. Учет смертности нематод проводят в течение 5-ти суток путем микроскопирования. Опыт проводят в семи повторностях. Из результатов учета по соотношению количества оставшихся в живых нематод в опыте к контролю устанавливают нематоцидную активность гриба. Сравнительные данные нематоцидной активности штаммаИМиВ -1 и известного штаммаЦМПМ 294 к стеблевым и галловым нематодам представлены в табл. 1-3. Данные табл. 1-3 показывают, что штаммИМиВ -1 на 10 эффективнее в отношении стеблевых нематод и на 20 эффективнее в отношении галловых нематод, чем штаммпрототипЦМПМ 294. Пример 2. Для изучения инсектицидных свойств штаммаИМиВ -1 в опытах используют личинки колорадского жука - возраста. Опыты проводят в лабораторных условиях на чашках Петри. Личинки - возраста помещают в чашки Петри по 20 личинок на чашку. Для проверки действия штамма проводят его глубинное культивирование в течение 5-ти суток при 28 С на соевой среде на качалке. Состав соевой среды (г/л) соя - 25,0, глюкоза 30,0, (2)О 4 - 5,0,- 2,5, СаСО 3 - 5,0, вода водопроводная - 1 л, рН - 6,5-6,7. Культуральной жидкостью опрыскивают листья картофеля, которые помещают в чашки Петри для скармливания личинкам, и сами личинки. Расход культуральной жидкости 1 мл на одну чашку. Контролем служат варианты опыта без обработки, обработка водой, обработка средой. Личинкивозраста помещают в чашки Петри по 20 личинок на чашку. В каждую личинку инъекцией в дорзальную поверхность вводят 0,01 мл культуральной жидкости штамма. Листья картофеля не обрабатываются. В контрольных вариантах проводят инъекцию 0,01 мл воды и среды. Учет смертности личинок проводят в течение 5 ти суток. Данные об инсектицидной активности предлагаемого штамма гриба представлены в табл. 4 и 5. Как видно из табл. 4 и 5, обработка листьев и личинок колорадского жука - возраста, а также инъекция в дорзальную поверхность личиноквозраста культуральной жидкостью штаммаИМиВ -1 вызывает гибель насекомых на 5-е сутки на 57 и 90 соответственно. Действие типового штаммаЦМПМ 294 фактически остается на уровне контроля (среды). Пример 3. Антагонистические свойства предлагаемого штамма в отношении фитопатогенов, возбудителей болезней сельскохозяйственных культур,определяют методом блоков (Егоров, 1982) и методом встречных культур по Компарота (,1985). Данные по антагонистической активности штаммаИМиВ -1 и известного представлены в табл. 6. Таким образом, приведенные данные позволяют считать, что применение данного штамма, обладающего одновременной способностью контролировать численность таких вредных агентов, как нематоды, колорадский жук и фитопатогены,позволит снизить потери урожая, вызываемые их жизнедеятельностью, а его ростстимулирующие свойства будут способствовать повышению продуктивности сельскохозяйственных культур. 10330 Таблица 1 Действие культуральной жидкости грибаИМиВ -1 на стеблевые нематодыВарианты опыта 1 сутки ИМиВ -1 Концентрация культуральной жидкости, мл/мл среды 10 5 2 1 ЦМПМ 294 Концентрация культуральной жидкости, мл/мл среды 10 5 2 1 Контроль вода Контроль среда Таблица 2 Действие культуральной жидкости грибаИМиВ -1 на стеблевые нематодыВарианты опыта 1 сутки ИМиВ -1 Концентрация культуральной жидкости, мл/мл среды 10 5 2 1 ЦМПМ 294 Концентрация культуральной жидкости, мл/мл среды 10 5 2 1 Контроль вода Контроль среда Таблица 3 Действие культуральной жидкости грибаИМиВ -1 на галловые нематодыВарианты опыта 1 сутки ИМиВ -1 Концентрация культуральной жидкости, мл/мл среды 10 5 2 1 ЦМПМ 294 Концентрация культуральной жидкости, мл/мл среды 10 5 2 1 Контроль вода Контроль среда 10330 Таблица 4 Эффективность культуральной жидкости грибаИМиВ -1 против личинок колорадского жука - возраста Варианты опыта 1 сутки 10 0 0 0 0 ИМиВ -1 ЦМПМ 294 Контроль без обработки Контроль вода Контроль среда Таблица 5 Эффективность культуральной жидкости грибаИМиВ -1 против личинок колорадского жукавозраста Варианты опыта 1 сутки 25 0 0 0 0 ИМиВ -1 ЦМПМ 294 Контроль без обработки Контроль вода Контроль среда Таблица 6 Антагонистическая активность грибаИМиВ -1 в отношении фитопатогенных тест-микробов Тест-микробы Штамм грибаИМиВ -1, обладающий комплексным действием против стебле Верстка Е.И. Алещенко,корректор А.Б. Вышкварко 5