Штамм гриба Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin ВНу4-06, для получения биопрепарата против тополевого листоеда

(51) 12 1/20 (2010.01) 01 63/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Предложенный штамм выделен из трупа имаго клопа-щитника(,),найденного в предгорьях Заилийского Алатау летом 2006 г. Обладает высокой биологической активностью в отношении личинок тополевого листоеда. Смертность личинок жука в вариантах с прототипом(штамм гриба В-21) составила на первые сутки 10, на третьи - 20, на пятые - 45 и на седьмые 55. При испытании предлагаемого штамма ВНу 406 эти показатели были 15, 25, 87,5 и 100 соответственно. Гибель тополевого листоеда в контроле (обработка водой) на 1-7 сутки была 1015. Штамм ВНу 4-06 проявил также более высокую скорость роста на среде Чапека по сравнению с прототипом.(72) Сагитов Абай ОразулыЛеднев Георгий РэмовичДуйсембеков Бахытжан Алишерович Лукина Анастасия ВикторовнаСлямова Назира ДусупкановнаСмагулова Шолпан БерекболовнаУтепов Дархан Кенесович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений ВНу 4-06,ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ТОПОЛЕВОГО ЛИСТОЕДА 23766 Изобретение относится к сельскохозяйственной и лесной микробиологии, в частности, к получению средств защиты от чешуекрылых и представляет собой штамм гриба для получения вышеуказанного средства. Экспериментальные препаративные формы препарата В.производятся в США (под названием биотрол), во Франции (колеопе), в Чехии(боверол, боверосил) и в бывшем СССР (боверин зерновой). Среди коммерческих микоинсектицидных препаратов следует упомянуть,,-,,- , -2561,-201,-1200(///.). Недостатком указанных препаратов в условиях Казахстана является несовпадение оптимума развития штаммов с климатическими условиями Республики. Известен штамм грибаВ-21(Гештовт Н.Ю. Энтомопатогенные грибы. Биотехнологические аспекты. - Алматы, 2002, с. 123-124). Основным недостатком указанного штамма является проявление им активности при умеренных температурах (20-25) и высокой влажности (более 80), что существенно снижает эффективность использования препарата в условиях континентального Казахстана. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в условиях Казахстана в отношении насекомыхлистоедов лесных насаждений, в частности,тополевого листоеда. Тополевый листоед) повреждает листья разных видов тополя, ивы и осины,прогрызая их насквозь,особенно повреждают молодую поросль. Взрослые жуки,длиной 10-12 мм, имеет равномерно выпуклое тело. Надкрылья от кирпично-красных до желтокоричневых с черным ногтеподобным окончанием у шва. Покрыты мелкими точками. Личинки от серобелой до нежно-зеленоватой с черными блестящими пятнышками, черным щитком и темными бородавками. Жуки зимуют в земле под листьями. В природе появляются ранней весной, в зависимости от местонахождения в ареале, с марта (в южных областях), чаще всего, когда распускаются листья. На листьях живут и спариваются. Оплодотворенные самки откладывают яйца на нижнюю сторону листьев кучками по 20-30 штук, в целом всегда по нескольку сотен яичек от одной самки. Примерно через 1-2 недели отрождаются личинки, которые слегка объедают листья, а позже их скелетируют. Через 3 недели личинки, подвешенные на листьях,окукливаются. Период куколки длится около 10 дней. Молодые жуки листья перфорируют и закладывают вторую генерацию, которая в среднеевропейских условиях заканчивает развитие в сентябре. В особенно благоприятных условиях, а в южных районах нормально, существует и третья генерация в году, в Закавказье даже и четвертое поколение. Географическое распространение Кавказ,Казахстан, Узбекистан, Сибирь, Приморье, Украина, Крым, Западная Европа, Китай, Корея, Япония,Индия. Объект, из которого выделен штамм - Выделен из трупа имаго клопа-щитника(,) Где собран предгорья Заилийского Алатау,ущелье реки Чапай. Когда собран июль 2006. Кем собран Леднев Г.Р., ВИЗР Кем выделен Лукина А.В., Смагулова Ш.Б.,Леднев Г.Р. На какую среду выделен агаризованная среда Чапека следующего состава (г/л) 3-2 , 0 КН 2 РО 4- 1 , 0 КС 1- 0 , 5472 О- 0 , 5472 О-0,01 сахароза - 30 г 18 г агар-агара,дистиллированная вода - 1000 мл. Для устранения развития посторонней грибной и бактериальной микрофлоры в данную среду дополнительно вносилось 0,04 г молочной кислоты, которая снижала рН до 5,5-6. Микроморфология Штамм ВНу 4 -06 относится к виду. Гифы септированные,бесцветные. Конидиеносцы расположены вдоль гиф единолично или парами друг против друга, собраны рыхлые мутовки. Конидии шаровидные 2,0-2,81,9-2,5 мкм. На вершине бутылевидного конидиеносца расположен характерный зигзагообразный вырост. Фиалиды прямые, короткие. Макроморфология на плотных питательных средах На агаризованной среде Чапека (состав указан выше) Колонии на агаризованной среде Чапека округлые,ватообразные,слегка приподнятые, белого цвета, толщиной 1,5-6 мкм,диаметром 15-19 мм на 10-е сутки культивирования. Агар не окрашивают. Рельеф - сильновыпуклый,имеются капли конденсата на поверхности. Пигментация питательной среды - светлокоричневого цвета, темнее к центру. На рыбном агаре (состав, г/л) рыбный экстракт 3, пептон - 5, вода водопроводная - 1000 мл, агарагар - 15) Округлые колонии светло-бежевого цвета,мучнистые (Фото 1). Рельеф - слабовыпуклый. Пигментация питательной среды - светлокоричневого цвета, выражена сильнее к центру колонии. Колонии на среде Сабуро белого цвета, позднее слегка желтеют, агар не окрашивают, пушистые,синнем не образуют. Состав среды Сабуро (г/л) глюкоза - 40, пептон - 10, агар-агар - 18, вода водопроводная - 1000 мл. Биологическая активность на тест-объектах Оценивалась на гусеницах тополевого листоеда 3-4 возрастов, активность высокая (табл. 1) Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность) Принадлежит к 3-му классу опасности для теплокровных животных. Рекомендации по поддержанию роста и хранению культуры. Хранение на скошенной агаризованной среде,при температуре 4 С. Пересев два раза в год. Используется модифицированная среда Сабуро. 2 Таблица 1 Биологическая активность штаммов грибав отношении гусениц тополевого листоеда. Смертность , сутки Как видно из таблицы 1, смертность личинок колорадского жука в контроле была на 1-7 сутки 1015, по прототипу (штамм В-21) составляла на первые сутки 13, на третьи - 21, на пятые - 52 и на седьмые - 58. При испытании предлагаемого штамма ВНу 4-06 эти показатели были 15, 25,87,5 и 100 соответственно. Таблица 2 Динамика прироста колоний грибана среде Чапека Диаметр колоний, мм (сутки) Из результатов эксперимента по динамике прироста колоний (таблица 2) видно, что на агаризованной среде Чапека предлагаемый штамм ВНу 4-06 проявляет более высокую скорость роста(на 23,0- 59,8), чем стандартный штамм В-21. Как видно из приведенных таблиц, предлагаемый штамм грибаобеспечивает 100 ную гибель личинок тополевого листоеда на седьмые сутки эксперимента против 55 в опыте с контрольным штаммом(по прототипу). Предлагаемый штамм проявил также более быстрый прирост диаметра колоний на среде Чапека по сравнению со стандартным. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм грибаНу 4 06, депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов НЦБ РК КН МОН РК, под номером - 0248, для получения биопрепарата против тополевого листоеда. Фиг. 1 Колонии Ву 4-06 на среде Рыбном агаре