Штамм гриба Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin BC2-06, для получения биопрепарата против яблонной моли

(51) 12 1/20 (2010.01) 01 63/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ЯБЛОННОЙ МОЛИ(57) Предложенный штамм выделен из трупа имаго божьей коровки(,),найденного в предгорьях Заилийского Алатау летом 2006 г. Обладает высокой биологической активностью в отношении гусениц яблонного моля. Смертность гусениц моля в вариантах с прототипом (штамм гриба В-21) составила на первые сутки - 10, на третьи - 20, на пятые - 45 и на седьмые - 55. При испытании предлагаемого штамма ВС 2-06 эти показатели были 45-62,5- 85 и 100 соответственно. Гибель гусениц в контроле (обработка водой) на 311 сутки была 2,2-5. Штамм ВС 2-06 проявил также более высокую скорость роста на среде Чапека по сравнению с прототипом.(72) Сагитов Абай ОразулыЛеднев Георгий РэмовичДуйсембеков Бахытжан Алишерович Лукина Анастасия ВикторовнаСлямова Назира ДусупкановнаСмагулова Шолпан Берекболовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений 23767 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты от чешуекрыл ых и представляет собой штамм гриба для получения вышеуказанного средства. Экспериментальные препаративные формы препарата В.производятся в США (под названием биотрол), во Франции (колеопе), в Чехии(боверол, боверосил) и в бывшем СССР (боверин зерновой). Среди коммерческих микоинсектицидных препаратов следует упомянуть, ,-, ,-, -2561,-201,-1200(///.). Недостатком указанных препаратов в условиях Казахстана является несовпадение оптимума развития штаммов с климатическими условиями Республики. Известен штамм грибаВ-21(Гештовт Н.Ю. Энтомопатогенные грибы. Биотехнологические аспекты. - Алматы, 2002, с. 123-124). Основным недостатком указанного штамма является проявление им активности при умеренных температурах (20-25) и высокой влажности (более 80), что существенно снижает эффективность использования препарата в условиях континентального Казахстана. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в условиях Казахстана в отношении насекомыхлистоедов, в частности, яблонная горностаевая моль). Морфология и биология. Передние крылья белые с 12-16 черными точками, расположенными тремя неправильными рядами, на вершине крыльев имеются мелкие черные крапинки (размах крыльев 16-22 мм). Внешне похожа на имаго плодовой моли. . Яйцо желтоватое, сплюснутое,удлиненно-овальное. Гусеницы - возрастов светло-желтые с темными головой, переднегрудным щитком и грудными ногами гусеницывозраста желтые длина гусеницы последнего возраста 13-16 мм. Куколка вначале оранжево-желтая, позже зеленовато-желтая, голова темно-бурая. Коконы белые, плотные. Плодовитость бабочки - до 150 яиц. Самка откладывает яйца группами (по 15-60 шт.) черепицеобразно на ветки кормового растения вблизи почек и покрывает их щитком из застывшей слизи. Вначале щитки красноватой окраски, позднее буреют. Яйца развиваются 8-15 дней. Гусеницы,выйдя из-под щитка, проникают в набухшие почки,затем минируют вершинную часть листочков. После первой линьки (через 10-12 дней) они покидают мины и переходят к открытому образу жизни. Гусеницы плетут паутинные гнезда, скрепляя попарно листья питаясь, обгрызают листовую пластинку или полностью объедают листья до основных жилок. С переходом на соседние ветки образуются колонии шелковинных гнезд,вмещающие до 200-300 гусениц. Длительность личиночной стадии составляет (с зимовкой) от 300 до 320 дней, а период активного развития весной 37-45 дней. Продолжительность развития куколки 815, иногда до 20 дней. Окукливаются в белых плотных, непрозрачных коконах, склеенных в компактные пачки, содержащие от нескольких десятков до нескольких сотен коконов. Зимуют гусеницы 1 возраста под плотным, толстым щитком,в отличие от тонкого щитка плодовой моли. С наступлением мороза впадают в оцепенение. Географическое распространение Обитает в центральной части и на юге Западной Европы. В б. СССР исходный (анцестральный) ареал ограничен европейской частью (на севере до Ленинградской обл.) моль интродуцирована в Закавказье,Казахстан, Среднюю Азию. Объект, из которого выделен штамм - Выделен из трупа имаго божьей коровки (,). Где собран предгорья Заилийского Алатау,ущелье реки Чапай. Когда собран июль 2006. Кем собран Леднев Г.Р., ВИЗР Кем выделен Лукина А.В., Смагулова Ш.Б.,Леднев Г.Р. На какую среду выделен агаризованная среда Чапека следующего состава (г/л) 3 - 2,0 КН 2 РО 4 - 1 , 0 КС 10 , 5472 О - 0,5 472 О - 0,01 сахароза - 30 г 18 г агар-агара,дистиллированная вода - 1000 мл. Для устранения развития посторонней грибной и бактериальной микрофлоры в данную среду дополнительно вносилось 0,04 г молочной кислоты, которая снижала рН до 5,5-6. Микроморфология Штамм ВС 2-06 относится к виду. Мицелий разветвленный,септированный. Конидиеносцы собраны в рыхлые мутовки, иногда расположены вдоль гиф единично или парами друг против друга. На вершине бутылевидного конидиеносца имеется зигзагообразный вырост. Фиал иды прямые, короткие. Конидии шаровидные или короткоовальные 2,0-3,02,1-2,5 мкм. Макроморфология на плотных питательных средах На агаризованной среде Чапека (состав указан выше) Колонии на агаризованной среде Чапека округлые,ватообразные,слегка приподнятые, белого цвета, толщиной 1,5-6 мкм,диаметром 22-28 мм на 10-е сутки культивирования. Агар не окрашивают. Рельеф - сильновыпуклый,имеются капли конденсата на поверхности. Пигментация питательной среды - светлокоричневого цвета, темнее к центру (Фото 1). На рыбном агаре (состав, (г/л) рыбный экстракт- 3, пептон - 5, вода водопроводная - 1000 мл, агарагар - 15) Округлые колонии светло-бежевого цвета, мучнистые). Рельеф - слабовыпуклый. Пигментация питательной среды - светлокоричневого цвета, выражена сильнее к центру колонии (Фото 2). Колонии на среде Сабуро белого цвета, позднее слегка желтеют, агар не окрашивают, пушистые,синнем не образуют. Состав среды Сабуро (г/л) глюкоза - 40, пептон - 10, агар-агар - 18, вода водопроводная - 1000 мл. 2 23767 Биологическая активность на тест-объектах Оценивалась на гусеницах яблонной моли 2-3 возрастов, активность высокая (таблица 1). Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность) Принадлежит к 3-му классу опасности для теплокровных животных. Рекомендации по поддержанию роста и хранению культуры Хранение на скошенной агаризованной среде,при температуре 4 С. Пересев два раза в год. Используется модифицированная среда Сабуро. Таблица 1 Биологическая активность грибав отношении гусениц яблонной моли (титр 1107) Смертность , сутки НСР 27,26 21,54 Как видно из таблицы 1, смертность гусениц и на седьмые - 57. При испытании предлагаемого яблонного моля в контроле была на 1-7 сутки 10- штамма ВС 2-06 эти показатели были 45, 62,5,15, по прототипу (штамм В-21) составляла на 85 и 100 соответственно. первые сутки 11, на третьи - 18, на пятые - 42 Таблица 2 Динамика прироста колоний грибана среде Чапека Диаметр колоний, мм (сутки) ВС 2-06 25,61,45 37,12,68 52,12,68 58,33,0 Из результатов эксперимента по динамике прирост диаметра колоний на среде Чапека по прироста колоний (таблица 2) видно, что на сравнению со стандартным. агаризованной среде Чапека предлагаемый штамм ВС 2-06 проявляет более высокую скорость роста (на ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 25,6- 58,3), чем стандартный штамм В-21. Штамм грибаКак видно из приведенных таблиц,ВС 2-06,предлагаемый штамм грибадепонирован в ДГП обеспечивает 100-ную гибель гусениц яблонного Республиканская коллекция микроорганизмов моля на седьмые сутки эксперимента против 62,5 НЦБ РК КН МОН РК, под номером - 0246,в опыте с контрольным штаммом (по прототипу). для получения биопрепарата против яблонной моли. Предлагаемый штамм проявил также более быстрый