Штамм гриба Paecilomyces farinosus (Holm ex Gray) Brown et Smith РCа -06 для получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых сельскохозяйственных культур

(51) 12 1/20 (2010.01) 01 63/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ НАСЕКОМЫХ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР(57) Предложенный штамм выделен из жужелиц,найденного в предгорьях Заилийского Алатау летом 2006 г. Обладает высокой биологической активностью в отношении гусениц пяденицы. Смертность личинок жука в вариантах с прототипом (штамм гриба В-21) составила на первые сутки - 10, на третьи - 20,на пятые -45 и на седьмые - 55. При испытании предлагаемого штамма Рса-06 эти показатели были 37,5, 52,5, 67,5 и 100 соответственно. Гибель жука в контроле (обработка водой) на 1-7 сутки была 2,5. Штамм Ра-06 проявил также более высокую скорость роста на среде Чапека по сравнению с прототипом.(72) Сагитов Абай ОразулыЛеднев Георгий РэмовичДуйсембеков Бахытжан Алишерович Лукина Анастасия ВикторовнаСлямова Назира ДусупкановнаСмагулова Шолпан Берекболовна Нусипбекова Айнур Абуталиповна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений 23763 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты от чешуекрылых и представляет собой штамм гриба для получения вышеуказанного средства. Экспериментальные препаративные формы препарата В.производятся в США (под названием биотрол), во Франции (колеопе), в Чехии(боверол, боверосил) и в бывшем СССР (боверин зерновой). Среди коммерческих микоинсектицидных препаратов следует упомянуть,--,- , ,-,2561,-201,-1200 ( //.../.). Недостатком указанных препаратов в условиях Казахстана является несовпадение оптимума развития штаммов с климатическими условиями Республики. Известен штамм грибаВ-21(Гештовт Н.Ю. Энтомопатогетнные грибы. Биотехнологические аспекты. - Алматы, 2002, с. 123-124). Основным недостатком указанного штамма является проявление им активности при умеренных температурах (20-25) и высокой влажности (более 80), что существенно снижает эффективность использования препарата в условиях континентального Казахстана. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в условиях Казахстана в отношении насекомыхлистоедов, в частности, садовой пяденицы. Морфология и биология. Передние крылья имаго от охряно-желтой до серо- и темно-коричневой окраски (размах крыльев 15-22 мм). Передний край со слабым изгибом у вершины. Вершинный угол острый. Самцы имеют четкий рисунок темно-бурого цвета прикорневое пятно ромбической формы,косая срединная перевязь, предвершинное и внешнекрайнее пятна слиты. У самок рисунок сильно размыт и едва заметен. Задние крылья коричнево-серые, у самок с ярким оранжево-желтым опылением у вершины крыла. Яйца удлиненноовальные, серо-зеленые. Гусеница 18-20 мм, от светло-зеленой до темно-оливково-зеленой окраски,полупрозрачная. Куколка(10-12 мм) веретсновидная, желтовато-коричневая с более темной спинкой. Она располагается в комках из листьев или в сигарах, свернутых вдоль главной жилки листа. Средняя плодовитость 250 яиц,потенциальная до 430. Самка откладывает яйца в один слой группами (щитками) по 40-100 штук в кладке, в среднем около 60, на гладкой коре нижней части штамбов на высоте 7-27 см или в развилках скелетных сучьев. Поверхность кладок покрыта прозрачным воскоподобным веществом в смеси с чешуйками бабочек. Зимуют яйца. Отродившиеся гусеницы вначале питаются вместе, скелетируя один из листьев, затем расползаются на верхушки побегов. Гусеницы 1-2 возрастов выгрызают почки и бутоны, затем, переходя на цветки, уничтожают тычинки, пестики и лепестки, а также скелетируют молодые листья. Гусеницы старших возрастов повреждают завязи и плоды, выгрызая в мякоти ямки неправильной формы, достигающие иногда семенной камеры или косточки. Продолжительность развития гусениц 25-60 дней. Окукливание происходит в местах питания. В зависимости от температуры стадия куколки длится 8-14 дней. Географическое распространение Обитает в Европе, Сев. Африке, Малой Азии, Ближнем Востоке, Иране, Ираке, Сев. Америке. В б. СССР распространена по всей европейской части, в Закавказье, Ср. Азии (предгорья), Казахстане, на Урале, юге Сибири (локально), на Дальнем Востоке. Завезена на Дальний Восток и в Америку Объект, из которого выделен штамм - сем. Где собран предгорья Заилийского Алатау,ущелье реки Чапай. Когда собран июль 2006. Кем собран Леднев Г.Р., ВИЗР Кем выделен Лукина А.В., Смагулова Ш.Б.,Леднев Г.Р. На какую среду выделен агаризованная среда Чапека следующего состава (г/л) 3. - 2,0 КН 2 РО 4 -1,0 КС 1 -0,5 47 2 О-0,5 47 2 О 0,01 сахароза - 30 г 18 г агар-агара,дистиллированная, вода -1000 мл. Для устранения развития посторонней грибной и бактериальной микрофлоры в данную среду дополнительно вносилось 0,04 г молочной кислоты, которая снижала рН до 5,5-6. Микроморфология Штамм РСа-06 относится к виду. Спорово-мицелиальный налет от белого до жлто-оранжевого цвета. Гифы септированные,бесцветные.Конидиеносцы расположены вдоль гиф единолично или парами друг против друга, собраны рыхлые мутовки. Конидии шаровидные или короткоовальные 2,0-3,0 х 1,7-2,5 мкм. На вершине бутылевидного конидиеносца расположен характерный зигзагообразный вырост. Фиалиды прямые, короткие. Макроморфология на плотных питательных средах Колонии на агаризованной среде Чапека округлые, ватообразные, слегка приподнятые,белого цвета, толщиной 1,5-6 мкм, диаметром 15-19 мм на 10-е сутки культивирования. Агар не окрашивают. На рыбном агаре (состав, (г/л) рыбный экстракт- 3, пептон - 5, вода водопроводная - 1000 мл, агарагар - 15. Округлые колонии светло-бежевого цвета,мучнистые. Рельеф - слабовыпуклый. Пигментация питательной среды - светло-коричневого цвета,выражена сильнее к центру колонии. Колонии на среде Сабуро белого цвета, позднее слегка желтеют, агар не окрашивают, пушистые,синнем не образуют. Состав среды Сабуро (г/л) глюкоза-40, пептон - 10, агар-агар - 18, вода водопроводная- 1 000 мл. Биологическая активность на тест-объектах Оценивалась на гусеницах пядениц 2-3 возрастов, активность высокая (таблица 1). Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность) 2 23763 Принадлежит к 3-му классу опасности для теплокровных животных. Рекомендации по поддержанию роста и хранению культуры Хранение на скошенной агаризованной среде,при температуре 4 С. Пересев два раза в год. Используется модифицированная среда Сабуро. Таблица 1 Биологическая активность гриба Раесоусв отношении гусениц пядениц Штамм Как видно из таблицы 1, смертность гусениц пяденицы в контроле была на 1-7 сутки 10-15, по прототипу (штамм В-21) составляла на первые сутки 12, на третьи - 21, на пятые 43 и на седьмые 58. При испытании предлагаемого штамма РСа -06 эти показатели были 37,5, 52,5, 67,5 и 100 соответственно. Таблица 2 Динамика прироста колоний грибана среде Чапека Диаметр колоний, мм (сутки) РСа-06 24,833,84 35,672,21 51,503,12 58,832,42 Из результатов эксперимента по динамике прирост диаметра колоний на среде Чапека по прироста колоний (таблица 2) видно, что на сравнению со стандартным. агаризованной среде Чапека предлагаемый штамм РСа-06 проявляет более высокую скорость роста (на ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 24,83 - 58,83), чем стандартный штамм В-21. Штамм гриба(Как видно из приведенных таблиц,предлагаемый штамм гриба)-06, депонированный в Республиканская коллекция обеспечивает 100-ную гибель гусениц пяденицы ДГП на седьмые сутки эксперимента против 55 в опыте микроорганизмов НЦБ РК МОН РК, под с контрольным штаммом(по прототипу). регистрационным номером-0252, для Предлагаемый штамм проявил также более быстрый получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых сельскохозяйственных культур.