Штамм bifidobacterium bifidum y-1.используемый для получения биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

(51) 12 1/20 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ пищевой промышленности,регистрационный номер В-343 (от 28.11.12 г.). Штамм активно размножается в питательной среде с накоплением производственной биомассы в течении 18-24 ч с высокой концентрацией бифидобактерий, обладает высокой пробиотической,в частности протеолитической,лизоцимной,каталазной,кислотообразующей,антагонистической активностью в отношении патогенной и условно патогенной микрофлоры, проявляет выраженную антиоксидантную активность. Штамм обладает более высокой жизнеспособностью и колонизирующими свойствами, что обеспечивает получение препаратов и продуктов на его основе с более длительными сроками хранения и более высокими лечебно-профилактическими свойствами. Использование изобретения позволяет получить биологически активные добавки, бактерийные препараты, применение которых обеспечивает нормализацию микробиоценозов организма человека,обеспечивает пробиотический и бактериологический эффект,способствует восстановлению нормальной микрофлоры.(72) Балпанов Дархан Серикович Тен Олег Андреевич Ермолаева Анна Николаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологий Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ 1.ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК И БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ.(57) Изобретение относится к микробиологии,биотехнологии и может быть использовано для получения биологически активных добавок и бактерийных препаратов, содержащих штамм. Штамм-1 выделен из содержимого желудочнокишечного тракта младенца и депонирован в коллекции Депозитария ТОО Казахского научноисследовательского института перерабатывающей и Изобретение относится к микробиологии,биотехнологии и может быть использовано для получения биологически активных добавок и бактерийных препаратов, содержащих штамм-, а также как аутоштамм для создания препарата пробиотика индивидуального назначения. В связи с неблагоприятными экологическими условиями,стрессами,длительной антибактериальной, лучевой и химиотерапией,дисбиозами,возникающими вследствие перенесенных заболеваний,увеличивается количество людей, страдающих нарушениями нормальной микрофлоры организма. Для лечения и профилактики этих нарушений все большее внимание уделяется как препаратам, обладающим пробиотическим действием, так и пищевым продуктам, содержащим бифидобактерии. Успешное развитие сферы производства пробиотических препаратов и продуктов функционального питания с пробиотическими свойствами сопряжено с актуальной проблемой получения эффективных ключевых составляющих высокоактивных штаммов бифидобактерий. Микроорганизмы-пробионты, перспективные для последующего включения в состав индигенной микрофлоры биотопов,должны обладать рядом свойств протеолитическими,лизоцимными, каталазными, антибактериальными,антифунгицидными, позволяющими конкурировать с условно-патогенными и патогенными микроорганизмами. Известны моно- и комплексные препаратыэубиотики и кисломолочные продукты,включающие в свой состав бифидобактерии Апивит ( 2231956 С 2, 2004.07.10), Бэтавитон( 2155489 С 1, 2000.09.10), Эраконд ( 2155488 С 2, 2000.09.10). Однако, биологически активные добавки,предназначенные для использования их в качестве пищевых добавок,проявляют свои профилактические свойства при достаточно больших дозах, поэтому введение их в кисломолочные продукты в эффективных дозах меняет вкус и внешний вид продукта, что неприемлемо для некоторой части потребителей. Широкое распространение получили фармацевтические препараты,содержащие бифидобактерии бифидумбактерин,бификол,бифилонг. В состав этих препаратов включены бифидобактерии следующих видов 1, выделенный от здоровых детей (, А.с. 1513029,кл. С 12 1/20,1989),штамм ЛБА-3 как производственный для получения бифидумбактерина (Инструкция по применению бифидумбактерина сухого, утв. 10.02.89. Минздрав РСФСР Предприятие по производству бактерийных препаратов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского). Для приготовления бактерийных препаратов,БАД и продуктов лечебно-диетического питания применяются штаммы бифидобактерий видов В.1 ВКПМ -1257, Ас-1578 В.2 В 379 М В.МС- 42, Г 7513 В.79119, В.79-43 (А.с. 343588, патент РФ 1347221, патент 849779, патент РФ 2108383, патент РФ 2152993, патент 863639, патент РФ 2120991,патент РФ 2078814, патент РФ 2111248). Известен штамм 791,используемый в производстве бактерийных препаратов, который сквашивает молоко в течении 18-24 часов,обладасг антагонистической активностью против . , . , ., патент 2023396 С 1, кл. А 23 С 9/12, 30.11.94). Недостатком штаммов является недостаточно высокая пробиотическая активность и технологичность. Качество лечебных продуктов и препаратов во многом обусловлено свойствами штаммапродуцента - его специфической активностью. Большой ассортимент биологически активных и технологичных штаммов бифидобактерий делает возможной разработку новых моно- и комплексных продуктов лечебного питания и бакпрепаратов,способных обеспечивать высокую колонизационную резистентность кишечника человека,восстановить его нормальную микрофлору и снизить заболеваемость различными кишечными инфекциями. Задачей изобретения является изыскание штамма В.с более высокой пробиотической активностью, устойчивого к условиям внешней среды, к воздействию экстремальных факторов,быстро размножающегося в питательных средах с накоплением производственной биомассы,обладающего стабилизирующим кислотообразованием во всем температурном диапазоне развития клеток. Новый штаммвыделен из содержимого желудочно-кишечного тракта младенца первых дней жизни. Штамм депонирован в коллекции Депозитария ТОО Казахского научно-исследовательского института перерабатывающей и пищевой промышленности под номером В-343(от 28.11.12 г.). Техническим результатом заявленного изобретения является получение бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, которые в качестве действующего начала пробиотической направленности содержат штамм-1. Штамм обеспечивает утилизацию широкого спектра углеводов и вследствии этого более технологичен,обладает более высокой пробиотической (протеолитической, каталазной,лизоцимной,адгезивной) активностью и устойчивостью к действию желудочного сока, к повышенным концентрациям соли и к внешним воздействиям, что обеспечивает более активную колонизацию кишечника и восстановление резидентной микрофлоры, а также позволяет расширить арсенал технических средств лечебнопрофилактической направленности. Заявляемый штамм может быть использован при производстве бактерийных препаратов и БАД в различных формах, в том числе, порошков и капсул. Штамм характеризуется свойствами и признаками,которые описаны ниже. Идентификация штамма проводилась по морфологическим, культуральным и физикобиохимическим свойствам Культурально-морфологические свойства штамма. Клетки представляют собой неподвижные грамположительные или вариабельно окрашивающиеся полиморфные палочки с бифуркациями или без, длиной 4-5 мкм,располагающиеся в виде скоплений или отдельных особей. Штамм бифидобактерий -анаэроб, на поверхности плотных питательных сред в аэробных условиях не растет. При росте на среде(бульон для бифидобактерий) на 1 сутки возникает неравномерное помутнение среды с зоной аэробиоза, иногда образуется осадок в виде рыхлой массы, отдельные колонии белого цвета имеют форму мелких гвоздиков и зерен. Физико-биохимические свойства штамма. По отношению к сахарам сбраживает целлобиозу, лактозу, глюкозу. Не сбраживает арабинозу, ксилозу, рибозу, маннит, салицин. Продуктивность штамма на среде(бульон для бифидобактерии) через 24 ч культивирования при 37 С титр достигает не менее 1108 КОЕ/мл. При создании препаратов и продуктов на основе пробиотических культур,особая значимость придается пробиотическим свойствам выделенного штамма-, в частности наличию у штамма антагонистической, протеолитической, лизоцимной активности. При изучении протеолитической и лизоцимной активности пробиотического штамма- установлено, что штамм обладает высокой протеолитической активностью с диаметром зоны просветления 8-10 мм, лизоцимной- 5 мм. Антагонистическая активность полученной культуральной жидкости составляет по зоне задержки роста тест-культуры (14,50,76) мм. Энергия кислотообразования через 72 ч. роста составляет 150-160 Т. На гидролизатно-молочной среде через 24 ч. культивирования при 37 С титр клеток достигает не менее 1109 КОЕ/мл,антагонистическая активность полученной культуральной жидкости составляет (15,41,3) мм,протеолитическая активность - 12 мм, лизоцимная 7 мм. При изучении каталазной активности штамм каталазоотрицательный. Условия хранения штамм хранится в лиофильно высушенном состоянии в нейтрализованной культуральной жидкости с добавлением защитной среды следующего состава 44 сахарозы - 5 8 желатозы - 1 обрата молока - 12. Хранится в темном месте при температуре не выше 0 С. Условия и состав сред для размножения штамма глубинное культивирование при температуре 37 С в течении 24 ч на среде(бульон для бифидобактерий) г/л пептический перевар животной ткани - 10,00 ферментативный гидролизат казеина - 20,00 дрожжевой экстракт 10,00 глюкоза - 20,00 томатный порошок - 16,65 твин 80 - 2,00. Условия и состав среды для ферментации глубинное культивирование при температуре 37 С на гидролизатно-молочной среде следующего состава, (г/л) молоко гидролизованное - 500 мл хлористый натрий - 5,0 пептон - 2,0 лактоза - 10,0(1101)С в течении 30 мин. рН среды 7,0-7,4. Полученный штаммобладает высокой пробиотической, в частности протеолитической,лизоцимной,каталазной,кислотообразующей антагонистической активностью в отношении патогенной и условно патогенной микрофлоры, проявляет выраженную антиоксидантную активность. Получен без использования каких-либо химических и физических мутагенных агентов посредством длительного поочередного культивирования в двух различных питательных средах среде(бульон для бифидобактерий) и стерильном обезжиренном молоке без ростовых факторов. Пример 1. Получение капсулированной формы биологически активной добавки к пище. К суспензии 24-часовой культуры бифидобактерий штаммадобавляют среду высушивания (сахароза 44 и желатин 8 в объеме 1,5-5) и лиофильно высушивают в лотках. 1 г готовой биомассы содержит не менее 1010 жизнеспособных бифидобактерии. Для капсулирования готовят смесь, в которую входят следующие ингредиенты высушенная биомасса бифидобактерии(со средой высушивания), лактулоза в соотношениях 19. После тщательного перемешивания проводят капсулирование в капсулы 2 по 0,3 г. Одна капсула содержит не менее 10 жизнеспособных бифидобактерий. Пример 2. Получение лиофилизированного бактерийного препарата. К суспензии 22-24-часовой культуры бифидобактерий штаммадобавляют защитную среду высушивания (сахароза 44 и желатин 8 в объеме 1,5-5) и разливают по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при температуре 40-45 С и лиофильно высушивают из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит в 1 г сухой биомассы не менее 109 живых клеток бифидобактерии.-1,депонированный в ТОО Казахский научно исследовательский институт перерабатывающей и пищевой промышленности, под номером В-343,используемый для получения биологически активных добавок и бактерийных препаратов.