Способ определения целлюлозолитической активности чистой культуры микроорганизмов по разложению растительных остатков

(51) 12 1/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ природы,при первичном отборе целлюлозоразрушающих микроорганизмов. Способ определения целлюлозолитической активности чистой культуры микроорганизмов по разложению растительных остатков, заключается в выращивании чистых культур на 100 мл голодного агара с внесением измельченных в мельнице растительных остатков, извлечении через 30 суток растительных остатков, отмывании их от агара,подсушивании и взвешивании, затем по убыли массы растительных остатков подсчитывании интенсивности разложения целлюлозного субстрата по сравнению с контролем (на контроле среда с фильтровальной бумагой). Способ может быть использован при отборе и изучении почвенных микроорганизмов,разрушающих растительные остатки,при первичном отборе целлюлозоразрушающих микроорганизмов.(73) Акционерное общество Казахский агротехнический университет им. Сакена Сейфуллина(56) Звягинцев Д.Г. Методы почвенной микробиологии и биохимии. М., 1991, с. 277(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЗОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ ПО РАЗЛОЖЕНИЮ РАСТИТЕЛЬНЫХ ОСТАТКОВ(57) Изобретение относится к общей микробиологии и может быть использовано при отборе и изучении почвенных микроорганизмов,разрушающих ткани растений полисахаридной Изобретение относится к общей микробиологии и может быть использовано при отборе и изучении почвенных микроорганизмов,разрушающих растительные остатки, при первичном отборе целлюлозоразрушающих микроорганизмов. Интерес к микробиологическому разложению растительных остатков обусловлен их важностью в биосферном цикле углерода, а также возможностью использовать их в качестве возобновляемого сырья для получения ряда ценных продуктов органического синтеза и производства белкововитаминного концентрата. Известен также способ определения целлюлозолитической активности микроорганизма по расщеплению им целлюлозосодержащего субстрата по выделению углекислого газа индикаторной культуройМирзаев М.Н., Исмаилова Д.Ю., Дрягина Т.Н.,Тенькова Г.Н.,Периханова А.Г. Способ определения целлюлолитической активности микроорганизма по расщеплению им целлюлозосодержащего субстрата. Авторское свидетельство 1027202 А. -1980. Наиболее близкий предполагаемому изобретению относится способ определения интенсивности разложения целлюлозы в почве,включающий закладку льняного полотна с полимерной пленкой в почву Звягинцев Д.Г. Методы почвенной микробиологии и биохимии. М.-1991. - с. 277. Недостатком первого способа является то, что по данному способу невозможно определить, именно какой вид микроорганизма разлагает целлюлозный субстрат, так как эксперимент проводиться в полевых условиях. По второму способу не возможно дать количественную оценку целлюлазной активности штаммов. Способ определяет лишь наличие целлюлозолитической активности изучаемого микроорганизма. Технической задачей изобретения является определение целлюлозолитической активности чистой культуры микроорганизмов по разложению растительных остатков. Поставленная цель достигается тем, что на 100 мл голодного агара вводится измельченные в мельнице растительные остатки в количестве 2 г, 4 г и 6 г, затем на твердую питательную среду производится посев чистой культуры микроорганизма, через 30 суток растительные остатки извлекают,отмывают от агара, подсушивают и взвешивают, по убыли массы судят об интенсивности разложения целлюлозного субстрата по сравнению с контролем (на контроле среда с фильтровальной бумагой). Пример. Для изучения роста и развития целлюлозоразрушающих грибов родана различных субстратах была использована солома сельскохозяйственных культур, таких как мягкая пшеница, ячмень, овес и стручки масличной культуры рапса. Контролем служила фильтровальная бумага. В опыте растительные остатки были введены в голодный агар в количестве 2 г, 4 г и 6 г на 100 мл среды. На шестые сутки культивирования были описаны культурально морфологические признаки роста и развития целлюлозоразрушающих грибов, а после 30 суток взвешивали остаточный вес внесенных растительных остатков. В результате исследований скорость роста грибов на различных субстратах и культуральноморфологические признаки были различными,однако на всех испытуемых вариантах наблюдалась закономерность чем больше было внесено растительных остатков в питательную среду, тем лучше развивались грибы. Рост грибовна фильтровальной бумаге, используемой в качестве контроля, по сравнению с развитием на средах с растительными остатками был слабым. Цвет воздушного мицелия штаммовугольно-черный, мицелий редкий, стелющийся по субстрату, диаметр колоний варьировал в пределах 13-17 мм. На растительных остатках ячменя цвет колонийпепельно - серый, наблюдалось спорообразование. При использовании соломы воздушный мицелий штаммов варьировал от бесцветного до белого, а конидиеобразование происходило только в центре колоний. На соломе из мягкой пшеницы грибы родапоказали слабый рост, мицелиальный газон был редкий. Размеры колонийсоставили 1 2 - 2 3 мм, спороношение было поздним. Грибы родана среде с измельченными стручками рапса показали хороший рост. Микромицеты рода образовывали многочисленные округлой формы небольшие колонии, которые были распределены по всей площади чашки Петри, воздушный мицелий черного цвета с белым ободком (таблица 1). Таблица 1 Рост и развитие грибов родана различных растительных остатках сельскохозяйственных культур Штамм Диаметр колоний микромицетов на голодном агаре с различным количеством внесенных растительных остатков, мм 2 г 4 г 6 г Фильтровальная бумага (контроль) 16,51,14 17,00,60 14,10,69 14,20,81 16,60,69 13,00,65 Ячмень26,30,85 19,32,35 13,40,58 Диаметр колоний микромицетов на голодном агаре с различным количеством внесенных растительных остатков, мм 2 г 4 г 6 г 27,20,84 14,01,13 22,51,03 Овес 26,30,58 19,01,13 13,60,86 27,30,81 14,01,13 22,51,13 Мягкая пшеница 20,01,13 12,31,21 11,30,24 22,91,53 23,21,58 17,81,80 Рапс 20,70,14 18,30,55 18,70,43 17,10,36 15,30,45 16,10,84 Как показали результаты исследований, цвет колоний и интенсивность развития целлюлозоразрушающих грибов изменялись от вида используемых растительных остатков,что объясняется различным химическим составом растений (фиг.1). Целлюлазная активность микромицетов различалась в зависимости от видов растительных остатков. Гриб . шт. 10 интенсивно развивался на остатках ячменя и мягкой пшенице,где степень разложения ими остатков была высокой. Интенсивность разложения соломы ячменя составила 90-94, мягкой пшеницы - 89-91. Деструкция соломы рапса (85-88), овса (86-87) и фильтровальной бумаги (57-84) была на среднем уровне. Однако . шт. 13 наоборот показал хороший рост на рапсе и фильтровальной бумаге, где степень разложения достигала 89-91. Если разложение соломы овса и мягкой пшеницы составило 70-87, то деструкция ячменя была на высоком уровне - 80-94 (фиг.2). Таким образом,активные штаммы целлюлозоразрушающих грибов родов могут быть использованы в повышении плодородия почв за счет интенсивной гумификации послеуборочных растительных остатков при нулевой технологии возделывания сельскохозяйственных культур, а также в биоконверсии целлюлозосодержащих материалов в различных отраслях промышленности. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения целлюлозолитической активности чистой культуры микроорганизмов по разложению растительных остатков,отличающийся тем, что на 100 мл голодного агара вводят измельченные в мельнице растительные остатки, затем на твердую питательную среду производят посев чистой культуры микроорганизма,через 30 суток растительные остатки извлекают,отмывают от агара, подсушивают и взвешивают, по убыли массы судят об интенсивности разложения целлюлозного субстрата.