Способ получения микрокапсулы полипептида

Изобретение относится к микрокапсулам. предназначенным для длительного высвобождения физиологически активного ПЗПТИДЗ.Для препаратов. назначаемых на длительный период. предлагались различные формы дозировки. В заявках Японии докика зла М 57118512 и М ЕР АО 052510 раскрывается приготовление микрокапсул способом фазовой сепарации С Исподъзовт нием коацервирующего агента. такого как минеральное масло или растительное масло. доки-ка зла 60-100516 (соответствующие патенты США М 4 б 52441 и 4711782). 62-201-816 (Е Р-А-О 190833 и 63-41416) раскрывают способы приготовления микрокапсул посредством высушивания в воде. В соответствии с этими способами лекарство можно заключать в микрокапсулы с меньшим первоначальным высвобождением. В случае назначения лекарства в формемикрокапсул требования к микрокапсулам,имеющим большую зависимость от взаимосвязи с функциями живого организма. мож но разделить на ряд фаз. Поскольку этосвязано с медициной. нужны микрокапсулы. которые смогли бы по возможности удов летворять эти различные требования.Существует много ссылок по микрокапсулам. включающим водорастворимое лекарство с использованием биоразлагающего полимера. Однако при использовании водорастворимого лекарства. особенно физиологически активного пептида с относительно большим молекулярным весом. диффузия лекарства. заключенного таким образом в полимер, низкая. поэтому лекарство не высвобождается на первоначальной стадии до тех пор, пока не начнется разложение или пропитка полимера. и наоборот. в зависимости от способа приготовления трудно избежать большого выброса на первоначальной стадии. Таким образом. при использовании лекарства часто возникают практические трудности. в частности при длительном высвобождениифармацевтических композицийа течение большого периода времени постоянный-выход лекарства сбольшой точностью является важным тре бованием. но микрокапсулы. удовлетворяющие эти требования. не были известны.В соответствии с настоящим изобретениемполучают микрокапсулы. предназначенные для высвобождения в нулевом порядке физиологически активного полипвптида на протяжении по меньшей мерепептиды. состоящие из двух или несколькихаминокислотных групп и имеющих молекулярный вес 20 О 10 О.О 0 О.Примеры указанных пептидов включают гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (ЛГ-рилизинг гормон) и его аналоги, например вещества с похожей активностью как у ЛГ-рилизинг гормона (патенты США М 3853837. 4008209. 3972859 и 4234571. патент Великобритании М 1423083 Ргосееотоз о тпе Мапопа Асаоегпу о ша ОБА. уо. 78. р.б 509 б 512. (1981). антагонисты ЛГ-рилизинг гормона (патенты М 4086219, 4124577, 4253997 и 4317815). Далее можно упомянуть о пролакти не. адренокортикотропном гормоне (АКТГ). меланоцитостимулирующем гормоне (МСГ). гормоне. высвобождающем тиреотропин (ТРГ). их солях и производных (ССД доки-ка 110 М 50121273. 51-116465). тиреостимулирующем гормоне (ТСГ), лютеинизирующем гормоне(ФСП. вазопрессине. производных вазопрессина (десмопрессин и т.п.). окситоцине. кальцитонине. гормоне паращитовидной железы (ГПЩ) и его производных (Сс. докока Зло М 6248799). глюкагоне, гастрине. вазоактивном кишечном пептиде (ВПК), липокортине. вазокортине. атриальном натримочегонном пептиде (АНП). зндотеллите. секретине. панкреозимине. холецистокинине. антгиотензине, лактогене человеческой плаценты. хорионическом гонадотропине человека (ХГЧ). энкефалине. производных энкефалина (патент США М 4382923. ЕП заявка М 31567) зндорфине. киоторфине. инсулине. соматостатине. производных соматостатина (патент США М 4087390. 4093574. 4100117 и 4253998) гормонах роста. факторах дифференцировки пролиферации различных клеток. например инсулиноподобном факторе роста эпидермиса(Ф РЭ). факторе роста фибробласта (ФРФ). факторе роста, полученного из тромбоцитов(ФРГ). факторе роста нервной ткани (ФРН). факторе трансформированного роста (ФТР). костно-морфогенном факторе (КМФ). факторе васкуляризации. факторе задержки вас куляризации, фиброниктине. ламинине иу Ст.п интерферона сг-В- и у-типа. интерлейкинах (1. Н. Ш, Ш, /. / и УН), туфстине. тимопойетинелимосине, тимостиулине, тимусном гуморапьном факторе (ТГФ). сывороточном тимусном факторе (СТФ) и его производных (патент США М 4229438) и других тимусных факторах (Ртос. пак. Асао. вы. и..А. уо. 78. рр. 11621166. 1934. факторе некроза опухоли (ФНО), коллоние-стимулирующем факторе (КСФ). мотилине. эритропойетинс (ЭП), динорфине. бомбезине. нейтротензине, церулиене. брадикинипроизводных (Терапевтические пептиды и протеины. Сош. 3 ргп 9 НагЬог Ьаьогатогу. Меш-догк. рр.б 9-74. 1989, стрептокиназе. аспарагиназе. калликреине. веществе Н. факторах свертываемости крови /П и Х. лизозим хлорида. полимиксине В. колистине. гармонцидине, бацитрацине и т.п.В микрокапсуле. содержащей в качестве физиологически активного полипептида аналог ЛГ-рилизинг гормона. который является водорастворимым и имеет молекулярную массу 1.000 или больше. напр. ТАР-144,выраженный (пир) (Энд-Нв-Агр-Зог-дуг-ОкертАго-РгоынСагв. илиуантагонист ЛГ-РГ. выраженный (пир) СПу-Ъ-Пэ-дгр-Зег-дуг-ЬеиАг 9-Рго 61 уМНС 2 Н 5. непрерывное длительное высвобождение осуществляется на протяжении большого периода времени.Эти физиологически активные пептиды используются в количествах. выбранных в зависимости от вида пептида, желаемых фармакологических действий,длительности этих действий, от 0.01 мг до 5 г. более предпочтительно от 0,1 мг до 2 г как дозировка микрокапсул. Концентрация в микрокапсуле зависит от физико-химических свойств лекарства и она выбирается в пределах около 0.01 - 50 мас.. более предпочтительно 0.1 - 30 мас..Концентрация во внутренней фазе микрокапсулы около 20-70 мас.. предпочтительно25-65 мас.. еще более предпочтительно 35-60 мас.. зависит от физико-химическихо свойств. таких как растворимость в воде.свобождение, включают сополимеры или го мополимеры из молочной кислоты гликолевой кислоты которые имеют кислотную группу в молекуле. слабо растворимы или нерастворимы в воде и биосовместимы. Их соотношение зависит от срока. необходимого для длительного высвобождения. и выбирается в пределах от 100/0 до 80/20. предпочтительно 100/0-90/10, еще более предпочтительно 100/0. В качестве молочной кислоты можно использовать .. О и Омолочную кислоту, в частности сополимер или гомополимер. полученный полимеризацией мономера или олигомера ОЬ-молочной кислоты.Как сополимер или гомопопимер. состоящий из ОЬ-молочной кислоты гликолевой кислоты. хорошо используются такие полимеры. практически не содержащие катализатора. полученные полимеризацией в отсутствие катализатра (доки-кап Зло 61285215). Предпочтительны полимерыссостепенью дисперсии (коэффициент среднемассовой молекулярной массы к среднечисловой молекулярной массе) 1.5-3.0. особенно 1,5 -2.5.Длительность периода непрерывного пролонгированного высвобождения микрокапсул этого изобретения в большой степени зависит от молекулярной массы полимера и соотношения состава молочной кислоты - гликолевой кислоты. В случае приготовления. например микрокапсул с непрерывным высвобождением нулевого порядка на три месяца-по меньшей мере при соотношении состава молочной-гликолевой кислот 100/0 предпочтительно средняя молекуляр ная масса полимера колеблется от 7.000, до 25.000. при 90/10 - от 7.000 до 30.000 и при 80/20 от 12,000 до 300,000.В предлагаемом способе средняя молекулярная масса и степень дисперсии означают величины. которые определяются посредством хроматографии гельпроницаемости с использованием коммерчески доступного полистирена стандартной молекулярной массы.Концентрация полимера в масляной фазе при приготовлении микрокапсул выбирается в пределах 05-90 мас.. более предпочтительно 2-60 мас..Раствор (масляная фаза). содержащий указанный полимер. представляет собой полимер. растворенный в органическом растворителе. Данный органический брастворитель может быть любым органическим растворителем с точкой кипения не выше 120 С и плохо смешиваемым водой. Примерами являются галогенированные алканьт,например дихлорметан. хлороформ. хлоратан. трихлорэтан. тетрахлорид углерода и т.п., этиловый ацетат. этиловый эфир. бензол. толуол и т.п. Их можно использовать как смесь двух или несколько компонентов.В настоящем изобретении нужные микрокапсулы с меньшим первоначальным высвобождением можно приготовить без добавления вещества, сохраняющего лекарство, но его можно дополнить в соответствии с ситуацией-веществом. сохраняющим лекарство. является соединение, придающее повышенную вязкость внутреннейводной фазе или затвердение под действием введения в температурных условиях иона или соединения с основной остаточной группой с протонным зарядом. которое взаимодействует с примером и увеличивает вязкость эмульсии типа в/м.Примеры упомянутого вещества, сохраняющего лекарство. включают желатин. агар. альгиновую кислоту. поливиниловый спирт или основную аминокислоту. такуюИСПОЛЬЗОВЗТЬСЯ ОТДЕЛЬНО ИЛИ КВК СМЕСЬ ДВУХили нескольких из них. Хотя количество ис пользуемых соединений зависит от их вида. желательно иметь концентрацию во внутренней водной фазе 005-90 мас.. более предпочтительно 0.180 мас..В качестве традиционных способов кон троля высвобождения из этих микрокапсул используется способ изменения скорости1984) и способ, включающий введение водорастворимого соединения в матрицу микрокапсул для создания водных каналов для высвобождения лекарства. Однако первый способ грешит тенденцией сокращать длительность высвобождения, а второй стимупирует только первоначальный выброс. Таким образом. вряд ли можно достичь вьесвобождения нулевого порядка. В способе Спетп. Рпагт. (ВЫП. уо 36/4/1502-1507. 1988) возникает опасность появления нежелательных побочных действий благодаря увеличению лекарства в крови на первоначальной стадии. Кроме того. существует способ(Доки-ка Зло 57-150609). который включает такое соотношение полимеризации молочной - гликолевой кислот (ПМТК). которое увеличивает время длительности высвобождения. Однако этот способ налра влен на увеличение скорости разложения полимера. который естественно сокращает длительности высвобождения. что является ограничением в реализации непрерывного высвобождения в течение долгого периода времени.Микрокапсулы с пролонгированным высвобождением по настоящему изобретению готовятся следующим образом.Вначале физиологически активный пептид добавляется к воде в количестве для упомянутой концентрации. к которой далее при необходимости добавляется вещество,сохраняющее лекарстводтакое как вышеупомянутый желатин или основная аминокислота, чтобы раствор или суспензияимели нужную концентрацию для получения внутренней водной фазы. К этой внутренней водной фазе можноДобавить рН регулирующий агент для поддержания стабильности или растворимости физиологически активного пептида. такойкак угольная кислота, уксусная, щавелевая. тлмонная. фосфорная. соляная кислота, гидроокисьнатрия. аримин. лизин и их соли. Еще можно добавить в качестве стабилизатора физиологически активного пептида бе лок. желатин. лимонную кислоту. натрий этилендиамин тетраацетат. декстрин. кислый сульфит натрия или попиоловое соединение. такое как полиэтилен гликоль. В качестве консерватора можно ввести обычные вещества. такие как параоксибензойной кислоты эфир. например метилпарабен.Полученная таким образом внутренняя водная фаза добавляется к полимерсодержащему раствору (масляная фаза) с посла дующей процедурой эмульгирования дляполучения эмульсии типа в/м. Для процедуры эмульгирования используется известный способ получения дисперсии Как. например. способ перемежающегося встряхивания. использующий миксер типа пропеллерной мешалки. турбинной мешалки или т.п коллоидную мельницу. способ гомогенизациидалее приготовленная таким образом эмульсия подвергается микрокапсулированию. Как средство для микрокапсуляции может использоваться способ высушивания в воде или фазовой сепарации. В случае приготовления микрокапсул высушиванием в воде указанная в/м эмульсия далее добавляется к третьей водной фазе для получения тройной в/м/в эмульсии, после этого растворитель в масляной фазе выпаривается до получения микрокапсул.К внешней водной фазе может быть добавлен эмульгирующий агент. В качестве такового можно использовать любой агент. способный образовать стабильную м/в/м эмульсию. например анионное поверхност НОЗКТИВНОВ ВЭЩССТВО. например ОЛЭЭТ натрия. стеарат натрия. натрий лаурил сульфат и т.п неионное поверхностно-активное вещество, например попиоксиэтиленсорбент ный эфир жирной кислоты (Ти/епп 80, Тугепп 60. продукты Апаз Рои/бег Со). полиоксиэти лен производное касторовое масло (НСО 60. НСО-БО. продукты маню Спетдсав) ит.п поливинил пирролидон. поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлозу. лецитин или желатин. Такие эмульгаторы можноИСПОЛЬЗОВЗТЬ ПО ОТДЗЛЬНОСТИ ИЛИ В КОМЙИнации. Концентрация эмульгирующего агента выбирается в пределах 001-2056 предпочтительно 0.О 510.Для выпаривания растворителя из масляной фазы используется любой из традиционных способов. Способ осуществля ВТСЯ ПОСТВПВННЫМ СНИЖ 8 НИеМД 8 ВЛеНИЯ Содновременным перемешиаанием пропеллерной или магнитной мешалкой или ис пользованием вращающегося испарителя с к регулированием степени вакуума. В этом слу 9чае необходимое время можно уменьшить постепенным согревапием в/м/в эмульсии после затвердевания полимера до некоторой степени. чтобы полнее удалить растворитель.Полученные таким образом микрокапсупы собираются центрифугированием или фильтрацией. промываются несколько раз дистиллированной водой для удаления свободного физиологически активного пептида. вещества. сохраняющего лекарство, и эмульгирующего агента. прилипшего к поверхности микрокапсулы. с последующей дисперсией полученного вещества в дистиллированной воде и высушиванием при температуре ниже 0 С при необходимости согреванием при пониженном давлении для более полного удаления влаги в микрокапсулах и растворителя в стенке микрокапсулы.В случае приготовления микрокапсул способом фазовой сепарации агент коацер. вации медленно добавляется к упомянутойв/м эмульсии при перемешивании, чтобы дать полимеру осесть и затвердеть. Агентом коацервации может быть любое способное смешиваться с растворителем полимерное соединение. СОВДИНЗНИЯ минерального ИЛИ растительного масла, например силиконовое масло. кунжутное. соевое. кукурузное. ХЛОПКОВОВ. КОКОСОВОВ. ПЬНЯНОВ МЗСЛЗ. МИНВможно использовать в смеси из двух или нескольких. Полученные микрокапсулы собираются фильтрацией и промываются. например. гептаном повторно. чтобы удалить бедный растворитель полимера. Далее удаление свободноголекарства и отделение растворителя проводится так же. как в способе высушивания в воде. для противодействия слипанию микрокапсул одна с другой во время промывания может быть добавлен агент. . Микрокапсулы настоящего изобретения, предназначенные для продолжительного высвобождения. полученные способом высушивания в водеобладают лучшими и более стабильными свойствами длительного высвобождения на протяжении большего периода времени. Микрокапсулы по предлагаемому способу назначаются в виде инъекций. имплантаций и в виде агентов. поглощаемых слизистой оболочкой прямой кишки или матки. После легкого дробления при необходимости микрокапсулы просеиваются для удаления слишком больших из них. Средний размер гранул микрокапсул О.51 О 001 м. желательно и предпочтител ьно 250 О 4 м. Если микро 4389КЭПСУЛЫ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ Б виде ИНЪЕКЦИЙ В форме суспензии. размер гранул должен быть достаточным и удовлетворять требованиям дисперсности и введения в виде иньекций. например в пределах 2400 м. Микрокапсулы. полученные способами по этому изобретению. имеют много преимуществ. Например. они почти не подвержены слипанию при изготовлении. можно изготовить микрокапсулы, которые могут быть сферическими по форме с разными размерами. Ступень удаления растворителя из масляной фазы легко проконтролировать. следовательно. также можно контролировать поверхностную структуру микрокапсул, что является решающим фактором в скорости высвобождения лекарства. Микрокапсулы. полученные данным способом, можно свободно назначать в виде инъекций и имплантировать внутримышечно. подкожно. внутривенно или на орган. составную полость или на поражение. такое как опухоли. Их также можно назначать в различной дозировке и использовать как материал при приготовлении таких форм дозировок. Например, в приготовлении микрокапсул по этому изобретению для инъекций они диспергируются в волной среде вместе с диспергирующим агентом. например Тучееп 80. НСО-бО. карбоксиметилцелЛЮПОЗЗ. алгинат натрия И Т.П КОНСЕПВЭНТОМ. например метилпарабен. пропилпарабен и т.п., изотонирующим агентом. например хлорид натрия. маннит. сорбит. глюкоза и т.п или суспендируются в водной среде вместе с растительным маслом, таким как кунжутное масло или кукурузное масло. Такая дисперсия Гили суспензия формируется в практически используемый инъекционный раствор пролонгированного действия. Микрокапсулированный инъекционный раствор с пролонгированным действием можно преобразовать в более стабильный инъекционный раствор добавлением дополНИТВЛЬНОГО НЗПОЛНИТЕЛЯ, например МаННИТ. сорбит. лактоза. глюкоза и т.д. повторным диспергированием полученной смеси и отвердением посредством высушивания при температуре ниже 0 С или распылительным высушиванием с добавлением дистиллированной воды для инъекций или какого-либо соответствующего диспергирующего агента. доза препарата с длительным высвобождением в соответствии с данным изобОВТСНИСМ МОЖЗТ МСНЯТЬСЯ В ЗЗВИСИМОСТИ от вида и количества физиологически активНОГО ПСПТИДЗ. КОТОрЫЙ ЯВЛЯЕТСЯ ЗКТИВНЫМА НОСТИ ИЛИ высвобождения лекарства. ЖИВО