Производные глицина или их физиологически приемлемые соли, обладающие способностью тормозить связывание фибриногена у фибриногенного рецептора тромбоцитов

Изобретение относится к производным глицина или их физиологически приемлемым солям новым биологически активным соединениям. обладающим способностью тормозить связывание фибриногена у фибриногенного рецептора тромбоцитов. аБлизкими структурными аналогами являются глицинсодержащие производные 4 амидинофенилаланинов.Однако известные соединения являются ингибиторами сериновых протеаз и не обладают свойством ингибировать связывание белков. таких как фибриноген. на соответствующие рецепторы на поверхности клеток.Цель изобретения поиск новыхсоединений в ряду производных глицина. обладающих способностью тормозить связывание фибриногена у фибриногенного рецептора кровяных телец.Цель достигается описываемыми п-ро изводными глицина общей формулы К-СОМН-СНгСОМН-СН(К)-СН 2 СООНили ОН МН Ж. 7 он .- Огнафтил, -СОСН 2 МСН 2 СН 2 МНУ. то К амидиногруппа п - число 1 или 0 Ь аминогруппа или. если л 1, то -(СН 2)озСНз Т гр ппа формулы -(СН 2) (О)п. п 1 или О-сн(к сн 2- или -СН 2 СО-. причем одна из содержащихся в Т-группе карбонильных групп может существовать в виде кетапяили радикал связанной через аминогруппу а аминокарбоновой кислоты.или их физиологически приемлемые соли,обладающие способностью тормозить связывание фибриногена у фибриногенного рецептора тромбоцитов.В следующих примерах описано получение соединений формулы 1. д(тВи)ОтВи гидроиодида выдерживают в течение 2 ч при комнатной температуре под аргоном. в смеси 10 мл метиленхлорида и 5 мл трифторуксусной кислоты. После выпаривания растворителя получают 43 мг(86) (3-)п-амидинофенил)-Д.-аланил)6 уАрег 0 Н трифторацетата (2 3). Температура плавления 223224 С из уксусного эфира (изопропилового эфира).В) Исходный эфир приготавливают следующим образома) охлажденный до ОС раствор 1,95 г Нег(тВи) - ОтВи -тозилата в ДМФ доводят до рН 8 посредством добавления М-метилморфолина. К нему добавляют раствор 2.1 г 2-Азр(01 Ви)ОЦ в 160 мл ДМФ. После этого смесь в течение 1 ч при ОС перемешиваютПОД аргоном И В течение НОЧИ ВЫДВОЖИВЗ ют в холодильнике. Оставшийся после испарения растворителя остатокломещают в этилацетат и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия. водой. 10 ным раствором бисульфата калия и снова водой. затем высушивается, фильтруется и упаривается. Получают 2,09 г (80) 2-Ар(О(Ви)-5 ег(Ви)0 тВи температура плавления 798 ОС из этилацетата /н-гексанаруют в 100 мл метанола в присутствии 0.1 г катализатора. 10 Ро/ С. После поглощения теоретического количества водорода Фильтруют и выпаривают досуха, Хроматография на силикагеле с метиленхлоридом (МеОНс) аналогично тому. как это описано в пункте а. из 2-6 у 050 и НАр(ОтВи) ег(Ви)ОтВи получают 2-3 у-Ар(0 тВи) ег(Ви)ОтВи. выход - 86 у. д) аналогично тому. как это описано в пункте бтосредством гидрогенолиза 26 уА 5 р(ОтВи)Зег(тВи)(ОВи) получают НОЬу Азр(ОтВи)ег(тВи)(ОтВи) выход 75. МЗ 446 (М НГНС 5 у - Азр (О 1 Ви)-5 ет(тВи)ОгВи в 10 мл ДМФ добавляют под аргоном 67 мг М-метилморфолина и 250 мг НВТУ и выдерживают смесь в течение ночи. Полученное затем после упаривания растворителя масло растворяют в этилацетате, раствор промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия и водой. сушат и упаривают. Остаток хроматографируют на силикагеле уксусным эфиром. Получают 160 мг соединенияГ) раствор 362 мг соединения. полученного по пункту е. в 40 мл пиридина и З мл триэтиламина после насыщения его Н 2 З. выдерживают в течение 2 дней. после чего он вымешивается в вводе и экстрагируется этилацетатом. Продукт хроматографируют на силикагеле метиленхлоридом/метанолом. Получают 270 мг соединения (М-2-3-(птиокарбоксамидофенил)-Д-аланил)-6 уА 5 р(ОтВи)-5 ег(тВи)ОтВи (смесь эпимеров (1 1) мз 786 (м н)д) тиоамид. полученный в предыдущей стадии. растворяют в 30 мл ацетона. смешивают с 0,6 мл метилиодида и втечение 3 ч. нагревают под флегмой. После фильтрации и сгущения продукт осаждают добавлением эфира Получают 181 мг 67) (М-2-З-(п-метилтиокарбоксимидоФению-ДЬ-аланил)6 у-Азр(0 тВи)-ег(тВ Щ-Отви-гидроиодидап) раствор 180 мг иодила (полученного на предыдущей стадии) в 3 Омл МеОН смешивают с 37 мг ацетата аммония и нагревают при 6 ОС в течение 5 ч. После охлаждения и фильтрации продукт осаждают эфиром. Получают 89 мг (51 )(М-2-3-(п-амидонофенил)-Д 1.-аланил)56 у-А 5 рЮтви)-8 ег(Ви)-ОтВи-гидроиодида (смесь эпимеров 1 1). температура плавления 15 ОС (разл). из уксусного эфира /г-гексана.) аналогично тому. как это описано в пункте б. при гидрогенолизе продукта. полученного согласно пункта п. получаютП р и м е р 2. А) аналогично тому. как это описано в примере 1 А при использованииВ) исходный материал может быть получен следующим образомб) посредством гидрогенолизе продукта. полученного на ступени а. получают НАзр(ОтВи)-/аЮтВи. температура плавления 71 С. выход 93д) посредством гидрогенолизе продукта. полученного на стадии с. получают Н-ЫуА 3 р(ОтВи)-/аО 1 Ви выход 87.ао - 332 Сдинофенил)-.-аланил) 6 у-Азр-(0 Ви)-/аОтви растворяют в 10 мл этилацетата и смешивают с 5 мл 2.5 Н НС. После 4 ч перемешивания при комнатной температуре фильтруют, и осадок промывают уксусным эфиром. Получают 44 мг 053) 3-(пгуанидинофенил)-Ь-аланил)-6)у-А 3 р-/а-ОН-пентагидрохлорида, температура плавления 215 С (разл.) из диоксана.В) Исходный материал может быть попучен следующим образомб) раствор 890 мг продукта. полученного на ступени а. в течение 3 ч гидрируют в 15 мл метанола в присутствии катализатора Ро/С. После фильтрования и упаривания растворителя оставшуюся пену хроматографируют на силикагеле смесью этилацетатметанолом (95 Е) и кристаллиэуют из изопропилового эфира. Получают 670 мгс) раствор 200 мг продукта, полученного на ступени б, и 60 мг ЗЬ-диметил-М-нитро 1 Н-пиразол-Ькарбоксамидина в 3 мл этанола нагревают в течение 24 ч с образованием флегмы. Растворитель выпаривают и остаток хроматографируют на силикагеле метиленхлоридом/метанолом (98 2). После перекристаллизации из этилацетата /н-гексана получают 148 мг (661) (М-Вос-З-(п-нитрогуанидино)фенил)-1-аланил)-6 у-А 5 р(Ок Ви)-/аЮгВи. температура плавления 141143 Сд) раствор 118 мг соединения, полученного на предыдущей стадии в 3 мл уксусной кислоты. гидрируют в присутствии катализатора Ро/С (30 мг) в течение З дней. После удаления растворителя фильтрат хроматографируют на силикагеле смесью этилацетата и метанола (99 1). Получают 59 мг (54 1,)П р и м е р 4. А) Аналогично тому. как это описано в примере ЗА. посредством гидролиза (М-Вос-З-ЛЧ-аминонофенил)-Дапанил) Шу-Азр-(Отвиъиэобутиламид-гидроиодида получают (З-(п-амидиноФенил)Д 1.-аланил)-6 у-А 5 р изобутиламидгидрохлорид (смесь эпимеров 1 1), температура плавления 195198 С (разл.) из диоксана выход количественный.В) исходный материал может быть получен следующим образома)к приготовленной при -10 С смеси 5,12 г 2-Азр(ОтВц)-0 Н-гидрата. 1.65 мл М-метилморфолина и 2 мл изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 15 мл ТГФ по каплям добавляют 5,5 г изобутиламина. растворенного в. 5 мл ТГФ. Через 3 ч освобожденный от растворителя остаток помещают в этилацетат (бикарбонат натрия 5) и органическую Фазу промывают водой. После высушивания, упаривания растворителя и хроматографии полученного масла на силикагеле этилацетатом получают 4.53 г (8 О) 2-АзрЮтВЩ-изобутиламида, температура плавления б 97 ОС из н-гексанаб) посредством гидрогенопиза продукта. полученного на стадии а, получают Н 2858с) посредством связывания 2-6 у-ОН с продуктом, полученным на стадии б, получают 2-6 Пу-АэрЮтВЩ-изобутиламид, выход 87, м 5 436 (мн)д) посредством гидрогенолиэа проДУКТЗ, ПОЛУЧЕННОГО на ПреДВариТепьной ступени. получают Н-6 у-Азр(О 1 Ви) изобутиламид, выход 42. МЗ 302 (Мн)П р и м е р 5. А) Аналогично тому, как это описано в примере 1 А, получают. используя (М-2-3-(п-амидинофенил)-Д 1-аланил) Оу-Ар-(О 1 ВЩ-изобутиламид,соединение (М-2-3-(п-амидинофенил)-Д 1 аланил)-С 1 уА 5 р-изобутиламидтрифторацетат (смесь эпимеров 1 1). температура плавления 141143 С (эфир), выход 91.В) Исходный материал может быть пол-Аб) аналогично тому, как это описано в примере 1 В т. д, п. через (М-2-3-(п-тиокарбоксамидофенил)-Д 1-аланил)-6 у-Ар(ОВи)изобюутиламид (смесь эпимеров 1 1) и через (М-2-3-(п-метилтиокарбоксимидофенил)-д 1.-аланил)-С 1 у-Азр(ОтВи) изобутиламид-гидроиодид (смесь эпимеров 1 1) получают (М-г-З-(п-амидинофенил)-Дапанил)-Су-Азр(ОВиО-изобутиламид-гидроиодид (смесь эпимеров 1 1), температура плавления 160-163 С. выход 37.21), ДМФ прибавляют к 435 мг 2-(Ае 9)2-ОЗЦ. При помощи М-кчетипморфолина реакционную смесь доводят до рН 8,5 в течение ночи перемешивают и упаривают. Остаток растворяют в 0.3 н. уксусной кислоте и затем хроматографируют 0.2 н. уксусной кислотой на полисахаридной смоле (Сефадекс 6-10). Одинаковые фракции объединяют и лиофилизуют. Водный раствор лиофилизата хроматографируют на полистирольной смоле в ацетатной форме (Довекс 44), Элюат лиофилизируют. Получают 143 мг 2-Ае 9(2)-Аг 9-6 уА 5 р-/аЮН мз 814 (мн).П р и м е р 7. Аналогично тому. как это описано в примере 1 В. б. раствор 120 мг 2-Ае 9(2)-Аг 9(3 у-Ар-/аОН (пример б) в 20 мл 0.1 н. уксусной кислоты гидрируют в присутствии катализатора Ро/С. Катализатор отфильтровывают, а фильтрат пиофилизируют. Получают 72 мг соединения Ае 9-Аг 9-С 3 уА 5 р/аЮН ацетат (1 1), МЗ 546 (МН).П р и м е р 8. К раствору 216 мг НАг 9 СЭВу-Азр-Зег-ОН в 5 мл ДМФ и 5 мл Н 2 О прибавляют 242 мг 2-Ае 9-(2 ЪОЗЦ и 0.11 мл М-метилморфолина. Реакционную смесь в течение 18 ч перемешивают и затем при помощи уксусной кислоты доводят до рН 5,3. Затем реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Водную фазу смешивают с катализатором Ро/ С и гидрируют в течение 2 ч. Катализатор отфильтровывают. фильтрат пиофилизируют. Лиофилизат растворяют в 0.2 н. уксусной кислоте и хроматографируют на колонке из пописакаридной смолы (сефадекс (3 25 5) 0.2 Н уксусной кислотой. Объединенные однородные фракции пиофилизируют. Получают 150 мг АеоАг 9-6 у-Ар-егОН ацетата (1 2). МЗ 534 мн). вП р и м е р 9. Раствор 237.5 мг Н-Аго 6 у-А 3 р-/аОН в 5 мл ацетона и 5 мл воды последовательно обрабатывают с 226 мггнафталин-Ъсульфонхлорида и 168 мг бикар боната натрия МаНСОз. После 2 ч перемешивания подкисляют уксусной кислотой и отгоняют ацетон. Водный остаток хроматографируют 0.2 н. уксусной кислотой на колонке Сефадекс 6-25 З. Объединенные однородные Фракции пиофилизируют. Получают 172 мг (2-нафтилсульфонийАго-СпуАр-/аЮН мз 636 (мн). .(носителя). состоя щей из содержащей остаток п-бенэилоксибензилового спирта стирол - 1 дивинилбензолсмолы. в 30 мл ДМФ последовательно смешивают с 0.6 г Ртос-МаШЮН. 523 мг НВТУ. 16.8 мг 4-диметиламинопиридина и 0.24 мл ДРЕА. Реакционную смесь в течение 24 ч встряхивают. в заключение смолу отфильтровываютдпромывают ДМФ. Свободные гидроксильные группы в течение 30 мин ацетилируются в 30 мл ДМФ в присутствии 1.13 мл ангидрида уксусной кислоты и 2.02 мл М-этилдиизопропиламина. далее описан весь цикл синтеза. Протокол синтеза .Ступень Реагенты Время 1 ДМФ 2 х 1 мин 2 20 пиперидин/ДМФ 1 х 7 мин 3 ДМФ 5 х 1 мин 4 2.5 Ртос-аминокислота/ДМФ 2,5 Аео. НВТУ 2.5 Аео.-М этилдиизопропиламин 1 х 90 мин 5 ДМФ 3 х 1 мин б Изопропиловый спирт 2 х 1 минНа каждой СТУПЕНИ СИНТВЗЭ ИСПОЛЬЗУВТРтосшуон. РтосАг 9(НС)ОН связывается согласно приведенному выше протоколу. Вос-Аго (Вос)ОО вводят в пептидную цепь. После окончания синтеза пептидную смолу высушивают. Ее суспендируют в 10 мл ТРА/5 мл СН 2 С 2 и 1 мл Н 2 О и встряхивают в течение 90 мин. Смолу затем отфильтровывают. фильтрат уваривают. Осадок лиофилизируют из воды. Лиофилизат хроматографируют 0.2 н. уксусной кислотой на колонке с сефадексом С-2 БЗ. Объединенные однородные фракции пиофилизируют. Лиофилизат. в свою очередь. хроматографируют на Довекс 44. Элюат пиофилизируют. Получают 49 мл МАе 9-Аг 9-6 у-Ар-МаОН ацетата (1 1), М 5 644. (МН).Пр и м е р 11. Аналогично томугкак зто описано в примере 10. исходя из 1.05 г(2) СЗу-Ар(ОВ 2)/аОВ 2 в 10 мл метанола гидрируют в присутствии катализатора Ро/С. Катализатор отфильтровывают. фильтрат упаривают. Остаток растворяют в 2 мл воды. при помощи 2 н. МаОН доводят до рН 9.5 и смешивают с 109 мг метилацетимидат НСК. Значение рН снова доводят до 9.5. После перемешивания в течение 90 мин реакционную смесь при помощи 1 н. НС подкисляют до рН 4 и хроматографируют 0.2 н. уксусной кислотой на колонке Сефадекс 6255. Однородные фракции объединяют и лиофилизируют. Получают 72 мг (М 2-Вос-М 6-(1