Способ получения соли сульфоаденозил -L-метионина

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОВ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(50) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛИ СУПЬФ 0 АдЕ Н 0 ЗНЛьНЕТИ 0 НИНА(57) Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности. Исходные дрожжи обогащают сульфоаденот зилЬметноннном. Клетки лнзируют. Лизат очищают ультрафильтрацией череамембраны с пределом пор 10000 дальТ 0 Н ПРОПУСКЗЮТ ЧЕРЕЗ КОПОНКУ СО СЛ 8 бокислотной ионообменной смолой. Элюат пропускают через колонку с анберлитом со скоростью 0,2-1,0 объема жидкости в 1 ч на объем смолы и промывают через колонку с амберлитом. Затем промывают раствором дчсульфоноНОЙ КИСЛОТЫ ДО ИСЧЕЗНОВЕНИЕ ЦЕПЕВОГО продукта из эпюата. Раствор подаютв устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессолнвающие мембраны. Полученный раствор высушивают распылением при 100-200 С. Растворимость целевого продукта повышается в 10 раз.Изобретение относится к химикоФармацевтической промышленности и ка сается способа получения вещества общей Формулы сульфоаде озил--метнонин п (СН 1)(503 Н 2) где п 1 до 2,ш 3 до 12.Целью изобретения является повышение растворимости целевого продукта по сравнению с аналогом. П р и м е р 1. Получение 0,2 н. растворов дисульшокислот общей Формулы (СН 1)т(50 Н)1.(210 моль) безводного сульфита натрия и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 дней. Поокончании реакции добавляют 20 л дистиллированной воды и смесь Перего няют до тех пор, пока полностью не удалят спирты. Смесь разбавляют водой до конечного объема 60 л и нагревают до тех пор, пока не происходит полного растворения. 1Полученную двунатриевую соль 1,0 бутандисульфокислоты оставляют кристаллизоваться в течение ночи прн ЬС. Продукт отфильтровывают и промывают 10 л воды, Маточные растворы концентрируют под вакуумом до объема 20 л и оставляют кристаллизовагься в течение ночи при ЦС. Продукт отфильтровывают и промывают д п воды. кристаллическую массу от двух фнльтрований повторно суспендируют в 50 л воды и растворяют в горячих условиях. Раствор оставляют КПЙСТЭЛПИЗОВЭТЬСЯ ВГСЧЕННе НОЧИ ППИ дС. Продукт отшильтровывают И промывают 5 л воды. Натриевун соль бутан цоеш) (э) 21 (61)дисульфокислоты высушивают под вакуумом.Последующую Фракцню продукта попуЧЭЮТ ПУТЕМ КОНЦЕНТПНООВЭНРЯ МЭТОЧНЫХ растворов до 10 л и выдерживания их для кристаллизации в течение ночи при ЦС с последующим отфильтровыванием продукта и сушки его под вакуумом.Таким образом получают 25,2 кг двунатриевой соли-1,д-бутандисульФокислоты, моногидрата (90 моль, 90 ный молярный выход).Готовят колонку, содержащую 200 л смолы АшЬет 11 се 1 К 120, предварительно дКТВИООванной 6 н. раствором НС 1 до тех пор, пока из элюата не исчез ион На и промывают ее дистиллированной водой до тех пор пока из злюата не исчез ион С 1.25,2 кг двунатриевой соли-1,д-бутандисульфокислоты, моногицрата растворяют в 300 л воды и подают в головную часть колонны. Собирают элюат,содержащий 1 Ц-бутандисультокислоту,и колонку промывают водой до тех пор,пока значение рН элюата не достигло Ч. Элюат разбавляют до конечного объе ма 900 л, чтобы получить 0,2 Н. раствор 1 Ц-бутандисульфокислоты, которую используют для получения соответствующей соли сульфоаденозил-Ь-метионина.г 220 л этилацетата и 220 л воды добавляют при окружающей температуреПосле энергичного перемешивания в течение 30 мин добавляют 1000 л ц 0.35 Н. раствора серной кислоты и перемешивание продолжают еще в течение 1,5 ч.Смесь фильтруют через вращающийся Фильтр, который промывают водой, чтобы получить 2800 л раствора, содержащего д,д 0 г/л сульФоаденозил-Ь-метионина, что равно 99,5 от количества,присутствующего в исходном материале.Раствор сульфоадеНозил-Ь-метионинаполученный таким образом (рН 2,5),подают в установку ультрафильтрации,где используют трубчатые мембраны с задержкой 10000.Проникающий поток, прошедший через мембраны, собирают в подходящем сосуде, в то время как концентрат непре рывно рециркупируют до конечного объема 200 л. В этом месте добавляют дистиллированную воду и продолжают ОЕЦИОКУЛНРОВЗНИЕ ДО ТЕХ ПОП, ПОКЭ полностью не экстрагируют сульФоаденозил-Ь-метионин.Получают 3500 л лизата, значение рН которого доводят до рН 5 путем добавления 2 н. раствора МаОН.Готовят колонку, содержащую Ц 00 л смолы АшЬег 11 се СС 50 в Н Форме,которую тщательно промывают дистиллированной водой.Лизат пропускают через колонку смолы со скоростью 800 л/ч, которую поддерживают постоянной в течение всей процедуры.Затем последовательно пропускают д 00 л дистиллированной воды, 3200 л 0,1 моль/л уксусной кислоты и Ц 00 л дистиллированной воды.Сульфоаденозил-Ь-метионин элюируют 800 л 0,2 н. раствора 1 Ц-бутандисульфокислоты. 800 л полученного такии образом элюата содержит приблизительно 10 кг сульфоаденозил-Ь-метионина.Готовят колонку, содержащую 000 л смолы АшЬег 11 се ХА Ц, которую предварительно активируют 800 л 0,1 н. раствора Ыа 0 Н и 800 л 0,1 н. раствора Нд 504 а затем тщательно промывают дистиллированной водой.Ранее полученный раствор сульфоаденозилЬ-метионина пропускают через колонку со скоростью 200 л/ч, причем скорость поддерживают постоянной в течение всего процесса. Затем через нее пропускают ЦОО л 0,02 н. раствора 1 Ц-бутандисульфокислоты. Собирают элюат, содержащий сульФоадеНозил-Ь-метионин (примерно 1000 л,содержащих 10 кг сульфоаденозил-Ьметионина). Раствор, полученный таким образом, подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. В этом устройстве раствор сульфоаденозилЬметионина концентрируют до 80 л, содержащих 9,9 кг сульфоаденозил-Ь-метионина. добавляют 5 л 2 н. раствора 6 утандисульФокислоты. Раствор, полученный таким образом, подают в распыпительную осушитепьную установку, в которую подают воздух при 160 С. Сухой продукт непрерывно выводят их установки.Получают 18 кг порошкообразного продукта, имеющего при анализе следующий состав,Продукт имеет вид кристаллическогс белого порошка, который растворим в воде до 30 вес. с образованием бесцветного раствора и не растворим в ОбЫЧНЫХ ОРГЗНИЧЭСКИХ рЗСТБОрИТеПЯХ.С помощью тонкослойиой хроматографии найдено, что продукт не содержит каких-либо примесей.Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в буфере при рН д) при 258,5 нм с ЕМ 193.Следуют методике примера 2, но используют 1 З-пропандисульфокислоту вместо 1 Н-бутандисульфокислоты.Получают 17,д 5 кг порошка, который при анализе показывает следующий состав,Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес. с образованием бесцветного Раствора и не растворим в обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких примесей.Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в буфере при рН Ц) при 258,5 нм с Е,щ 199. П р и м е р Ч. Получение соли сульФоаденозил-Ьнетионин-15 (15-пентандисульфоната).Следуют методике примера 2, но используют 1 Б-пентандисульфокислоту вместо 1 Ч-бутандисульфокислоты. Получают 18,5 кг порошка, который при анализе показывает следующий состав, 2Продуут имеет Форму кристаллического белого порошка который растворим в воде до 30 вес.2 с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких примесей.(в буфере рН Ч) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е 188П р и м е р 5. Получение соли суль фоаленозил-ЬметионинцБ (,6-гександнсульфоната).Следуют методике примера 2, но используют 1,6 гександисульфокислоту вместо 1 д-бутандисульфокислоты. Получают 19 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, 2соответствующий соли сульФоаденоаилЬ-метионин 15 (1,6 гександисульфо ната). Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес. с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях. Тонкослойная хроматография показы вает, что продукт не содержит никаких примесей.(в буфере рН Ц) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е 182.Следуют методике примера 2, но 1,8-октандисупьфокислоту используют вместо 1,дбутандисульфокислоты. Получают 20 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, 2Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим я воде до 30 вес. с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт свободен от какихлибо примесей.(в буфере рН Ц) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е,732Следуют методике примера 2, но 1,10 декандисульфокислоту используют вместо 1 Ц-бутандисульфокислоты. По лучают 21 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, 2Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 20 вес. с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показы вает, что продукт свободен от какихлибо примесей.(в буфере рН Ц) показывает максимум при 258,5 нм с Е 116 Ц.Положительный ффект заключается в повышении растворимости по сравнению с аналогами, поскольку полученные соединения в 10 раз более растворимы.Способ получения соли сульФаденозил-Ьметионина общей Формулыш т 312,заключающийся в том, что добавляют культуры дрожжей Засслаготусее Сетеч 151 а 1, Тогц 1 орв 1 с ис 1115, Сапа 1 оа ис 111 з к целевому продукту, лизируют.клетки раствора воды и этилацетата при соотношении 11, затем 0,35 н.фильтрацией через мембраны с пределом пор 10000 дальтон, пропускают лизат через колонку со спабокислотной ионообменной смолой в Н-форме при рН 3,57 при скорости пропускания 1-3 объема