Способ получения бруцеллезного диагностического антигена

(71) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Казахской сельскохозяйственной академии(73) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Казахской сельскохозяйственной академии(56) Мельниченко П.П. и др. Сравнительная оценка серологических тестов для диагностики инфекционного эпидимита баранов /Тезисы докладов Всесоюзной конференции Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным. М., 1989, с. 142144Иванов Н.П. Применение ультразвука для приготовления диагностических препаратовиз бруцелл/Меры борьбы с инфекционными, паразитарными и незаразными болезнями сельскохозяйственных животных в Казахстане. Сб. научн. трудов. АлмаАта, 1985, с. 16-26(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ДИАГНОСТИЧЕСКОГО АНТИГЕНА(57) Использование ветеринарная биотехнология, антиген для диагностики бруцеллеза. Сущность изобретения бруцелль 1 вида овис, например Штамм 424/2, выращивают на плотной среде,смывают физ. раствором и доводятдо концентрации 80-100 млрд.кл/мл трис-буфером. Взвесь подвергают воздействию ультразвука мощностью 60 Вт/см 2 при частоте 22 кГц. По окончании дезинтеграции добавляют 20 -ный раствор трихлоруксусной кислоты или соляной кислоты до рН 6,8-7,1 и подвергают автоклавировани 1 о при 1 атм 30 мин. Надосадок используют в качестве аллергена после разведения 11. Осадок доводят до половины первоначального объема буферным раствором и используют в качестве антигена для серологических реакций. Полученный антиген обладает повышенной чувствительностью в вь 1 явлении бруцеллезной инфекции.Изобретение относится к ветеринарии, а именно, к технологии производства антигенов для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных.Известен способ получения антигенов путем обработки клетки микроорганизмов ультразвуком при частоте 0,5-1,5 МГц и интенсивности 5-7 Вт/смз в течение 5-10 мин. Полученный таким образом антитен содержит большое количество липидов и токсинов, снижающих его специфичность.Известен также метод дезинтеграции микроорганизмов ультразвуком при непрерывном движении суспензии в замкнутой системе при частоте 42-50 кГц при амплитуде 60-80 Мкм в течение 13-18 мин.Однако этот способ не обеспечивает высокой серологической активности антигена.Целью изобретения является повышение активности целевого продукта.Эта цель достигается путем ультразвуковой дезинтеграции бруцелл с последующим автоклавированием, центрифугированием взвеси разрушенных клеток и отделением целевого продукта.Способ приготовления аллергена из бруцелл известен.Пример. Бруцеллы вида овис, например шт. 424/2, или другие виды бруцелл, выращенные на плотном аминопептидном или печеночносывороточном агар-агаре, смывают стерильным физиологическим раствором поваренной соли и дважды отмывают им же от остатков питательной среды. Затем доводят до конценграции 80-100 млрд. микробных тел (по бруцеллезному стандарту мутности) 0,02-ньгм раствором трис-буфера или 10 -ным раствором МаОН (трис-буфер готовят следующим образом в мерную колбу на 1 л физиологического раствора МаС 1 вносят 2 г триса и доливают стерильный физиологический раствор до метки 1 л., при этом рН достигает 9-10 другой раствор с рН 9-10 готовят методом добавления в 1 л физиологического раствора 1 мл 10 -ного раствора МаОН 2). Полученную взвесь подвергаютвоздействию ультразвуковых волн (с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 или УЗДН-2 при частоте 22 кГц, мощности 60 Вт/см 2) до просветления в течение 15-29 мин. По окончании дезинтеграции в микробную суспензию добавляют 20 -ньгй раствор трихлоруксусной кислоты или соляной кислоты до рН 6,8-7,1 и подвергают автоклавированию при 1 атм 30 мин. Выпавший после автоклавирования осадок отделяют центрифугированием. Надосадок используют в качестве аллергена после разведения 11, а осадок доводят до половины (1/2) первоначально 161го объема указанными буферными растворами и используют в качестве антигена для РСК, РДСК.Установлено, что полученные описанньпи способом препараты мелкодисперсных белковых частиц обладают способностью вызывать аллергическую реакцию организма животных, а крупнодисперсные белковые частицы могут использоваться в качестве антигена, обладающего повышенной чувствительностью в выявлении бруцеллезной инфекции.Срок годности готового препарата антигена не менее 1 года.Активность и специфичность полученного описанным способом антигена была проверена в лабораторных и производственных условиях.Результаты опытов приведены в табл.1 и 2.По данным табл.1 видно, что тигры испытуемого антигена выше на одно разведение, чем у биофабричного препарата. В силу этого испьгтуемый антиген более активен по сравнению с биофабричньгм препаратом, Использование в качестве сырья осадка дезинтеграта при получении антигена для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных позволяет экономить в год до 100 тыс. руб.Далее была проведена проверка сывороток крови животных на эпидидимит антигенами биофабричным овисным и испытуемым в РДСК. Результаты исследования приведены в табл.2.Из данных табл.2 видно, что антиген, полученный из осадка при изготовлении аллергена,более активен, чем антиген биофабричный овисный для РДСК.Полученные при этом данные указывают на высокую активность и специфичность антигена в серологических реакциях, что позволяет дополнительно выявлять по 20 и более процентов больных бруцеллезом сельскохозяйственных животных.Для подтверждения полученных данных проведен убой 3 овец две овцы (Не 0375, Не 0355), реагировавших на изготовленный антиген,и одна (Не 0348), реагировавшая на оба антигена. При этом выделена овисная культура у всех 3-х овец, что подтверждает высокую чувствительность указанного препарата.Способ получения бруцеллезного диагностического антигена путем ультразвуковой дезинтеграции бруцелл с последующим автоклавированием, центрифугированием взвеси разрушенных клеток и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, отделение целевого продукта проводят из осадка.Сравнительная оценка активности антигена овисного для РДСК биофабричного с антигеном овисным, полученным из осадка после автоклавирования ДезинтегрантаРезультаты проверки сывороток крови баранов антигенами испытуемым и извест НЪПМиспытуемый антиген биофабричный антиген