Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ВТ2-12 для получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых сельскохозяйственных культур

(51) 12 1/20 (2006.01) 01 63/00 (2006.01) 12 15/20 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Штамм бактерий.2-12 для получения биопрепарата против яблонной моли. Предложенный штамм выделен из яблонной моли., найденном в Юго-восточном Казахстане. Обладает высокой биологической активностью в отношении гусениц чешуекрылых насекомыхвредителей. При титре спор 1108 штамм ВТ 2-12 на гусеницах яблонной моли и листовертки показал 9598-ю смертность.(72) Сагитов Абай Оразулы Дуйсембеков Бахытжан Алишерович Успанов Алибек Маратович Слямова Назира Дусупкановна Адилханкызы Айнура Макаров Евгений Михайлович Баймагамбетов Едилбай Жакенович Туреханова Жадыра Ихтияркызы(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений(54) ШТАММ БАКТЕРИЙВТ 2-12 ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ НАСЕКОМЫХ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты растений от насекомых представляющий собой новый штамм бактерий для получения вышеуказанного средства. Известен штамм бактерий 2127-3 к для получения биопрепарата против вредных насекомых (Каменек Л.К. Способ получения бактериального энтомопатогенного препарата. - Пат. России 2062577, 1996). Этот штамм имеет невысокое содержание эндотоксина(10-20) и мало приспособлен к условиям сухого континентального климата Казахстана. Известен типовой штамм. , входящий в состав препарата лепидоцида производства Бердского химзавода(Волкотруб Э.Н. и др. Новая препаративная форма лепидоцида // Экол. безопас. и беспестицид. технол. получ. растениевод. продукции. Матер. Всерос. Науч.-произв. Совещ. Краснодар, 24-26 авг. 1994. Ч. 2. Пушкино. С.204-205). Лепидоцид известен также под названиями Битиплекс (Дельта),Битобациллин, Томелин, Бактоспеин, Новодор ,др. Однако активность его недостаточно высока. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в отношении насекомых, в частности, чешуекрылых. Листовертка., семейство, вредители плодовых культур. Имеет в Казахстане повсеместное распространение и наносит существенный вред. Географическое распространение Обитает в Европе, Сев. Африке, Малой Азии, Ближнем Востоке, Иране, Ираке, Сев. Америке. В б. СССР распространена по всей европейской части, в Закавказье, Ср. Азии (предгорья), Казахстане, на Урале, юге Сибири (локально), на Дальнем Востоке. Завезена на Дальний Восток и в Америку. Морфология и биология. Передние крылья имаго от охряно-желтой до серо- и темно-коричневой окраски (размах крыльев 15-22 мм). Передний край со слабым изгибом у вершины. Вершинный угол острый. Самцы имеют четкий рисунок темно-бурого цвета прикорневое пятно ромбической формы,косая срединная перевязь, предвершинное и внешнекрайнее пятна слиты. У самок рисунок сильно размыт и едва заметен. Задние крылья коричнево-серые, у самок с ярким оранжевожелтым опылением у вершины крыла. Яйца удлиненно-овальные, серо-зеленые. Гусеница 1820 мм, от светло-зеленой до темно-оливковозеленой окраски, полупрозрачная. Куколка (1012 мм) веретеновидная, желтовато-коричневая с более темной спинкой. Она располагается в комках из листьев или в сигарах, свернутых вдоль главной жилки листа. Средняя плодовитость 250 яиц,потенциальная до 430. Гусеницы 1-2 возрастов выгрызают почки и бутоны, затем, переходя на цветки, уничтожают тычинки, пестики и лепестки, а также скелетируют молодые листья. Гусеницы старших возрастов повреждают завязи и плоды,выгрызая в мякоти ямки неправильной формы,2 достигающие иногда семенной камеры или косточки. Продолжительность развития гусениц 2560 дней. Окукливание происходит в местах питания. В зависимости от температуры стадия куколки длится 8-14 дней. Яблонная моль.,семейство горностаевые моли, является вредителем яблонной моли в промышленной зоне садоводства Казахстана, имеет повсеместное распространение и наносит существенный вред, развивается в 1 поколении. Географическое распространение Обитает в центральной части и на юге Западной Европы. В СССР исходный (анцестральный) ареал ограничен европейской частью моль интродуцирована в Закавказье, Казахстан, Среднюю Азию. Морфология и биология. Передние крылья белые с 12-16 черными точками, расположенными тремя неправильными рядами, на вершине крыльев имеются мелкие черные крапинки (размах крыльев 16-22 мм). Внешне похожа на имаго плодовой моли. . Яйцо желтоватое, сплюснутое,удлиненно-овальное. Гусеницы - возрастов светло-желтые с темными головой, переднегрудным щитком и грудными ногами гусеницывозраста желтые длина гусеницы последнего возраста 1316 мм. Куколка вначале оранжево-желтая, позже зеленовато-желтая, голова темно-бурая. Коконы белые, плотные. Плодовитость бабочки - до 150 яиц. Самка откладывает яйца группами (по 15-60 шт.) черепицеобразно на ветки кормового растения вблизи почек и покрывает их щитком из застывшей слизи. Вначале щитки красноватой окраски, позднее буреют. Яйца развиваются 8-15 дней. Гусеницы,выйдя из-под щитка, проникают в набухшие почки,затем минируют вершинную часть листочков. После первой линьки (через 10-12 дней) они покидают мины и переходят к открытому образу жизни. Гусеницы плетут паутинные гнезда, скрепляя попарно листья питаясь, обгрызают листовую пластинку или полностью объедают листья до основных жилок. С переходом на соседние ветки образуются колонии шелковинных гнезд,вмещающие до 200-300 гусениц. Длительность личиночной стадии составляет (с зимовкой) от 300 до 320 дней, а период активного развития весной 37-45 дней. Продолжительность развития куколки 815, иногда до 20 дней. Окукливаются в белых плотных, непрозрачных коконах, склеенных в компактные пачки, содержащие от нескольких десятков до нескольких сотен коконов..( серотип) 2-12 Казахского научно-исследовательского института защиты и карантина растений, Казахстан и Института систематики и экологии животных СО РАН, Россия. Выращивается на мясопептонном агаре (МПА),рыбном агаре при температуре 28 С, Селекция - по инсектицидной активности. Выделение - по А.Г. Кольчевскому и др. Выделение и отбор высокоактивных культурМетод. Пособие. Л. 1987, 21 с. Определение вида - по де Баржак и Фрахон (Н.Е., , 1990, . 35,. 233). ЛК 50 - (инсектицидная активность, т.е. концентрация, вызывающая гибель на 3-и сутки 50 гусениц) Выделен из яблонной моли., найденном в Юго-восточном Казахстане. Время полного спорообразования - 5 суток. Возбудитель бактериоза яблонной моли имеет следующие характеристики Культурально-морфологические свойства кристаллообразующих изолятов. При росте на питательном агаре бактерии представляли -форму,колонии амебовидные, реже неправильной формы с волнистым краем, бежевые, матовые, прозрачные. Размер колонии 10 мм. Консистенция пастообразная(фиг.1). Фиг.1 - Макросъемка (колония) штамма ВТ 2-12 бактерии.Микроскопический анализ. Штамм образует эллиптические споры и кристаллы ромбовидной формы размером (0,4-0,6) 1,4 мкм (фиг.2). Фиг.2 - Микросъемка (кристаллы) штамма ВТ 2-12 бактерии.Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность). Принадлежит к 4-му классу опасности для теплокровных животных. Биологическая активность на тест-объектах. Тест-объектом служили гусеницы - возрастов листовертки и яблонной моли. В лабораторных условиях гусениц скармливали листьями излюбленных деревьев,повторность четырехкратная, в каждой по 10 особей гусениц. Листья скармливаемых растений предварительно обрабатывали спорокристалической суспензией бактерий. В качестве эталона берется вариант с типовым штаммом 2127-3 к В. ., имеющийся в коллекции культур Института. Опыт проводится в четырех повторностях при 20-25 С. Полевое испытание штамма ВТ 2-12 проведены в яблоневом саду КазНИИЗиКР. Эталоном служил типовой шт. 2127-3 к. Использовали одну концентрацию бактерий в четырех повторностях. Ветки деревьев с гнездами гусениц опрыскивали из пульверизатора с расходом суспензии по 15 мл на 10 см ветки. В контроле опрыскивание проводили водопроводной водой. Результаты проведенных лабораторных экспериментов направленных на оценку биологической эффективности штамма 2-12 в отношении гусениц розанной листовертки и яблонной моли при использовании титра спор 1108 приведены в таблице 1. Таблица 1 Биологическая эффективность штамма 2-2 на гусеницах чешуекрылых Штамм ВТ 1-12 2127-3 к Контроль Общий процент гибели гусениц в среднем на 5 сутки листовертка яблонная моль 95,02,8 98,02,5 100 97,52,5 0 0 Как видно из таблицы, при титре спор 1108 штамм ВТ 2-12 на гусеницах листовертки и яблонной моли показал высокую смертность - 95,0 и 98,0,соответственно. Результаты проведенных полевых испытаний штамма 2-12 направленных на оценку биологической эффективности штамма в отношении к гусеницам листовертки и яблонной моли при использовании титров спор 11010 показали высокую вирулентность - 90-95 (таблица 2). Таблица 2 Биологическая эффективность штамма ВТ 2-12 на гусеницах чешуекрылых Штамм ВТ 1-12 2127-3 к Контроль Общий процент гибели гусениц в среднем на 5 сутки листовертка яблонная моль 90,05,0 95,02,5 100 100 0 0 Таким образом, лабораторные и полевые испытания показали высокую активность штамма 2-2. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий., депонированный в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, под регистрационным номером ВТ 2-12,используемый для получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых сельскохозяйственных культур. 3