Штамм бактерий Bacillus thuringiensis Xc-08/р для получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых сельскохозяйственных культур

(51) 12 1/20 (2012.01) 01 63/00 (2012.01) 12 15/20 (2012.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ НАСЕКОМЫХ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР(57) Штамм бактерий.-08/ для получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых. Предложенный штамм выделен из хлопковой совки, в Южном Казахстане. Обладает высокой биологической активностью в отношении гусениц чешуекрылых насекомыхвредителей. При титре спор 11010 штамм Хс-08/р на гусеницах листовертки и яблонной моли показал 90-ую смертность. Высокая смертность насекомых происходила также при титре спор 1108 - 95,0 и 92,5.(72) Сагитов Абай Оразулы Дуйсембеков Бахытжан Алишерович Слямова Назира Дусупкановна Адилханкызы Айнура Баймагамбетов Едилбай Жакенович Гибадат Ершат(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты растений от насекомых представляющий собой новый штамм бактерий для получения вышеуказанного средства. Известен штамм бактерий-52 для получения биопрепарата против вредных насекомых (Каменек Л.К. Способ получения бактериального энтомопатогенного препарата. - Пат. России 2062577, 1996). Этот штамм имеет невысокое содержание эндотоксина(10-20) и мало приспособлен к условиям сухого континентального климата Казахстана. Известен типовой штамм. , входящий в состав препарата лепидоцида производства Бердского химзавода(Волкотруб Э.Н. и др. Новая препаративная форма лепидоцида // Экол. безопас. и беспестицид, технол. получ. Растениевод. продукции. Матер. Всерос. Науч.-произв. Совещ. Краснодар, 24-26 авг. 1994. Ч.2. Пушкино. с. 204-205). Лепидоцид известен также под названиями Битиплекс (Дельта),Битобациллин, Гомелин, Бактоспеин, Новодор ,др. Однако активность его недостаточно высока. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в отношении насекомых, в частности, чешуекрылых. Листовертка., семейство, вредители плодовых культур. Имеет в Казахстане повсеместное распространение и наносит существенный вред. Географическое распространение Обитает в Европе, Сев. Африке, Малой Азии, Ближнем Востоке, Иране, Ираке, Сев. Америке. В б. СССР распространена по всей европейской части, в Закавказье, Ср. Азии (предгорья), Казахстане, на Урале, юге Сибири (локально), на Дальнем Востоке. Завезена на Дальний Восток и в Америку. Морфология и биология. Передние крылья имаго от охряно-желтой до серо- и темно-коричневой окраски (размах крыльев 15-22 мм). Передний край со слабым изгибом у вершины. Вершинный угол острый. Самцы имеют четкий рисунок темно-бурого цвета прикорневое пятно ромбической формы,косая срединная перевязь, предвершинное и внешнекрайнее пятна слиты. У самок рисунок сильно размыт и едва заметен. Задние крылья коричнево-серые, у самок с ярким оранжево-желтым опылением у вершины крыла. Яйца удлиненноовальные, серо-зеленые. Гусеница 18-20 мм, от светло-зеленой до темно-оливково-зеленой окраски,полупрозрачная. Куколка (10-12 мм) веретеновидная,желтовато-коричневая с более темной спинкой. Она располагается в комках из листьев или в сигарах,свернутых вдоль главной жилки листа. Средняя плодовитость 250 яиц, потенциальная до 430. Гусеницы 1-2 возрастов выгрызают почки и бутоны,затем, переходя на цветки, уничтожают тычинки,пестики и лепестки, а также скелетируют молодые листья. Гусеницы старших возрастов повреждают завязи и плоды, выгрызая в мякоти ямки неправильной формы,достигающие иногда 2 семенной камеры или косточки. Продолжительность развития гусениц 25-60 дней. Окукливание происходит в местах питания. В зависимости от температуры стадия куколки длится 8-14 дней. Яблонная моль.,семейство горностаевые моли, является вредителем яблонной моли в промышленной зоне садоводства Казахстана, имеет повсеместное распространение и наносит существенный вред, развивается в 1 поколении. Географическое распространение Обитает в центральной части и на юге Западной Европы. В СССР исходный (анцестральный) ареал ограничен европейской частью (на севере до Ленинградской обл.) моль интродуцирована в Закавказье,Казахстан, Среднюю Азию. Морфология и биология. Передние крылья белые с 12-16 черными точками, расположенными тремя неправильными рядами, на вершине крыльев имеются мелкие черные крапинки (размах крыльев 16-22 мм). Яйцо желтоватое,сплюснутое,удлиненно-овальное. Гусеницы - возрастов светло-желтые с темными головой, переднегрудным щитком и грудными ногами гусеницывозраста желтые длина гусеницы последнего возраста 1316 мм. Куколка вначале оранжево-желтая, позже зеленовато-желтая, голова темно-бурая. Коконы белые, плотные. Плодовитость бабочки - до 150 яиц. Яйца развиваются 8-15 дней. Гусеницы плетут паутинные гнезда, скрепляя попарно листья питаясь, обгрызают листовую пластинку или полностью объедают листья до основных жилок. С переходом на соседние ветки образуются колонии шелковидных гнезд, вмещающие до 200-300 гусениц. Длительность личиночной стадии составляет (с зимовкой) от 300 до 320 дней, а период активного развития весной - 37-45 дней. Продолжительность развития куколки 8-15, иногда до 20 дней..Хс-08/р Казахского научно-исследовательского института защиты и карантина растений, Казахстан. Выделен из хлопковой совки, в Южном Казахстане. Выращивается на мясопептонном агаре (МПА),рыбном агаре при температуре 28 С. Селекция - по инсектицидной активности. Время полного спорообразования - 5 суток. Выделение - по А.Г. Кольчевскому и др. Выделение и отбор высокоактивных культурМетод. Пособие. Л.1987, с 21. Определение вида - по де Баржак и Фрахон (Н.Е., , 1990, . 35, . 233). Возбудитель бактериоза хлопковой совки имеет следующие характеристики Культурально-морфологические свойства кристаллообразующих изолятов. При росте на питательном агаре бактерии представляли -форму,колонии округлой, реже неправильной формы с волнистым краем, серовато-бежевые, матовые,прозрачные. Размер колонии 15-20 мм. Консистенция пастообразная. Микроскопический анализ. Штамм образует эллиптические споры и кристаллы овальной и ромбовидной формы. Биохимические свойства. Образует ацетилметилкарбинол, лецитоветеллиновая реакция положительна. Не образует уреазу. Гидролизует крахмал. Образует кислоту с салицином. Гидролизирует эскулин. Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность). Принадлежит к 4-му классу опасности для теплокровных животных. Биологическая активность на тест-объектах. Тест-объектом служили гусеницы - возрастов листовертки и яблонной моли. В лабораторных условиях гусениц скармливали листьями излюбленных деревьев,повторность четырехкратная, в каждой по 10 особей гусениц. Листья скармливаемых растений предварительно обрабатывали спорокристалической суспензией бактерий. В качестве контроля берется вариант с типовым штаммом -52 В. ., имеющийся в коллекции культур Института. Опыт проводится в четырех повторностях при 20-25 С. Полевое испытание штамма Хс-08/р проведены в яблоневом саду КазНИИЗиКР. Эталоном служил типовой шт.-52. Использовали одну концентрацию бактерий в четырех повторностях. Ветки деревьев с гнездами гусениц опрыскивали из пульверизатора с расходом суспензии по 15 мл на 10 см ветки. В контроле опрыскивание проводили водопроводной водой. Результаты проведенных лабораторных экспериментов направленных на оценку биологической эффективности штамма Хс-08/р в отношении гусениц розанной листовертки и яблонной моли при использовании титра спор 1108 приведены в таблице 1. Таблица 1 Биологическая эффективность штамма Хс-08/р на гусеницах чешуекрылых Общий процент гибели гусениц в среднем на 5 сутки листовертка яблонная моль 95,03,0 92,54,7 59,08,3 56,05,6 0 0 Как видно из таблицы, при титре спор 1108 штамм Хс-08/р на гусеницах листовертки и яблонной моли показал высокую смертность - 95,0 и 92,5, соответственно. Смертность типовым штаммом была в 1,5 и 1,6 раз ниже соответственно. Результаты проведенных полевых испытаний штамма Хс-08/р и -52 направленных на оценку биологической эффективности штаммов в отношении к гусеницам листовертки и яблонной моли при использовании титров спор 11010 показали высокую вирулентность - 90, тогда как активность типового штамма -52 составила 58,0 и 60,0 гибели насекомых (таблица 2). Таблица 2 Биологическая активность штамма Хс-08/р на гусеницахвозраста различных чешуекрылых Штамм Хс-08/р Общий процент гибели гусениц в среднем на 5 сутки листовертка яблонная моль 905,7 90,07,5 60,09, 9 58,05,4 0 0 Таким образом, лабораторные и полевые испытания показали высокую активность штамма Хс-08/р. регистрационным номером В РКМ-0432, для получения биопрепарата против чешуекрылых насекомых сельскохозяйственных культур. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий-08/р,депонированный в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов КН МОН РК, под