Способ получения комплемента

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к иммунологии и серологии,в частности,к производству комплемента, используемого в качестве компонента при постановке реакции связывания комплемента. Способ получения комплемента включает взятие крови у морских свинок, отделение сыворотки, при этом предварительно за 7-10 дней до взятия крови вводят бета-каротин в дозе 10-20 на 1 кг живой массы тела. Предложенный способ позволяет получить сыворотку морских свинок, с высоким содержанием комплемента.(72) Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович(56) Практикум по ветеринарной микробиологии. М., Агропромиздат, 1989, с.126 Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования.М. Медицина, 1973, с.141-142686732, кл. А 61 К 35/14, 2005626778, кл. А 61 К 35/16, 2005 17528 Изобретение относится к иммунологии и серологии, в частности, к производству комплемента, используемого в качестве компонента при постановке реакции связывания комплемента. Известен способ получения комплемента путем взятия крови у морских свинок, отделением сыворотки и получением комплемента (Практикум по ветеринарной микробиологии. М. Агропромиздат, 1989, с. 126). Недостатком способа является то, что содержание комплемента в сыворотке крови, не всегда высокое, что снижает эффективность способа. Задачей изобретения является разработка способа получения комплемента, обеспечивающего повышение содержания комплемента в сыворотки крови. Способ получения комплемента, используемого в качестве компонента при постановке реакции связывания комплемента включает взятие крови у морских свинок и отделение сыворотки, при этом предварительно за 7-10 дней до взятия крови морским свинкам вводят бета-каротин в дозе 10-20 на 1 кг живой массы тела. Способ получения комплемента осуществляется следующим образом. В качестве доноров использовали морских свинок массой 350-800 г. Взятие крови объемом 414 м 3 проводили из сердца, в зависимости от массы донора. Средний объем кровопускания составляет 8 см 3. Выход комплемента составляет 50-52 . Для исследования были взяты две группы морских свинок, по 25 голов в каждой. Опытной группе за 7-10 дней до кровопускания вводили путем подкожной инъекции бета-каротин в дозе 20 на 1 кг живой массы. Взятие крови, отделение сыворотки и получение комплемента проводили по общепринятой методике. При титрации комплемента использовали свежеполученную сыворотку морских свинок. Комплемент (сыворотку морской свинки) разводили в соотношении 110 в физиологическом растворе и разливали в пробирки в различных объемах. Затем объем каждой пробирки доводили до 1,5 см 3 физиологическим раствором (вместо недостающих компонентов - сыворотки и антигена). Штатив с пробирками помещали в термостат на 45 минут, после чего во все пробирки, с разведением комплемента, прибавляли по 1 см 3 гемолитической системы (смесь гемолитической сыворотки и эритроцитов барана, выдержанную в 30 минут термостате). Через 45 минут учитывали результат. Пробирки 11 и 12 при данном титровании служили контролем, указывающим на то, что комплемент без гемолитической сыворотки (пробирка 11) и гемолитическая система без комплемента (пробирка 12) гемолиза не вызывают. Титр комплемента - это минимальное его количество, в присутствии которого происходит полный гемолиз эритроцитов под воздействием гемолитической сыворотки. Схема титрации приведена в таблице. Таблица Схема титрации комплементапроб Термостат 37 С - 45 минут Учет результатов В результате учета результатов титрации комплемента морских свинок было установлено, что средний титр комплемента был выше у животных опытной группы и составил в среднем 0,05, тогда как у животных контрольной группы в среднем составил 0,1. При производственном испытании было получено несколько серий активного комплемента,соответствующего стандарту титра,при недостаточном титре у животных контрольной группы. При этом, согласно регламенту, серию сыворотки сливают в бутыль, куда добавляется 524 (химически чистый), 4 борной кислоты,тщательно перемешивают, бутыль помещают в холодильную камеру и выдерживают в ней в течение 20 ч при 2-4 С. Полученный комплемент разливают по 1 см 3 в стерильные ампулы из нейтрального стекла емкостью 6 см 3, и каждую ампулу закрывают стерильной ватной пробкой. После этого производят лиофильное высушивание,запайку ампул и прочие операции известным способом. Предложенный способ обеспечивает повышение содержания комплемента в сыворотке крови. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения комплемента, используемого в качестве компонента при постановке реакции связывания комплемента, включающий взятие крови у морских свинок и отделение сыворотки,отличающийся тем, что предварительно за 7-10 дней до взятия крови морским свинкам вводят бетакаротин в дозе 10-20 на 1 кг живой массы тела.