Способ получения комплемента

(51) 61 35/16 (2006.01) 61 39/395 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ комплемента, используемого в качестве компонента при постановке реакции связывания комплемента. Способ получения комплемента путем взятия крови у морских свинок, отделением сыворотки и получением комплемента, при этом за 7-10 дней до крововзятия,вводят тривитамин(комплекс витаминов А, Д, Е) и 1 раствор аскорбиновой кислоты (витамин С) в дозе по 0,1 см 3 на 1 кг живой массы. Предлагаемый способ позволяет получить сыворотку морских свинок с высоким содержанием комплемента.(72) Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович, Иванов Николай Петрович , Хусаинов Дамир Микдатович(56) Практикум по ветеринарной микробиологии. М. Агропромиздат, 1989, с.126 20483 Изобретение относится к иммунологии и серологии,в частности к производству комплемента, используемого в качестве компонента при постановке серологических реакций с его участием. Известен способ получения комплемента путем взятия крови у морских свинок, отделением сыворотки и получением комплемента. (Практикум по ветеринарной микробиологии,М.,Агропромиздат, 1989, с. 126). Недостатком способа является то,что содержание комплемента в сыворотке крови, не всегда высокое, особенно в зимне-весенний период,что снижает эффективность способа. Задачей изобретения является разработка более эффективного способа получения комплемента. Цель достигается путем стимуляции у морских свинок выработки комплемента путем введения за 7-10 дней до кровопускания тривитамина(комплекса витаминов А, Д, Е) и 1 раствора аскорбиновой кислоты (витамина С) в дозе по 0,1 см 3 на 1 кг живой массы, с последующим взятием крови и отделением сыворотки. В качестве доноров использовали морских свинок массой 350-800 г. Кровопускание объемом 510 см 3 проводилось из сердца, в зависимости от массы донора. Средний объем кровопускания составляет 7 см 3. Выход комплемента составляет 4850 от объема взятой крови. Для исследования были взяты две группы морских свинок, по 30 голов в каждой. Опытной группе за 7-10 дней до кровопускания вводили путем подкожной инъекции тривитамин (комплекс витаминов А, Д, Е) и 1 раствор аскорбиновой кислоты (витамин С) в дозе по 0,1 см 3 на 1 кг живой массы. Взятие крови, отделение сыворотки и получение комплемента проводили по общепринятой методике. При титрации комплемента использовали свежеполученную сыворотку крови морских свинок. Комплемент (сыворотку крови морской свинки) разводили 110 (1 см 3 сыворотки 9 см физиологического раствора) и разливали в пробирки в различных объемах (0,02 0,04 0,06 0,080,2). Затем объем каждой пробирки доводили до 0,6 см физиологическим раствором (в первую - 0,58 вторую - 0,56, третью - 0,54, четвртую - 0,52,десятую - 0,4 см 3). После этого вливали гемосмесь(смесь гемолитической сыворотки и эритроцитов барана, выдержанную в термостате (30 минут) в объеме 0,4 см 3. Штатив с пробирками помещали в термостат на 45 минут. По истечении указанного времени учитывают результат. Пробирки 11 и 12 при данном титровании служат контролем,указывающим на то, что комплемент без гемолитической сыворотки (пробирка 11) и гемолитическая система без комплемента (пробирка 12) гемолиза не вызывают. Титром комплемента называется минимальное его количество, в присутствии которого происходит полный гемолиз эритроцитов, сенсибилизированных гемолитической сывороткой. Схема титрации приведена в таблице. В результате учета результатов титрации комплемента морских свинок, было установлено,что средний титр комплемента был выше у животных опытной группы и составил в среднем 0,08, тогда как у животных контрольной группы в среднем составил 0,14. При производственном испытании было получено несколько серий активного комплемента,соответствующего стандарту титра,при недостаточном титре у животных контрольной группы. При этом согласно регламенту, серию сыворотки сливают в бутыль, куда добавляется 5 24 (химически чистый), 4 борной кислоты,тщательно перемешивают, бутыль помещают в холодильную камеру и выдерживают в ней в течение 20 ч при 2-4 С. Полученный комплемент разливают по 1 см 3 в стерильные ампулы из нейтрального стекла емкостью 5,0 см 3, и каждую ампулу закрывают стерильной ватной паутинкой. После этого производят лиофильное высушивание,запайку ампул и прочие операции осуществляют известным способом. Таблица Термостат 37 С - 45 минут Учет результатов 2 20483 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения комплемента, используемого в качестве компонента при постановке реакции связывания комплемента, включающий взятие крови у морских свинок, отделение сыворотки и получение комплемента, отличающийся тем, что предварительно (за 5-10 дней) морским свинкам вводят тривитамин (комплекс витаминов А, Д, Е) и 1 раствор аскорбиновой кислоты (витамин С) в дозе по 0,1 см 3 на 1 кг живой массы.