Способ изготовления вакцины против бруцеллеза животных

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ панкреатический гидролизат гороха и сои,панкреатический гидролизат казеина,сухой дрожжевой же факт, цистин, твин-80 и пропинол В 400, осуществляют глубинное культивирование бруцелл штамма 82, а на выращенные бруцеллы сорбируют бруцеллезный фаг ТБ из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку. Для глубинного культивирования используют питательную среду следующего состава об.перевар Хоттингера 20-25 сыворотка крупного рогатого скота 0,2-0,3 панкреатический гидролизат гороха и сои 3-5 натрий хлористый 0,2-0,4 панкреатический гидролизат казеина 4-5 твин-80 0,05 глюкоза 0,2-0,4 пептон ферментативный 0,05-0,1 цистин 0,05-0,1 сухой дрожжевой экстракт 0,5-1,0 пропинол Б-400 0,1 дистиллированная вода остальное. Преимуществом предлагаемого способа является повышение производительности,снижение себестоимости,повышение иммуногенности вакцины.(72) Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано при промышленном производстве живых вакцин против бруцеллеза животных. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза животных включает приготовление питательной среды, ее стерилизацию, внесение посевного материала из бруцеллезного штамма 82 с последующим культивированием, фасовкой и лиофилизацией, в питательную среду дополнительно вносят 17524 Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано при промышленном производстве живых вакцин против бруцеллеза животных. Известен способ изготовления живой вакцины против бруцеллеза животных, включающий приготовление питательной среды, ее стерилизацию,внесение посевного материала из бруцеллезного штамма 82 с последующим культивированием, фасовкой и лиофилизацией(Ветеринарные препараты. Под ред. Осидзе Д.Ф. М. 1981, с.178). Недостатком существующего способа является невысокая активность получаемой вакцины, высокая себестоимость и низкая производительность. Задачей изобретения является разработка способа получения вакцины против бруцеллеза животных, обеспечивающего повышение иммуногенности вакцины, повышение производительности и снижение себестоимости вакцины. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза животных включает приготовление питательной среды, ее стерилизацию, внесение посевного материала из бруцеллезного штамма 82 с последующим культивированием, фасовкой и лиофилизацией, при этом в питательную среду дополнительно вносят панкреатический гидролизат гороха и сои, панкреатический гидролизат казеина,сухой дрожжевой же факт, цистин, твин-80 и пропинол В-400,осуществляют глубинное культивирование бруцелл штамма 82, а на выращенные бруцеллы сорбируют бруцеллезный фаг ТБ из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку. Для глубинного культивирования используют питательную среду следующего состава об.перевар Хоттингера 20-25 сыворотка крупного рогатого скота 0,2-0,3 панкреатический гидролизат гороха и сои 3-5 натрий хлористый 0,2-0,4 панкреатический гидролизат казеина 4-5 твин-80 0,05 глюкоза 0,2-0,4 пептон ферментативный 0,05-0,1 цистин 0,05-0,1 сухой дрожжевой экстракт 0,5-1,0 пропинол Б-400 0,1 дистиллированная вода остальное. Пример 1. Приготовление вакцины против бруцеллеза. Сухую культуру штамма .82 засевают на эритрит-агар и культивируют в течение 48 ч при температуре 37-38 С. Далее засевают в биоферментеры из расчета 5-10 млрд микробных клеток на 1,0 см 3 жидкой питательной среды. Культивируют 24-36 ч при температуре 37-38 С,поддержании растворенного кислорода на уровне 20-40 см 3/час, рН 6,8-7,1, перемешивании при 200300 об/мин. Питательная среда имеет следующий состав об.2 перевар Хоттингера 20-25 панкреатический гидролизат гороха и сои 3-5 панкреатический гидролизат казеина 4-5 пептон ферментативный 0,05-0,1 сухой дрожжевой экстракт 0,5-1,0 сыворотка крови крупного рогатого 0,2-0,3 скота натрий хлористый 0,2-0,4 твин-80 0,05 глюкоза 0,2-0,4 цистин 0,05-0,1 пропинол Б-400 0,1 дистиллированная вода остальное. Выход бруцелл составил 450-500 млрд микробных клеток с 1 см 3 питательной среды. Сокращение времени на концентрирование вакцины достигается использованием в качестве вспомогательного вещества натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы ( КМЦ) в оптимальной концентрации 0,2-0,3 от общей массы. Кроме того, осаждение бактериальной массы осуществляют непосредственно в реакторе при температуре 15-20 С в течение 48-72 ч при рН 6,8-7,1. После осаждения бактериальную массу разводят до концентрации 100 млрд микробных клеток в 1,0 см 3 и на бруцеллах адсорбируют бруцеллезный фаг (фаг ТБ) из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку. Далее к вакцине добавляют сахарозо-желатиновую среду высушивания 11, разливают вакцину в ампулы или флаконы, подвергают лиофильной сушке, запаивают ампулы (укупоривают флаконы),этикетируют и упаковывают. На всех стадиях способа изготовления вакцины осуществляется биологический контроль на стерильность и специфичность культуры. Реализуемый биопрепарат также проверяется на чистоту,иммуногенность, безвредность и на выживаемость. Преимуществом предлагаемого способа является повышение производительности, снижение себестоимости, повышение качества и удлинение сроков хранения сухой вакцины,повышение иммуногенности. Пример 2. Иммуногенные свойства вакцины проверяют в опытах на морских свинках. С этой целью морским свинкам (10 голов) массой 300-400 г вводят подкожно в паховую область взвесь вакцинного штамма 82 в дозе 4 млрд микробных клеток по оптическому стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича в объеме 1,0 см 3. Иммунизированных свинок через 30-60 суток заражают 5-10 минимальными инфицирующими дозами вирулентной культуры бруцелл вида абортус 54. Суспензию вирулентного штамма бруцелл вводят под кожу в области паха со стороны, противоположной месту введения вакцинной культуры бруцелл. Одновременно заражают 15 контрольных (невакцинированных) свинок в той же дозе. Через 35-40 суток после заражения свинок убивают и проводят бактериологические высевы из паховых, подчелюстных, шейных, параортальных 17524 лимфатических узлов, печени, селезенки, почки и костного мозга. При этом используют 1 пробирку с бульоном и две с агаром для каждого из 10 объектов и помещают на 15 суток в термостат при 37-38 С для инкубирования. Посевы просматривают на рост микрофлоры трижды первый раз через 1 неделю,второй раз через 2 недели, и третий раз через 3-4 недели. Препарат считают иммуногенным, если он предохраняет не менее 70 вакцинированных морских свинок. В случае заражения более 30 морских свинок, проверку иммуногенных свойств повторяют. Если при повторном контроле иммунных животных окажется менее 70 , то такую вакцину бракуют. Результаты опыта, приведенные в табл. 3,свидетельствуют о высоких иммуногенных свойствах заявленной вакцины. Таблица 1 Сравнительный состав используемой и предложенной питательной среды для глубинного культивирования шт. .82 Используемая питательная среда,Перевар Хоттингера 20,0-25,0 Сыворотка крупного рогатого скота 0,8-1,2 Глюкоза 0,8-1,2 Глицерин 0,8-1,2 Натрий хлористый 0,4-0,6 Гепатопептон 0,2-0,3 Дистиллированная вода до 100 Предлагаемая питательная среда,Перевар Хоттингера 20-25 Панкреатический гидролизат гороха и сои 3-5 Панкреатический гидролизат казеина 4-5 Пептон ферментативный 0,05-0,1 Сухой дрожжевой экстракт 0,5-1,0 Сыворотка крупного рогатого скота 0,2-0,3 Натрий хлористый 0,2-0,4 Твин-80 0,05 Глюкоза 0,2-0,4 Цистин 0,05-0,1 Пропинол Б-400 0,1 Дистиллированная вода остальное Таблица 2 Сравнительные данные по способам изготовления живой сухой вакцины из штамма .82 Существующий способ Предложенный способ По составу питательной среды Ветеринарные препараты. Под ред. Осидзе Д.Ф. М 1981, с. 178 Новая (см. табл. 1) По составу вакцины Штамм .82 Штамм .82 с адсорбированном на нем бруцеллезным фагом ТБ Таблица 3 Иммуногенные свойства комбинированной вакцины в сравнении с коммерческой Штамм (метод выращивания) Штамм .82 с фагом (глубинный) Штамм .82 (на твердой среде) прототип Штамм .82 (агаровая среда) Контроль Предложенный способ обеспечивает повышение иммуногенности вакцины против бруцеллеза животных, повышение производительности и снижение себестоимости вакцины. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза животных, включающий приготовление питательной среды, ее стерилизацию, внесение посевного материала из бруцеллезного штамма 82 с последующим культивированием, фасовкой и лиофилизацией, Количество морских свинок 10 10 10 10 Количество иммунных абсолютное число в 9 90 8 80 8 80 отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно вносят панкреатический гидролизат гороха и сои, панкреатический гидролизат казеина,сухой дрожжевой экстракт, цистин, твин-80 и пропинол В-400,осуществляют глубинное культивирование бруцелл штамма 82, а на выращенные бруцеллы сорбируют бруцеллезный фаг ТБ из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для глубинного культивирования используют питательную среду следующего состава. об.3 17524 перевар Хоттингера сыворотка крупного рогатого скота панкреатический гидролизат гороха и сои натрий хлористый панкреатический гидролизат казеина твин-80 глюкоза пептон ферментативный цистин сухой дрожжевой экстракт пропинол Б-400 дистиллированная вода