Способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью

изобретение относится к способу получения биологически активных веществ, входяпиисв состав травы или корней растения - молочая джунгарского ( Зирьогыа Зоопвагйса), Произрастающего на территории Казахстана.Полученные средства проявляют противоопухолевую активность и могут найти применение в медицине.Известен способ получения полифлавана - алхимика, основанный на экстракции измельченных корней манжетки тяньшанской в течении 2-4 дней водным этанолом при массовом соотношении сырья и экстрагенте 200-250, концентрировании полученного экстракта до получения Целевого продукта. Соединение проявляет противоопухолевую активность от 30,2 до 9 о 9 ъ( а.с. СССР М 1566695 от 10.06.88, А 61 К 35/78 ).Целью данного изобретения является усиление специфической активности.Поставленная цель достигается тем, что растительное сырье экстрагируют растворителем, в отличие от известного в качестве растительного сырья используют корни или траву молочая джунгарского ( Зирпогыа Зоопвапса ) его обезжиривают хлороформом или бензолом. Эксгракцию проводят в течении 2 - 3 суток смесью ацетонвода (1 1) при соотношении сырье-эксграгснт (1 Ю 0 -150 мл). Экстракт при температуре 40-45 УПЗРИВЗЮТ до Получения Целевого продукта.Качественный состав средств подтвержден данными качественных реакции, хроматографического поведения в различных системах растворителей, сравнения с достоверными образцами.ОПТИМЗЛЪНЬЭ УСЛОВИЯ ПОЛУЧВНИЯ СРЕДСТВ определены эксперимен тально и подтверждены данными, приведенными в таблицах 2,3,4,5изобретение иллюстрируется следующими примерами.500 г мелкоиамельченной травы молочая дяуягарского размером не более 2,5 мм обрабатывают бензолом дважды в течение трех дней для удаления липофильных веществ.Твердую фазу отделяют, высушивают на воздухе в течение 3-5 суток, двукратно настаивают водным ацетоном (в соотношении 11) при массовом соотношении сырья и экстрагенте 1(100 150). Общий объем экстракта 1350 мл. Полученный экстракт копцентрируют в вакууме на водяной бане при температуре Ц 0-45 С до сухого остатка. Выход 41 еъв пересчете на абсолютно сухое вещество.Средство РМД 1 представляет собой аморфный порошок коричневого Цвета, хорошо растворимый в воде, водном ацетоне, мало растворим в водном метаноле, ацетоне, не растворим в бензоле,хлороформе. ПСредство РМД 1 содержит смесь 21 вещества полифенолъного характера по данным метода хроматографии на бумаге.По данным хроматографического анализа, качественным реакциям вещества 17,10 отнесены к фенолокислотам, 8, 9, 21 флавоноидам, 11-20 н гидролизуемым дубильным веществам.Качественные реакции на содержание белков, кумаринов,сапонинов крахмала, флаванов отрицательны.качественный состав на содержание свободных сахаров, свободных аминокислот положителен В свободном состоянии в РМД 1 содержатся глюкоза и фруктоза, а из аминокислот - аргинин,пролин, серин, метионин.в герметически закрывающихся камерах восходяпппи методом. Высушенные хроматограмиы проявляли специфическими проявителями УФ-свет, пары аммиака, 1 ный водный раствор хлорида алюминия смесь 5 ного водного раствора нитрита натрия с 2 нои уксусной кислотой, раствором ванилина в серной кислоте для обнаружения фенолокислот, флавоноидов, дубильных веществ,отопуидиновый-проявитель для обнаружения свободных сахаров, 1 ный спиртовый раствор нингидрина для обнаружения свободных аминокислот.Для идентификации свободных сахаров и свободных амино кислот использовали В качестве свидетелей достоверные образцы сахаров и аминокислот.Количественный состав РМД 1 в процентном отношении сле дующий влажность 10,19, зольность 9,50, гидролизуемые дубильные вещества 26,41, фенолокислоты 2,88, флавоноиды 6,09,свободные углеводы 8,68, свободные аминокислоты 23,30, полисахариды 12,94.Влажность и зольность определены по ГФХ весовым методом(1) Количественное определение флавоноилов проведено методом спектрофотометрии на приборе 0 Ф 46, калиброванную кривую строили по рутину (2). Количество-дубильных веществ определено методом титрования комплексонометрического и титрования О 01 М раствором трилона Б. Содержание денолокислот определено методом титрования ОО 1 М раствором ЫаОН в присутствии метилоранча (2). Количественное содержание свободных сахаров определено методом прямого спектрофотометрирования на бумаге, стандартом явилась глюкоза (2). Содержание свободных аминокислот определено методом спектрофотометрии на СФ 46 (4). Содержание полисахаридов мето дом спектрофотометрирования после осаждения их из раствора250 г измельченных корней молочая джунгарского обрабатывали бензолом или хлороформом для удаления лилофильных веществ (1900) в течение трех суток. Твердую фазу отделяют, высушивают на воздухе в течение 2-3 суток, двукратно настаивают водным ацетоном (в соотношении 11) при массовом соотношении сырья и экстрагенте 1 (100-150). Общин объем экстрагенте 2300 мл. Полученный экстракт концентрируют в вакууме на водяной бане при температуре 4045 С досуха. Выход 8,4 д 9 ъв пересчете на абсолютно сухое сырье.Средство из корней молочая дкунгарского РМД 2 представ лнет собой аморфный порошок темнокоричневого Цвета, хорошоРМД 2 по данным хроматографического анализа на бумаге содержит 16 веществ полифенольного характера. Данные качественных реакций и хроматографического поведения приведены в таблице 1.На этих данных видно, что вещества 13,6,7,1 О отнесены к фенолокислотам, вещества 11-20-к гидролизуемым дубильным веществам, 22 вещество е неустановленной природы. Свободных фенолов и чтавоноидов в корнях молочая джунгарского нет. Качественные реакции наРмдгпо данным хроматографии в сравнении с достоверными образцами содержит свободные сахара глюкозу, фруктозу и свободную аминокиолоту серин.Хроматографирование проводили в тех же условиях, что и для средства РЫД 2, с теми же специфическими проявителями.Количественный состав препарата РНД 2 в процентном соотношении следующии влажность 2,93, вольность 6,27, гидролизуе мые дубильные вещества 40,70, фенолокислоты 1,90, свободные