3-кето-эвдесм-1(2), 4(5), 11(13)-триен-6, 12-олид, обладающий противоопухолевой активностью

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОВ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАНющх указанной активностью. Получение целевого соедииенияведут реакцией фенилселеннлпронэводного сантоннна в тетрагндрофуране с добавлением уксусной кислоты (полученного из 4-сантонина и диизопропиламида Ь 1 с последующим взаимодействием полученного енолята с дифенлднселенндом) с пероксидом водорода Выход 45, т.пл. 145147 С бруттофор-ла С,5 Н,д 03. Полученное соединена обладает широким спектром противоопухолевой активности ингибирует рост опухолевьш штаммов молочной железы(73) НнучкЮ-производдсггвеппое Внедренческое Ьдалос Процприя 1 пеТабпгаН(56) Рыбалке К.С. Природные сескви терпеновые лактоны, М. Медицина,1978, с. 320. Авторское свидетельство СССР(57) Изобретение относится к гетероцклнческим соединениям, в частности к 3 кетоэвдесн 1(2), 4(5), 11(3)трнен 6,12-опалу, которьт обладает противоопухолевой активностью. Цель въшвленме новым соединений, облада Целью изобретения является изыскание новых соединений, обледеневших противоопухолевьш действием и сравнительно низкой токсичностью.Изобретение относится к классу терпеноидов, конкретно - к сесквитерпеновому лактону эвдесманового типа,имеющему следующую структурную фор зотгш) (э) 21 (61)ЯВЛЯЕТСЯ НОЕЬЩ СВСКБНТЕРПЭНОВЫМ пак тоиом, обладающим противоопухолевой активностью, и может найти применение а химиотерапии эпокачественныщП р и м е р. К раствору 8 ммоль динзопропиламмда лития (Ара) приготовленного из 0,6 мл диизопроннл амина и 2,7 ил 1,д 7 молярного бутиллитня в гексане в 10 мл безводного тетрагндрофурана под аргоном при темературе 2 ВС медленно по каплям в течение 1 ч, прнпнвают 0,59 г(2 мноль) сантонина, растворенного в 15 мл ТПФ. Перемешивают в течене 20 мн при этой температуре дообразования енолята. После образования еноллта прибавляют быстро в течение 5 мин при -8 С 1,3 г ( ммоль) дифенилдиселенид в 10 мл сухого ТГФ содержащй 0,75 г (4 ммоль гексаме тилфосфорамид. Смесь перемешивают при температуре 78 С н течение 40 мин,затем повышают температуру до 4 ОС1 ч, контролируя по ТСХ образование фенилселенида. После полного образования фенилселениллроизводного реакцю останавливают добавлением 3 мл 10 ного раствора соляной кислоты. Температура реакционной среды поднимается до комнатной реакционную смесь разбавляют 20 мл серного эфира, затем проывашт водой и нейтрализуют избыток соляной кислоты насыщенным содовы раствором. Смесь от воды сушат над сульфатом магния, растворитель переч гоняют под вакуумом при 40 С(25 мм рт.ст.)полуцают продукт желтого цвета (смесь трех веществ).Полученную смесь хроматографируют на колонке с силикагелем (марки Л 100/160) при соотношении сумма т носитель 135. Элюируют первым эфиром,собирают.фракцн по 15 мл, выделение вещества контролируют по ТСХ, при этом из фракций 3-7 вьщеляют фенилселенмлпроизводное (11).К 0,27 г (074 ммоль) раствора полученного фенлселенилпроизводного сантонина в 10,5 мл ТГФ с заранее добавленной уксусной кислотой (0,1 мл охлажденной до 0 С, прививают не повышая темературы, 0,5 мл 302-ного раствора перохснда водорода. Смесь перемешивают при 0 С в течение 30 мин,затем нейтрализуют охлажденным до 10 С насыщенны содовым раствором(10 мл) до рН 7. Затем темературу доводят до комнатной, продукт реакции извлекают хлороформом (3 раза по 50 мл), экстракт промывают наСЫЩЕННЫМ БЗСТВОРОМ ХЛОРИДЗ НТрНЯ сушат над сульфатом магния 20 мин,растворитель уваривают под вакуумом при дОС (25 мм рт.ст.).Полученньт остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (марки Л 100/160) при соотношении сумманоситель 330, элюируют смесью гексан-эфир 37, собирают фракции по 15 мл контролируя по ТСХ. из фракции 2-6 выделяют дегидросантонин состава сн щ. тат. 145-1 а 7 с (метанол)Бы -0 д(с 1,2 хлороформ). Вьшод 0,219 г (0,89 мысль) д 52 в расчете на исходное вещество.Дегидросантонин хорошо растворим в хлороформе, этилацетата, ацетоне,спирте, ДСО, его необходимо хранть В ТЕННОМ МЕСТЕ.В Икчспектре наблюдаются полосы поглощения в области 1780 (С 0,-пактона), 1665, 1635, 1 б 19 смВ ПМРспектре присутствуют сигналы ангулярного метила синглет при 1,32 м.д. метила при двойной связи синглет при 2,17 м.д. лактоиного протона дублет при 4,78 мдд с Дд 10 ГЦ Чротонов зкзоишклического метилена н дублеты при 5,57 и 6,24 м.д. с 31,1 2,5 Гц для каждого и олефнновьш протоновдублеты при 6,28 и 6,71 м.д. с 1 7,5 Гц для каждого.Острая токсичность дегндросанто Нина изучалась в 12 ной концентрации в растворе диметилсульфоксида (ДМС 0) на интактных бельш беспороднх Мшах (весом 19-22 г) крысах (весом(110-130 г) обоего пола. При однократном внутрибрюшинном введении 1-ный раствор вещества в ДМС 0 сохраняется в течение 2-3 сут без химкофизических изменений. Полученные результаты обрабатывались статистически. ЛД 5 для мшшшй 11 О 10 мг/кг для крыс 200-230 мг/кг. В дозах в пределах ДД 5, и выше (200, 400, 500) проявлялось угнетающее действие животные погибали в состоянии общего угнетеня на 1-3 сут после воздействия веществом в виде днскординации движений, затруднительным дыщанием, расстройством желудочнокишечного трактаПри вскрытии павших животных макроскопически отмечены полнокровность внутренних органов, мелкоточечные кровоизлияния на стенках толстой и тонкой кишки.Хроническая токсичность определялась на крысах с перевиваемым опухолями. Максимально переносимые дозы(МД) вещества в растворе диметилсульфокснда при ежедневном внутрибрюшиином введении в течение 5 сутне НВЛЩДЗЛОСЬ ВЫРЗЖЕННОГО ТОКСНЧЭС кого действия на животных и их гибели При вскрытии забитьш в конце опыта ЖИВОТНЫХ ПЗТОЛОГНЧЕСКНХ НЗМЕНЭННЙсо стороны внутренних органов не выявлено.ПРОТНВООПУХОПЕВЗЯ ЗКТИВНОСТЬ ДЕГИдросантонна изучалась на белых бес породных КРЫСЗК С НСХОДНЫЩН перевиш ваемымм лимфосаркомой Плиссе, карциносаркомой Уокера, саркомой д 5 сли зистьш раком печени (РС 1) раком молочной железы (РЫК-1) саркомой М 1,лимфосаркомой Цлисса устойчивой к лейкосефдину рубомцину проспидину, в саркомой ДБ, устойчивой к РУСЗОЬШШНУ, З-фторугашшу и проспидину. Противоопухолевое действие вещества определялось при ежедневном внутрибрюшнном введении в растворе динетилсульфоксида в течение 5 дней в максимально переносимы дозах животных начали лечить после перевивкн опухолей с момента полвленя измеримъш опухолевым узлов. Контрольные и подопытные группы содержали по 8-12 животных. Для оценки противоопухолевой активности дегидросантонина пользовались процентом торможения роста опухолей, определяемым непосРЕДСТВВННО ПОСЛЕ ОКОНЧЗННЯ ЛЕЧЕНИЯРезультаты исследования обработаны статистически с вычисленнеи Ь критерия по Стьщденту.Вещество в максимально переносимой дозе (20 мг/кг) значительно тормозило рост рака молочной железы (РЫК)(81 д 2 Р (0,01), слизистого рака печен (РС 1) (7 б,9 Р 005), саркома М-1 (72,5 Р 005) лимфосаркомм Плисса (70,д 2 Р 0,01 саркомы д 5 (660,Р 0,05). На рост карциносаркомы Уокера вещество оказывало слабое ростотормозящее действие (д 3,02 Р 0,01).также исследуемое вещество в МД вызывало выраженный противоопухолевый эффект в отношении вариантов лимфосаркомы Плиссе, устойчивой к рубомнцину (810 Р 0,001) к пейкозфднну(67,32 Р 40,05) и сарконы 5, устойчивой к рубоммцину 91,22 Р 0,001),кпроспидину(50,2, Р.0,05)Лимфосар кома Плисса устойчивой к проспидину и саркомы 45 устойчивой к 5 фторура цнлу дегидросантонин оказывал перекРЕСТНУЮ резистентность (д 1,3-40,1,Р 70,05).Таким 05 РдЗ 0 Н дегидросантонин СРЭВННТВЛЬНО МЛОТОКСНЧЕН ПРН ВНУТРИбрюшниом введении в растворе ДМС 0 СЛЦБО в острых опытак для мшей 110140 нг/кг, на крысах 200-230 мг/кг). Вещество в МПД обладает выраженным противоопухолевым действием в отноч шении рака молочной железы (РНК),слизистого рака печени (гс-1), лимфо саркома Плисса н ее устойчивого. варианта к рубомнцину и лейкоэфдину саркомы М 1 саркомы 45 н ее устойчивого варианта к рубонишнну, проспидину (50,291,22 торможения). мало эффективно в отношении карциноч сарком Уокера (43,02).При сравнении со структурньм аналогом испытуемого вещества .сан тоником выявлено различие в спектре противоопухолевого действия. К аналогу мало чувствительным были слизистый рак печени (РС 1) (40,12) рак молочной железы (РЫК) (57,8) саркома М-1 (5652) лимфосаркоиа. Плиссе устойчивой к лейкоэфдину (4502) к рубомнцшну (З 7,3) и саркома 45 резистентной к рубоммцну (423) Нспытуемое вещество, напротив значительно тормозило рост слизистого рака печени (РС 1) (76,92), рака молочной железы (РЫК) (з 1 а 2), саркон М 1 (725) лимфосаркомы Плиссе устойчивой к лейкозфдину (б 7,32) к рубомнцмиу (8102) и саркоиы 45 резистентной к рубомицину (9 т 22).При сравнении с аналогом по наэначению-колхаммномпрепаратон растиТЕПЬНОГО ПРОНСХОЖДЕНИЯ ДеГНдРОСаН тонн в условиях эксперимента обладает в эквивалентных по токсичности максимально переносимы дозах (МЩД) другим спектром противоопухолевого действия в дозе 2,0 мг/кг при ежедневном внутрибрюшиинон введен животнн в течение 10 дней колкамии незначительно тормозил рост рака молочной железы (РНК) на 59.32,лимфосаркомы Плисса (54,42 н без эффекта в отношении саркомы 45 (2082) слизистого рака печени (РС-1) и саркомы М-1 (1 д 9). В сравнении с колкамиом изучаемый дегидросантоиин малотоксичен НД в кронческих опытах при внутрибрюшинном применении 20 мг/кг против 2,0 мг/кг копкаина. В отличие от колкамина к данному веществу высокочувствнтельны рак молочной железы (РНК), слизистый рак пе 2108чеки (РСЧ), саркома н-т, саркома 45,лиъфосаркона Плисса (ББ,О-В 1,41 торможения). Кроне того, испытуемое вещество значительно тормозило рост резистентных к рубоницииу лимфосаркомы Плиссе (63-81,0 Х) и к проспиднну, руболишну саркома 45 (5 О 291,22 торможения).Сравнение противоопухолевой активкости и токсичности дегидросантоника с капкан-гном и аЪ-сантоиинон представлено в табл. .Таким образом, дегидросантоннн обладает широким спектром противоопухолевой активности ингибирует рост опухолевых штат-снов молочной железы РНЮ (атм), слизистого рака печени (РС 1) 06,92) саркомн М-1 02,52) линъосвркомы Плиссели проспнднну (5021) В сравнении с широко применяемым в онкологической практике препаратом колханиион дегидросантонн малотоксичеи НПД в хронических опытах при внутрнбрюшмнион введении составляет 20 против 2 мг/кг для колкаммиа н обладает выраженной противоопухолевой активностью.СНДПЬЙЧЧ НЭОТИЭОТПШТППО ОПТПППВТ П ОХЕЦЧЛВСТП ЮГДРКДНЧВКХ С КЫБЦШПОП Иногтямитпщц 20 70,6 83.5 66.0 76.9 1 72,5 0,3 81.0 11,3 9. 10,1 50,2 копии-пл 1 О.0 55,4 - 10.0 25.0 Нд НА - - - - - оЧ-сднонп 20 66,2 м 64.3 10,1 57. 56.5 45,0 37,3 20, 42,3 - п р и в п ч о я и о. во - подсечки-ц пинен 1 С - вложившими гопррд с-н - парком 65. гсч - иль попярпд р почин Н - рн кнопочной плнщ вы - принц Ш-П.МН и Шд - уставшим приди мамочками описи в пиццерии-ц пот к гномами и пропиши - установи-о придя-ш инфаркта пинен к ритмику и проставит 0-45 ц ибомшп. а Ь-Мшпдншу к просидит - теч-штык придана прими 65 в дурманит. МВерстка Казпатент, Исполнитель А.Е.Бекенева Ответственный за выпуск Э.З. Фаизова