Способ получения комплексов включения 7-изопропоксиизофлавона.

(иприфлавон) и обладающего способностью всасывания в Фармакологически активной КОНЦЗНТОЗЦИИ.Указанная цель достигается тем. что согласно способу получения комплексов включения Тизопропоксиизофпавона. име ющего формулуизофлавон подвергают взаимодействию с а. Д) щиклодекстрином .гептакис-2.6.0-диметил- или 2-гептакис -2.3.б-три-0-метил-3 циклодекстрином. или цикподекстриновым.полимером с мол. м. 4000 в водной или водноорганической среде. при молярном соотношении 7-изопропоксиизофлавона и циклодекстринового компонента 123.3. с последующим выделением и сушкой целевого продукта.Установлено. что растворимость полученного соединения включения т унто в 10 раз выше по сравнению с растворимостью иприфлавсна введенного регзе. а уровень СОДСОЖЭНИЯ В КООВИ ОСНОВНОГО МЕТЭБОЛИТЗ выше в 15-20 раз. Установлена всасываемость пирифлавона в неизменной форме и в фармацевтически эффективной концентрации. Одним из доказательств образоваННЯ СОСДИНСНИЯ ВКЛЮЧЕНИЯ ЯВЛЯЕТСЯ увеличение растворимости иприфпавона в водных растворах.Растворимость иприфлавона в полученных соединениях включения приведена в табл. 1.Повышение растворимости наблюдается при использовании всех исследованных циклодекстриновых КОМПОНЕНТОВ.Суммируя результаты представленные в табл. 1, можно сказать. что растворимость иприфлавонового клатрата в 4 раза выше относительно активного ингредиента. чем растворимость иприфлавона регзе. и всасываемость его после перорального введения крысам минимум в 10 раз выше по сравне нию с уровнем содержания в крови. измеренном после введения свободного активного ингредиента в той же дозе. Неизменный уровень содержания иприфлавона составляет по крайней мере 25 от общегоколичества материала. который всасывается. При получении предлагаемого соединения включения процесс взаимодействия реагентов осуществляют в водно-органической среде. в качестве органического растворителя можно использовать спирт или кетон. Предпочтительно используют 50-ный раствор этанола. Выделение целевых продуктов ПРОИСХОДИТ при ОХЛЗЖДЕНИИ реакционных- растворов. Получают кристаллические про дукты. Можно осуществлять смешение в водном ацетоне одновременно с выпариванием растворителя. используя димеб или тримеб(диметил-циклодекстрин или триметил-циклодекстрин). или растворимый циклодекстриновый полимер, из реакционной смеси можно выдегчть твердый порошкообразный продукт тем выпаривания. сушки. распыления. сушки при температуре ниже ОС. или в случае с димебом путем нагревания раствора.П р ъ- м е р 1. Получение иприфлавонщиклодечстринового клатрата. имеющего молярное соотношение 12.11.0 г (392 ммоль) иприфлавона и 114.3 г (3383 ммоль) Д-циклодекстрина с содержанием влаги 12.361, растворяют в 2.25 л водного раствора этанола. составляющего 50 06. при 80 С. интенсивно перемешивая, и дают остыть до комнатной температуры. Осажденный кристаллический продукт отфильтровывают и сушат в течение 24 ч при б 0 С. что дает 96.4 г продукта в виде рыхлого порошка белого цвета. Размер частиц менее 90 у м. Содержание иприфлавона 10.8 мае/Ъ иприфлат-чн З чшкподекстрин 12. выход относительно активного ингредиента 94.71, (исходное соотношение иприфлафон З щиклодекстрнн 122.3).для того, чтобы доказать. что указанный продукт действительно является клатратом. проводят различные анализы термоаналитический анализ. дифракцию рентгеновских лучей и анализ растворимости.Термоаналитическое повеление меха НИЧВСКОЙ СМВСИ И СВОООДНЫХ КОМПОНЭНТОВ ЯВППЗТСЯ ПОЧТИ ОДИНЭКОВЫМ. НО ИЗМЕНЕНИЯ в клатрата. происходящие из- за нагревания. МОЖНО НЭб/НОДЭТЬ ТОЛЬКО ОДНОВОСМВНИО С ПЗЗПОЖВНИЕМ ЦИКЛОДЕКСТОИНЭ. При ИСПЫТЗ нии механической смеси дифференциальной сканирующей капориметрией (ДСК) при 115 С устанавливают. что эндотермический пик соответствует точке плавления иприф лавона. но В случае С кпатратоти пик не маблюдается. Механическая смесь показывает непрерывную потерю массы - в соответствии С уровнем содержания иприфлавона в интервале между 130 С и 25 ОС. нои в случае с клвтратами не наблюдают какой-либо потери в массе или высвобождении органических веществ в том же температурном интервале (анализ термического расширения. АТР).диаграмма. полученная в результате рентгеноструктурного анализа порошка механической смеси. состоит из добавочных сумм диаграмм порошковых компонентов. Однако диаграмма порошка из клатрата со держит меньше пиков и новые пики (2 д б.7 7.8 20.9). характеристические для клатрата и отличающиеся от характеристических пи ков В -циклодекстрина (21 - 4.5 10.612,3). а у иприфлавона составляют (2 д 5.8 11.5 17.3 22.0). указывая на новую кристаллическую структуру и. таким образом. подтверждая косвенно образование клатрата.Для того. чтобы провести испытания. 250 мл дистиллированной воды помещают в копбу емкостью 500 мл и нагревают до 37 С. Затем продукт в количестве. соответствующем 50 мг активного ингредиента. добавляют. затем суспензию. полученную таким образом. перемешивают при 100 об/мин. используя магнитную мешалку. Через определенные интервалы отбирают образцы проб по 2-6 мл и фильтруют на стеклянном фильтре. и после разбавления фильтраты исследуют фотометрически в смеси вода этанол в соотношении 11.Полученные результаты приведены в табл. 2.Растворение свободного активного ингредиента является относительно медленНЫМ. ОНО ДОСТИГЭВТ ВЕЛИЧИНЫ НЗСЬЦЦЭНИЯ иприфлавона (около 1.5 мг/мл) через 40-50 мин. В случае с образцами. содержащими иприфлавон В щиклодекстриновый клатрат. максимальную концентрацию растворенного иприфлавона получают уже через 1 мин. т.е. активный ингредиент растворяется сразу же так же происходит мгновенное растворение и в начале концентрация активного ингредиента может быть такой же высокой. как и двойной уровень насыщения. Растворение смеси иприфлавона и Зщиклодекстрина является более медленным. концентрация растворенного активного ингредиента достигает величины. определенной тогда, когда растворяют клатрат. только через 30-40 мин.Растворимость активного ингредиента определяют также при различных уровнях содержания рН. Полученные кривые растворимости при рН 1,3 (это соответствует кислотности желудочного сока. НС) и прирН 7.6 (это соответствует величине рН ки 2860шечника. фосфатный буфер) существенно не отличаются от величии растворимости. полученных в дистиллированной воде. соответственно растворимость активного ингредиента не зависит от рН в испытуемом интервале рН.П р и м е р 2. Получение иприфлавонв Д щиклодекстринового клатрата. имеющего молярное соотношение 12.0.5 г (1,78 ммоль) иприфлавона растворяют в 50 мл 96-ного этанола. и раствор. полученный таким образом, добавляют по каплям к раствору из 8.0 г (535 ммоль) Д щиклодекстрина с содержанием влаги13,3 я 50 мл дистиллированной воды в.течение 2 ч. затем смеси дают остыть до комнатной температуры. После интенсивного перемешивания еще в течение 16 ч полученный продукт отфильтровывают и сушат в течение 24 ч при б 0 С. чтобы получить 5.5 г продукта.Содержание иприфлавона 7.9 мас. . Мопярное соотношение иприфлавон циклодекстрин - 12.29. Выход относительно активного ингредиента 87. Продукт также содержит свободный циклодекстринП р и м е р 3. Получение иприфлавон-циклодекстринового клатрата. имеющего Мопярное соотношение 12.0.5 г (1.78 ммоль) иприфлавона растворяют в 10 мл ацетона в роторной ступке и добавляют 4.0 г (3.70 ммоль) а щиклодекстрина с содержанием влаги 10 мас. и 2 мл дистиллированной воды. Легкую суспензию. полученную таким образом. гомогенизируют. растирая до тех пор. пока не выпаривается растворитель. После этого продукт. полученный таким образом, сушат в течение 24 ч при б 0 С. Он содержит 11,1 активного ингредиента и также свободный а щиклодекстрин. Мопярное соотношение иприфпавона ка -цикподекстрину составляет 114.Примеры форм выпуска Фармацевтических составов, содержащих иприфлавонциклодекстриттовый клатрат в качестве активного ингредиента. и их биологические ИСПЫТЗНИЯ.П р и м е р 4. Получение комплекса включения иприфлавон-Димеб с молярным соотношением 12.1.2 г (1.О 3 ммоль) Димеба растворяют в 10 мл дистиллированной воды и добавляют 0.1 г (037 ммоль) иприфлавона. Полученную суспензию взбалтывают 4 дня. затем фильтруют на фильтре (54 и после этого осушают. вымораживают с получением 1.25 г продук та. Он содержит 5.67 активного компонента. Выход по активному компоненту 71П р и м е р 5. Получение комплекса включения иприфлавон-Тримеб с молярным соотношением 12.2.03 г (1 73 ммоль) Тримеба растворяют в 250 мл 50-ного этанола и добавляют 0.14 г (0.5 ммоль) иприфлавона. Полученный раствор перемешивают, затем высушиваю разбрызгиванием с получением 1.96 г продукта. Он содержит 6,9 активного компонента. Выход по активному компоненту составляет 96.61, молярное соотношение иприфлавонпримеб равно 123.5).2 г (02 ммоль) циклодекстринового полимера со средней мол. м. 4000 растворяют в 250 мл 50-ного этанола. затем поступают аналогично примеру 2, Количество получен ного продукта составляет 1.85 г. содержание в нем активного компонента 7,2. Выход по активному компоненту составляет 95,1.П р и м е р 7. Сравнивают растворимость известного препарата. содержащего иприфлавон-ямболана в таблетках. содержащих 200 мг иприфпавона (А). таблетки. содержащей 40 мг иприфпавона в форме Д щиклодекстринового клатрата. полученного согласно примеру 1. и таблетки. содержащей 200 мг игтрифлавона и 330 мгциклодекстрина при 37 С в 500 мл желудочного сока. Кусочек таблетки помещают в оборудование и определяют количество растворенного материала путем спектрофотометрии при 247 нм. .Составы испытуемых таблеток следующие таблетка А (известная как таблетка ямболап. К-020484). мг иприфлавон 200 амилум максдис 36 лактоза 60 ПВП 13 эсма спренг 30 тальк 7 стеарат магния 4.Результаты исследовании приведены в табл. 3.- иприфлавона растворяются из обычной таб летки. но в случае с таблеткой. содержащей одну пятую активного ингредиента в Форме щиклодекстринового клатрата. по сравне 2860нию с количеством активного ингредиента. присутствующего в обычной таблетке. количество растворившегося активного ингредиента удваивается и количество растворенного материала на 30 превышает максимальную величину. полученную при использовании обычных таблеток через 2 мин. В случае с таблеткой. которая содержит иприфлавон и а -циклодекстрин в форме механической смеси. растворение происходит несколько медленнее. но даже в этом случае количество растворенного активного ингредиента выше по сравнению с обычной таблеткой.В испытаниях на всасываемость используют самцов крыс весом 170-200 г. Спустя- 16 ч после обездвижения вводят иприфлавон в дозе 25 мг/кг (группа А). иприфлавон- Д-циклодекстриновый клатрат. приготовленный согласно примеру 1 (группа В)и иприфлавон- В щиклодекстриновуюотношению к активному ингредиенту, после этого животным дают пищу. для крыс водуМатериалы для испытания смешивают в течение 5 мин в 2 мл ПЪ-ного растворалцеллюлозы и вводят через желудочную трубку. Образцы плазмы собирают через 10 30 мин и 1 2 и 4 ч после лечения. используя кровь. которая вытекает из Чела Тетогапз после ее перерезывания у животных. которым проводят анестезию зфиром. Образцы крови помещают в пробирки с гепарином. центрифугируют. подвергают путч-фильтрованию и хранят глубоко замороженными в ампуле до последующего использования.Для того. чтобы отобрать образцы мочи. после обработки животных помещают в отдельные метаболические емкости. и собирают отдельно мочу и фекалии в течение 24 ч. Образцы мочи хранят до последующего использования. подвергнув глубокому замораживанию. Концентрацию неизменного иприфлавона и его основных метаболитов(Тгидроксиизофлавон) в моче и образцах плазмы определяют с помощью жидкостной хроматографии высокого давления.для того. чтобы провести жидкостное хроматографирование высокого давления. используют жидкостной хроматограф типа ЯР-18 и в колонке обратного тока Асьгозогб(размер зерна в случае с образцами плазмы 10 мм и в случае с образцами мочи 5 Дн). Скорость потока злюента 1.5 мл/мин, длина волны УФ-детектора 254 нм. скорость движения бумажной ленты 0.2 см/мин.В случае с образцами плазмы в качестве элюента используют смесь 0.05 м ацетатный буфер (рН 3) ацетонитрил 6040. и в случае с образцами мочи смесь ацетатный буфер ацетонитрил - 55 45. Внутренний стандарт г этаноловый раствор 2-метил 7 метокси-4 титроизофлавон (100 и г/мл). и для калибрования используют растворы. включающие 100 д г/мл и 10 у г/мл 7-гидроксиизофлавона в метаноле.для того. чтобы подвергнуть анализу образцы плазмы, к 1 мл плазмы добавляют 1 мл ацетатного буфера (рН 5) и фермент глюкуронидазу (арилсульфоназа) (100 Р/)разбавив в 10 раз 10 мл дистиллированной воды. и инкубируют при 37 С в течение 24 ч. После инкубирования добавляют 50 мл МаОН. смесь экстрагируют бензолом и центрифугируют. Отделяют органическую фазу. водную фазу подкисляют 400 мл 1 Н НС. и после добавчения 50 мл раствора внутреж него этанола. экстрагируют повторно 8 мл бензола. Органинескую фазу ценгрифугируют. выпаривают остаток, растворяют п 100 ПЛ ЭПЮЕНТЗ. ИСПОЛЬЗУЮТ ДЛЯ ИНЬСКЦИИ И измеряют 50 и л этого раствора.Уравнение кртлвой калибровки у и 8.2 к 0.08 коэффициент поправки 0.9099.Для того. чтобы проанализировать об разец тлстчп. т 0.5 мл мочи добавляют 0.5 и л ацетг-гт-сго буфера (рН 5) и 10 мл фермента/3 тлюкуринттдазы (арилсульфагаза) (1000 Н) и смесь экстрагируют 8 мл бензола и центрифугируъог. Органическутофазу отделяют. волнуюфазе полкислчкм, добавив 1100 мл 1 Н НСЯ. и после добавления 50 мл рае твора внутреннего этанола его экстрагируют еще 8 мл бензола органическую фазу центрифугируют. выпаривают и остаток растворяют в 100 ил элюента и иньекцируют 10 мп этого раствора в жидкостный хроматограф.Уравнение кривой калибровки у т 0911 х - 0.09 коэффициент поправки 0.9995.В табл. 4 показаны величины концентрации неизменного иприфлавотга в табл. 5 величины концентрации основного метаболита. определенные в крови животных.Группе А вводят иприфлалон рег ае. группе В - Предлагаемый клатрат и группе С - смесь иприфлавона и З - циклодекст рина. На каждом отрезке времени неизменный иприфпааон можно обнаружить только в случае группы В и его количество составляет 50-500 нг/мл. В случае с группой А. аналогично группе С. неизменный иприфлавон можно обнаружить только через некоторые периоды времени (через 2 и 4 ч). Чтокасается основного метаболита. то в каждом промежутке времени уровни плазмы в 1020 раз выше в группе А по сравнению с уровнями групп А и С.- которые определены через один и тот же отрезок времени. т.е. величины группы В находятся между 3 и 20 у Г/мл. тогда как в случае с группами А и С находятся в интервале от 0.2 до 1.0 д г / мл. Во всех случаях второй пик появляется в кривой плазмы через 2 ч. что может быть результатом интенсивного энтерогепатитного цикла и лучшей всасываемости в малом кишечнике.В табл. б показаны результаты жидкостной хроматографии высокого давления образцов мочи. в интервале 13-24 ч в образцах мочи не могут обнаружить неизменный иприфлааон. Однако можно проследить наличие основного метаболита (во всех случаях). Средняя величина содержания 7 гидрокси изофлавона 9526 г, что соответствует трехкратному повышению по сравнению с другими группами. Согласно опыту количество основного метаболита составляет 5055 от общего количества метаболита. и поэтому общее количество. выделившееся с МОЧОЙ, Е 2 0338 8191118. ЧОМ КОПИЧССТВО. КОТО рое определено Не Гагто.Так в образом. ь. случае с группой В 110.в т э время как в случае с группами А и С только 10 14 введенной дозы выделяется с мочой.После введения крысам иприфлавон З щиклодекстритсового клатрата определяют. что можно достичь повышения в 10-15 раз уровня содержания в плазме и в 3 раза повысить количество вещества. выделяющегося с мочой. по сравнению с контрольной группой.обладающих способностью всасывания в фармакологически активной концентрации,заключающийся в том. что 7-изопропоксии зофлавон подвергают взаимодействию с г у -цихлолекстрином. гептакис-Йб-Одиметил- или 2-гептакис-2.З.6-три-0-метилЗ щиклодекстриотом. или циклодекстриновым полимером с мол. м. 4000 в водной или