Способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью.

ПОСТЭВПВННЭЯ ЦеПЬ ДОСТИГЭВТСЯ ТЭМ. ЧТО измельченная трава или корни молочая толстокорневого предварительно обрабатывают бензолом или хлороформом для удаления липофильных веществ, затем настаивают в течение 3-4 дней водным ацетоном в соотношении 11 при массовом соотношении сырья и экстрагенте 1280-250,затем экстракт концентрируют до полутгения целевого продукта пир температуре водяной бани 4045 С.Качественный состав препаратов подтвержден данными качественных. реакций,хроматографического анализа в различных системах растворителей, сравнения с достоверными образцами.Оптимальные условия получения препаратов определены экспериментально и подтверждены данными. приведенными в таблицах 1 4.П р и м е р 1. 332 г измельченной травы размером не более 0,25 мм молочая толстокорневого обрабатывают хлороформом(2000 мл) в течение трех суток ( предварительная обработка хлороформом проводится с целыо удаления липофильных веществ). Твердую фазу отделяют. высуши ВаЮТ на ВОЗДУХЕ И В течение трех СУТОК ТРЕХкратно настаивают водным ацетоном(соотношение 11) при массовом соотношении сырья и экстрагенте 180, общий объем экстрагенте 2570 мл. Полученный экстракт концентрируют в вакууме на водяной бане при 11045 С досуха. Выход 8.55 (в пересчете на абсолютно сухое сырье).Препарат из травы (РМТ 1) преддгавляетл собой аморфный порошок светло-коричне вого цвета. хорошо растворимый в воде,водном этаноле. водном метаноле, водном ацетоне. малорастворим в ацетоне, не растворяется в хлороформе, бензоле. ПрепаратРМТ 1 содержит смесь 20 веществ полифенольного характера. Общая Хроматограмма полифенолов препарата РМТ 1 приведена на рис.1 а Данные качественныхреакций, хроматографического поведения приведены а таблице 1. На основании этих данных вещества 1.2,9,10,19,20 отнесены к фенолокислотам. 3-5 флавоноьтдам, 6.7.8.1 1-18 к гидролизуемьлгл дубильнымвецдествам. фенолокислоты 1.2,1 О 19 были выделены и идентифицированы как с достоверными образцами как эллаговая, галловая, дегидрогалповая и протокатеховал кислоты.Кроме полифенолов препарат содержит свободные сахара глюкозу, арабинозу. фру ктозу. а также свободные аминокислоты глутамин. цистеин, метионин, фенилала 2741нин. лейцин, аспарагиновую кислоту, что было установлено методом одномерной хроматографии на бумаге с метчиками углеводов и аминокислот.Н 15-ная уксусная кислота в герметически закрывающихся камерах восходящим методом. Высушенные хроматограммы проявляли специфичными про явителями УФ-свет. пары аммиака, 1-ныйводный раствор железо-аммониевых квасцов, 1-ный спиртовый раствор хлорида алюминия, 1-ный водный раствор хлорного железа, смесь 5-ного водного раствора нитрита натрия с 2-ной уксусной кислотой, 1-н ый раствор ванилина в серной кислоте для обнаружения фенолокислот,флавоноидов. дубильных веществ 1-ный спиртовый раствор нигридрина для обнаружения свободных аминокислот о-толуидиновый проявитель для обнаружения свободных сахаров.Количественный составпрепарата РМТ 1 в процентном соотношенииследующий влажность - 2,10, зольность - 7.15,гидролизуемьте дубильные вещества 42,80, фенолокислоты 1,63, флавоноиды 2,64, свободные сахара ,11.37. аминокислоты - 3,01, полисахариды - 28,99.На фиг.1 и 2 представлены хроматограммы полифенолов препаратов РМТ 1 и РМТ 2.П р и м е р 2. 370 г измельченных корней молочая толстокорневого обрабатывают бензолом или хлороформом для удаления липофильньтх веществ (2000 мл) в течение трех суток. Твердую фазу отделяют, высушивают на воздухе и втечение трех суток трехкратно настаивают водным ацетоном (в соотношении-М) при массовом соотношении сырья и экстрагенте 12150. общий объем экстрагенте 2415 мл. Полученный экстракт концентргаруэот в вакууме на водяной бане при 4045 С досуха. Выход 4.04 в пересчете на абсолютно сухое сырье.Препарат из корней РМТ 2 представляет собой аморфный порошок красно-коричневого цвета, хорошо растворимый в воде,водном метаноле, водном этаноле, водном ацетоне, мало растворим в спирте, ацетонеПрепарат РМТ 2 по данным хроматографии на бумаге. качественным реакциям содержит 10 веществ полифенольного характерах Хроматограмма нолифеттолов препарата РМТ 2 приведена на рис.1 б. Дан ные качественных реакций и хроматографи ческого поведения полифенолов РМТ 2 приведены в таблице 1. Вещества 1.21 О,9 отнесены к фенолокислотам, вещества 7.8.1548 к гидролизуемым дубильным веществам. Свободных фенолов и фпавоноидов в корнях молочая толстокорневого нет. Качест венныереакции напкрахмал. белкиПрепарат РМТ 2 содержит свободные сахара глюкозу арабинозу, срруктозу. из свободных аминокислот содержит глутамин, цистеин. аспарагиновую кислоту.Хроматографирование проводили в тех же условиях. что и для препарата РМТ 1. с теми же специфичными проявителями.Количественный состав препарата РМТ 2 в процентном соотношении следующий влажжчостъ - 4.10, зольность 6,49. гидролизуемьхе дубильные вещества 21,68 фе 1-голокислоты 0.18. свободные сахара 8.52.свободньхе аминокислоты-ОЬО. полисахариды д.43.Методы количественного определения использовали те же, что и для препарата РМТ 1. .П р и м е р 3. Для выяснения соотношения составных частей на полноту извлечения навески по 1 г сырья заль-тваъот различным соотношением водного ацетона в одинаковом объеме (см.табл.1).Из та блицы следует. что максимальный выход экстрактивных веществ и целевого продукта имеет место при соотношении воды и экстрагенте 11.Для выяснения соотношения сырья и экстрагенте на выход целевого продукта по 1 г травы или корней молочая толстокорневогозаливают различным количеством водного ацетона 11 (см.табл.2).Из таблицы видно. что оптимальным соотношением сырья И экстрагенте являетсядля выяснения влияния времени экстракции на полноту извлечения осуществлено настаивание 10 г травы или корней молочая толстокорневого водным ацетоном в соотношении 11 в течение 5 суток (см. табл.3).Из таблицы видно. что продление времени настаивания более 4 суток не приво дит к увеличению выхода экстрактивных.Препараты РМТ 1 и РМТ 2 прошли биоло гические испытания в Казахском НИИ онкологии и радиологии в лабораторииэкспериментальной терапии опухолей (Актпо определению противоопухолевой активности и токсичности препаратов прилагается).Проведенные экспериментальные исс ледования показали, что препараты из мо-т лочая толстокорневого мапотоксичны и задерживают рост некоторых видов транс-плантируемых опухолей. противоопухолевая активность препаратов РМТ 1 и РМТ 2 изучалась на белых беспородных мышах и крысах с исходными перевиваемыми лимфосаркомой Плиссе карциносаркомой Уокера. саркомой 45. карцикомой Герена. саркомой 180. саркомой М-1. раком шейки матки РШМ-б. эпидермаидной карциномой легких Лыоиса. лимфоцитарной лейкемией Р 388 и с лекарственно резистентными вариантами саркомы 45. устойчивой к сарколизину. 5 фторурацилу, лимфосаркомы Плиссе к рубо мицину и проспидину. Противоопухолевоедействие препаратов определялось при ежедневном внутрибрюшинном введении 2 -ного водного раствора в течение 10 дней в максимально переносимых дозах для мышей 30 И 40 мг/кг, для крыс - 35-45 мг/кг.Препаратысравнительномалотоксичны при внутрибръошинном введении в водномрастворе (Лдво в острых опытах на крысах 700-760. 82 О 87 О мг/кг, для мышей 560 610. 78 О-8 ЗОмг/кг).данные по противоопухолевой активности представлены в таблице 4.Растительный препарат из травы РМТ 1 проявил выраженный противоопухолевый эффект в отношении карциносаркомы Уокера (81.О. р 0.05). лимфосаркомы Плисса 05,2. р 0.05). карциномы Герена (7 О.1 . р 0.01). саркомы 180 (72,1 р 0,05). РШМ-б (62.0. р 0,01). саркомы 45 (60.8. р 0.05). ИС(56.О. р 0.О 1).Исследуемый препарат РМТ 1 в МПД вызывает существенный противоопухолевый- колхамином. препаратом растительного происхождения, препараты РМТ 1 иРМТ 2 малотоксичны МПД в хронических опытах составляет ЗО-Зби 40-45 мг/кг против 1.О 2.0 мг/кг для колхамина. В отличие от колхамина к данным препаратам высокочувствительная лимфосаркома Плисса. карциносаркома Уокера. карцинома Герена. РШгИ-Б, саркома 45 и саркома 180(6281). Кроме того. препараты значительно тормозят рост резистентной к сарколизину саркомы 45 (74) и к рубомицину лимфосаркомы Плисса (76236).Способ получения средства. обладающего противоопухолевой активностью. пуд ТЕМ ЭКСТРДКЦИИ. растительного сырья. О Т П И ч а во щ и й с я тем. что. с целью повышения специфической активности и расширенияСоотноше- Количество ние экстра экстрагенгента, воцаацетонспектра действия. в качестве растительного сырья испопьзуюттраау или корнимолочая толстокорневого (Зирпогыа рапуггпша), перед экстракцией сырье обезжиривают хлороформом ипи бензолом. а экстракцию проводят в течение 3-4 дней смесью ацетон водадззятьлх в соотношении 11. при соотношении сырье зкстрагент 12801250. и экс тракт упаривают.А С о от н о ш е н и е Выхо акст активных веществ.тхцшшониоч кхооткьшзьшьо ахззхцшш. жщэз спи зюоч ы-оюц 2 лето 2 цв . шзхьгшьикт ььхшьохт шхшц . юютлш Ьц Е Ьцыцф ТЕ . Так шць -ш. ы д Вы ощТы ЧЕК. взхшттхптх оп тьоцюхтпщхххтхсож 5 оьошщхцохоьоцоь пшзодох их шоьтцшцшасизв тцч шпиц Аи ы 1 т 2 щ 2 2 Ьхшхпхцох Адьою щшщо аОы ЫРЕЦ льош.мцщ Е