Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О

(51) 61 35/16 (2011.01) 61 39/135 (2011.01) 61 37/02 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О, включающий иммунизацию морских свинок ящурным антиген содержащим материалом с последующим забором крови и отделением целевого продукта,используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа О, ее вводят трехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 21 день,через 8 дней после последней инъекции антигена,осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 С в течение 20 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичным антигенами, после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы или флаконы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Мададов Малакша Фашанович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна Калисынов Берик Серикбаевич Есходжаев Олжас Умирзахович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ ЯЩУРА ТИПА О(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной иммунологии и может быть использовано в производстве диагностических сывороток для определения типовой и штаммоспецифической принадлежности вируса ящура в иммунологической реакции. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа О. 25402 Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной иммунологии и может быть использовано в производстве диагностических сывороток для определения типовой и штаммоспецифической принадлежности вируса ящура в иммунологической реакции. Известен способ получения гипериммушнной сыворотки к вирусу ящура типа О, включающий иммунизацию морских свинок ящурным антиген содержащим материалом с последующим забором крови и отделением целевого продукта(Салажов С.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки // Ветеринарные препараты - М Колос,1981.- с.73-74). Недостатком известного способа является то что он позволяет получить сыворотку высокой активности и специфичности. Задачей изобретения является разработка способа получения активной и специфичной сыворотки к вирусу ящура типа О, а также сокращение процесса иммунизации. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа О. Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О, включающий иммунизацию морских свинок ящурным антиген содержащим материалом, с последующим забором крови и отделением целевого продукта,используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивировашюй эмульсионной моновалентной вакциной типа О, ее вводят трехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 21 день, через 8 дней после последней инъекций антигена,осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 С в течение 20 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичным антигенами, после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы или флаконы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке. Изобретение осуществляется следующим образом. Пример 1. Две группы кроликов по 5 голов в каждой вакцинируют внутримышечно инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной из вируса ящура типа О в дозе 2,0 см 3. Первую группу через 14 дней ,а вторую через 21 дней проводят повторную иммунизацию кроликов. Препарат вводят в объеме 2,0 см 3 внутримышечно. Через 8 дней после второй вакцинации берут кровь,получают сыворотку и проверяют ее на активность 2 и специфичность в РСК на наличие типоспецифических антител к вирусу ящура типа О. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титром сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре,задержку гемолиза на 95-100. Результаты опыта,приведены в таблице 1. Из таблицы видно, что сыворотки, полученные при введении вакцины с интервалом 21 день,обладает более высокой активностью. Пример 2. Две группы кроликов но 5 голов в каждой иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной из вируса ящура типа О в дозе 2,0 см 3 трехкратно 14, 21 день. Обескровливание кроликов проводят через 8 дней после последней иммунизации. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови,сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин проверяют в РСК на активность и специфичность. Результаты исследования приведены в таблице 2. Из таблицы 2 следует, что сыворотка,полученная при гипериммунизации кроликов с интервалом 14 дней, сыворотка была активна 132,тогда как при гипериммунизации с интервалом 21 день, сыворотка была активна в разведении 1128 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типов А и Азия-1. Пример 3. Две группы кроликов по 5 голов в каждой гипериммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной из вируса ящура типа О в дозе 2,0 см 3 четырехкратно с интервалом 14, 21 день. Обескровливание кроликов проводят через 8 дней после последней иммунизации. Результаты исследования приведены в таблице 3. Из таблицы 3 видно, что увеличение кратности введения специфичного антигена не способствует увеличению титра антител в сыворотке крови гипериммунизированных кроликов. Пример 4. Группу кроликов по 5 голов иммунизируют введением моновалентной эмульсионной противоящурной вакциной типа О. Препарат вводят животным внутримышечно в объеме 2,0 см 3 трехкратно с интервалом 21 день. На 8 день после последнего введения вакцины кроликов обескровливают. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови, сыворотку инактивируют прогреванием при 60 в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Исследования показали, что полученная по предложенному способу сыворотка активна в разведении 1128 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами вируса ящура типа А и Азия-1. 25402 Таким образом, оптимальный интервал между введением вакцины для гипериммунизации кроликов составляет 21 день. Использование предлагаемою способа позволит получать высокоактивных типо и штампоспецифических ящурных сывороток для диагностических целей, при этом к исследованию подвергается афтозный материал, полученный от всех видов восприимчивых и лабораторных животных (вируссодержащая ткань от крольчат,морских свинок, мышат и вирус полученный в первичных и перевиваемых культурах клеток.) Внедрение разработанного способа получения гинериммунной сыворотки для диагностики ящура животных вызванных вирусом ящура типа О,позволит снизить себестоимость 1,0 см 3 гинериммунной сыворотки 2 раза. Таблица 1 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О после двукратной иммунзации в РСК Антиген Интервалы между введениями вакцины Титры комплементсвязывающих антител 116 132 Таблица 2 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О после трехкратной иммунзации в РСК Антиген Интервалы между введениями вакцины Титры комплементсвязывающих антител 132 1128 Таблица 3 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О после четырехкратной иммунзации в РСК Антиген Интервалы между введениям и вакцины ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О, включающий иммунизацию морских свинок ящурным антиген содержащим Титры комплементсвязывающих антител 132 1128 материалом с последующим забором крови и отделение целевого продукта, отличающийся тем,что используют кроликов массой 2,5 - 3 кг, которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа О, ее вводят 3 трехкратно в дозе 2,0 см внутримышечно с интервалом 21 день, через 8 дней после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 в течение 20 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичным антигенами, после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы или флаконы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационнной сушке.