Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1

(51) 61 35/16 (2011.01) 61 39/135 (2011.01) 61 37/02 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1,включающий гипериммунизацию морских свинок вируссодержащей суспензией с сапонином,последующим забором крови и отделение целевого продукта, при этом используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа Азия 1, ее вводят четырехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 14 дней, через 10 дней после последней инъекции антигена,осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 в течение 17 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами,после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Мададов Малакша Фашанович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна Калисынов Берик Серикбаевич Есходжаев Олжас Умирзахович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ ЯЩУРА ТИПА АЗИЯ-1(57) Изобретение относится к биотехнологии,частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежностей вируса ящура в серологических реакциях. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа Азия-1. 25401 Изобретение относится к биотехнологии, в частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежности вируса ящура в серологических реакциях. Известен способ получения гииериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1,включающий гипериммунизацию морских свинок вируссодержащей суспензией с сапонином,последующим забором крови и отделение целевого продукта (Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки// Ветеринарные препараты. М. Колос, 1981.- с .73-74). Недостатком известного способа является то что он не позволяет получить типоспецифическую сыворотку высокой активности и специфичности. Задачей изобретения является разработка способа получения активной и специфической сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1, а также сокращение кратности иммунизации. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа Азия-1. Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1,включающий гипериммунизацию морских свинок вируссодержащей суспензией с сапонином, последующим забором крови и отделение целевого продукта, при этом используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа Азия-1, ее вводят четырехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 14 дней, через 10 дней после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 в течение 17 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, полученную сыворотку инактивируюг в водяной бане при 60 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами,после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке. Изобретение осуществляется следующим образом. Пример 1. Используют 2 группы кроликов по 5 голов каждой,которых вакцинируют внутримышечно инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной против типа Азия-1 в дозе 2,0 см 3 . Через 14 дней проводят повторную иммунизацию кроликов. Препарат вводят в объеме 2,0 см 3 внутримышечно. Через 10 дней после второй вакцинации берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность и специфичность в РСК на 2 наличие комплементсвязывающих антител к вирусу ящура типа Азия-1. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титрам сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре,задержку гемолиза на 95-100. Результаты опыта,приведены в таблице 1. Из таблицы 1 видно, что сыворотки, полученные при введении вакцины с интервалом 14 дней,обладает более высокой активностью. Пример 2. Две группы кроликов по 5 голов в каждой иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной из вируса ящура типа Азия-1 в дозе 2,0 см 3 трехкратно с интервалом 7, 14 дней. Обескровливание кроликов проводят через 10 дней после последней иммунизации. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови,сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Результаты исследования приведены в таблице 2. Из таблицы 2 следует, что сыворотка,полученная при гипериммунизации кроликов с интервалом 7 дней была активна 116, а с интервалом 14 дней - 164 на три креста с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типов А и О. Пример 3. Две группы кроликов по 5 голов в каждой иммунизируют инактивированной эмульсионной моновакциной из вируса ящура типа Азия-1 в дозе 2,0 см 3 четырехкратно с интервалом 7,14 дней. Обескровливание кроликов проводят через 10 дней после последней иммунизации. Результаты исследования приведены в таблице 3. Из таблицы 3 следует, что сыворотка,полученная при гипериммунизации кроликов с интервалом 7 дней была активна 132, тогда как при гипериммунизации с интервалом 14 дней - 164 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типов А и О. Пример 4. Группу из 10 кроликов иммунизируют введением эмульсионной моновалентной противоящурной вакцины типа Азия-1. Препарат вводят животным внутримышечно в объеме 2,0 см 3 четырехкратно с интервалом 14 дней. На 10 день после введения вакцины кроликов обескровливают. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови,сыворотку инактивируют прогреванием при 60 С в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Исследования показали, что полученная по предложенному способу сыворотка активна в разведении 164 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами вируса ящура типа А и О. 25401 Таким образом, оптимальный интервал между введением вакцины для гипериммунизации кроликов составляет 14 дней. Пример 5. В реакции связывания комплемента(РСК) проводят сравнительное титрование сывороток, полученный по предлагаемому способу и коммерческих. В результате сравнительного титрования установлено, что активность сыворотки, полученной по предлагаемому способу составила 164, а коммерческого - 132. Использование предлагаемого способа позволит получать высокоактивных типои штаммоспецифических ящурных сывороток для диагностических целей, при этом к исследованию подвергается афтозный материал, полученный от всех видов восприимчивых и лабораторных животных (вируссодержащая ткань от крольчат,морских свинок, мышат и вирус полученный в первичных и перевиваемых культурах клеток). Использование разработанного способа получения гипериммунной сыворотки для диагностики ящура, вызванных вирусом ящура типа Азия-1, позволит снизить себестоимость 1,0 см 3 гипериммунной сыворотки в 2 раза. Таблица 1 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура Азия-1 после двукратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы Разведение сыворотки Титры между компле 12 14 18 116 132 164 введениями ментсвявакцины зывающих 116 Гетерологичный 7 типа А 14 Гетерологичный 7 типа О 14 Таблица 2 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура Азия-1 после трехкратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы Разведение сыворотки Титры между компле 12 14 18 116 132 164 1128 введениями ментсвявакцины зывающих 132 Гетерологичный 7 типа А 14 Гетерологичный 7 типа О 14 Таблица 3 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура Азия-1 после четырекратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы между введениями вакцины Титры комплементсвязывающих антител 132 164 Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1,включающий гипериммунизацию морских свинок 3 25401 вируссодержащей суспензией с сапонином,последующим забором крови и отделение целевого продукта, отличающийся тем, что при этом используют кроликов массой 2,5 - 3 кг, которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа Азия-1, ее вводят четырехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 14 дней, через 10 дней после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 в течение 17 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами,после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке.