Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа А

(51) А 61 К 35/14 (2006.01) А 61 К 39/135 (2006.01) А 61 Р 37/04 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа А, включает иммунизацию кроликов массой не менее 3 кг комплексным инактивированным ящурным антигеном,содержащим суспензию вируса ящура типа А штамма АК-2000 на физиологическом растворе(1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия 0,8, сапонин - 0,07. При этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2 см 3, а затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3, а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3, через 14 суток после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, и отделяют сыворотку общепринятым способом. Заявляемый способ позволяет получить высокоактивную (1128) и специфичную сыворотку к вирусу ящура типа А.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Мададов Малакша Фашанович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(56)Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки. Ветеринарные препараты. М. Колос,1981, с.73-74(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ ЯЩУРА ТИПА А(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежности вируса ящура в серологических реакциях. 20480 Изобретение относится к биотехнологии, в частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежности вируса ящура в серологических реакциях. Известен способ получения гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных,вызванных вирусом типа А, включающий иммунизацию продуцентов ящурным антигенсодержащим материалом с последующим забором крови и отделением целевого продукта, при этом в качестве продуцентов используют морских свинок Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки// Ветеринарные препараты- М., Колос, 1981, с.73-74. Недостатком известного способа является то, что он не позволяет получить типоспецифическую сыворотку высокой активности и специфичности. Задачей изобретения является разработка способа получения активной и специфичной сыворотки к вирусу ящура типа А, а также сокращение кратность иммунизации. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа А. Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа А, включает иммунизацию кроликов массой не менее 3 кг комплексным инактивированным ящурным антигеном, содержащим суспензию вируса ящура типа А штамма АК-2000 на физиологическом растворе (1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия 0,8, сапонин - 0,07. При этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2 см 3, а затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см, а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3. Через 14 суток после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, и при достижении необходимого титра в РСК(1128) проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены и взятия крови стерильной иглой. Далее полученную кровь выдерживают в течение 3 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка его обводят и выдерживают кровь при температуре 4-8 С в течение 15 ч, образовавшуюся сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами. При получении положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке. Изобретение осуществляется следующим образом. Пример. Используют группу животных из 9 кроликов, которых иммунизируют кроликов массой не менее 3 кг комплексным инактивированным ящурным антигеном, содержащим суспензию вируса ящура типа А штамма АК-2000 на физиологическом растворе (1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия 0,8,сапонин - 0,07. При этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2 см 3, а затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3, а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3. Через 14 дней после последней вакцинации животных тотально обескровливают. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови,сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность в реакции связывания комплемента(РСК) на наличие типоспецифических антител к вирусу ящура типа А. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титром сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре (Р.Т.), задержку гемолиза на 95-100. Результаты опыта, приведены в таблице 1. Из таблицы 1 следует, что сыворотка,полученная при однократной иммунизации кроликов, и взятая через 21 сутки, сыворотка была активна 116, через 25 дней после второй гипериммунизации - 132, а через 14 дней после третьей иммунизации сыворотка имела активность в разведении 1128 с гомологичным антигеном и показывала отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типов Азия-1 и О. 20480 Таблица Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа А в РСК Антиген Кратность введения антигена 1 2 3 1 2 3 1 2 3 День взятия крови после введения антигена 21 25 14 21 25 14 21 25 14 Таким образом, заявляемый способ позволяет получить высокоактивную (1128) и специфичную сыворотку к вирусу ящура типа А. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа А, включающий иммунизацию продуцентов ящурным антигенсодержащим материалом с последующим забором крови и отделением целевого продукта, отличающийся Титры комплемент связываю щих антител 116 132 1128 тем, что в качестве продуцентов используют кроликов массой не менее 3 кг, которых иммунизируют антигеном, содержащим суспензию вируса ящура типа А штамма АК-2000 на физиологическом растворе (1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия 0,8,сапонин - 0,07, при этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2,0 см 3, затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3, а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3.